该协议可用于诱导肺高血压和右心室的功能测量。Sugen低氧模型易于实施,可以在诱导后两到三周内重新概括肺高血压的一些特征。利用这个模型,我们可以确定与疾病发展有关的新途径。
我们可以确定新的靶点并测试其治疗潜力。在开始感应程序之前,将氮气罐固定到缺氧室附近,并设置氧气控制器在 10% 氧气点。接下来,将新鲜准备好的SU5416溶液装入一个装有25量针的毫升注射器中,并手动约束第一个要注射的动物。
抓住皮肤形成与脊柱平行的帐篷,确保紧紧抓住后背,避免被鼠标咬伤。将针头皮下插入松弛皮肤的侧翼,与皮肤平行,并交付 100 微升的注射器内容物。10秒后,取回针头,将动物返回到笼子。
当所有动物都注射后,将小鼠放在通风的缺氧室中。对于缺氧暴露,确认腔室配有氧气传感器,用于测量氧气水平,每三天打开腔室不超过 20 分钟,用于清洁和添加食物和水。每天检查动物是否有压力迹象,并连续三周重复SU5416注射。
在启动压力测量程序之前,准备 Y 管接头并使用手动模式检查呼吸机的功能。将吸气压力设置为不到一厘米的水,以避免巴罗风湿,并设置呼吸速率为每分钟110次呼吸。切割 20 量表血管内导管,创建气管管并打开压力体积控制单元。
启动数据采集软件,将压力体积导管放在 37 摄氏度水浴中 15 毫升 PBS 离心管中。然后根据制造商的协议校准导管。将鼠标放在加热垫上,放置直肠探头以进行体温监测。
接下来,确认麻醉小鼠对手趾捏缺乏反应,并剃光颈部和胸部区域。用手术胶带固定小鼠的四肢,并在宫颈皮中做一厘米的切口。使用棉尖施用器,钝化分离的帕罗蒂德和亚曼迪布唾液腺,以暴露气管背后的肌肉。
小心地切割肌肉,以完全暴露气管,并使用剪刀在气管细管之间做一个小切口。插入准备好的气管管,取出血管内导管的金属导管。然后将导管连接到呼吸机,通过手动轻轻充气肺来验证气管位置。
用胶带固定位置。对于右心室压力测量,在西腓过程和上腹部做一厘米的皮肤切口,从中线到西腓,并小心地在两侧横向移动,将皮肤分离到胸部和腹部壁上。打开腹腔,小心切开隔膜,注意不要伤害跳动的心脏或肺部。
并使用棉尖施用器轻轻去除中压。将压力导管靠近鼠标,并使用装有针头的棉尖施用器在右心室的非典型远点部分进行刺伤。小心地用压力导管更换针头,将压力导管插入与右心室方向平行的带头,尖端朝向肺动脉。
观察压力波跟踪,确保导管的正确定位。一旦压力信号稳定下来,暂停呼吸并获取至少三个测量值。记录完所有测量值后,小心地将导管返回到水浴中充满 PBS 的离心管。
在这里,显示了代表性的压力曲线和观察期结束时右心室压力的定量分析。缺氧后肺动脉的组织学分析加上SU5416治疗表明,与正常动物相比,中壁厚度增加。小麦胚芽粘胶素染色评估心肌细胞肥大表明,缺氧加上SU5416暴露导致心肌细胞大小和右心室肥大显著增加。
此外,通过富尔顿指数的测量对右心室肥大进行形态评估,证实低氧动物右心室肥大增加。执行功能测量对于避免出血非常重要,因为这会对研究结果产生负面影响。该协议也可用于诱导肺高血压的大鼠只有轻微的修改。
值得注意的是,大鼠只有一次苏根注射足以诱发肺高血压。