体外培养肺泡上皮细胞中卤代气体浓度的控制方法

该方法有助于回答肺损伤和修复研究领域的一些关键问题，如检测卤素辅助作为急性呼吸窘迫综合征的潜在新疗法。这种技术的主要优点是，它依靠一种非常简单的方法培养细胞，并把它们暴露在卤化剂中，以达到精确和受控的浓度。要建造气密室，请使用容量为 6.5 升的密封聚丙烯盒。

在箱体侧壁底部钻一个直径为 2.5 厘米的孔。然后插入一个带绿色标记的波纹管，作为气体空气混合物输入管。用硅胶密封。

接下来，在对面侧壁的顶部钻一个直径为 2.5 厘米的第二个孔。插入另一个带红色标记的波纹管，并将其与木炭过滤器连接，该滤芯将作为气体空气混合物输出管。然后用硅胶密封。

随后，在墙的中心钻一个直径为四毫米的紧孔。插入短输液管，用旋转的雄性诱饵锁在歧管上连接。将其插入气体分析仪，然后用硅胶密封。

然后将数字温度计放在气密室内。在实验室抽油机罩下，定制麻醉机电路，通过二氧化碳切换一氧化二氮气体管路。将加热加湿器插入麻醉机和气密室之间的管道中，使气流混合物加热至约 37 摄氏度。

用绿色标记的波纹管将气密室插入定制的麻醉机回路。接下来，将气密室放在设置为 37 摄氏度的热板上。将含有人类至上细胞的六井板放入气密室并密封盖子。

调节气体流速，快速获得5%的CO2。然后打开卤化剂蒸发器并调整所需百分比。达到目标值后，将新鲜气体流量降低至每分钟 1 升。

只要实验需要，气密室就可以保持这种气体流速。随着时间的推移，介质中sevoflurane和异氟兰浓度的相向情况相似。卤化剂的所需浓度确定后，浓度立即上升超过第一小时。

然后到达一个高原，一直持续到卤化剂的管理停止。管理中断后，浓度在一小时内降低。此处显示的气体分析仪测量的气密室中卤化剂的分数。

这个过程相对便宜，而且很容易采用，即使研究人员以前从未操纵过气密室。按照这个程序，可以执行其他方法，如蛋白质和RNA定量，免疫荧光，蛋白质渗透性和自由运输的测量，以回答有关卤化剂在上皮肺损伤期间的具体影响及其分辨率的问题。该技术开发后，可为急性呼吸窘迫综合征领域的研究铺平道路，以进一步研究ARDS期间上皮肺损伤的机制，并测试新疗法。