我们进行第一种治疗,基于甲状腺癌模型中的微RNA抑制剂。这些开发疗法为治疗这种疾病显示出希望。这种类型的正畸模型,使用系统的治疗传递途径,有助于验证新的微RNA药物。
虽然我们使用正畸模型将人类甲状腺癌细胞植入小鼠甲状腺,但这些模型对于其他癌症类型可能是全身的。与朱莉娅·拉米雷斯-莫亚和阿德里安·阿库纳一起展示手术过程将是拉克尔·阿罗查·里埃斯科。她是我们研究所的技术员
建立CAL-62人甲状腺癌细胞系不完全介质后,在4摄氏度的PBS的50微升中悬浮1倍10至第6细胞等同物,并混合与同等体积的地下室膜基质的细胞。将细胞装入1毫升注射器,配备27根量具半英寸针,皮下将100微升样品注射到6周大免疫缺陷阀C裸鼠的左侧侧翼。注射两周后,在1点5毫升管中加入160微升室温中室温的缓冲液或控制治疗缓冲液。
并立即涡流溶液10秒,以确保混合物的复合。在50摄氏度下孵育治疗溶液30分钟,随后在微型离心机中短暂离心。然后,用新鲜的PBS和彻底的混合稀释沉淀处理复合物六倍。
将整个200微升的治疗直接注射到肿瘤中。每周向每个实验动物注射50微升,每升40毫克D-路西芬基质溶液皮下2次。确保确认在异氟麻醉后对手趾捏缺乏反应。
将动物放在体内生物发光成像系统的腔室中,根据标准协议使用体内成像软件对生物发光信号进行成像。然后分析肿瘤的生长。使用 T 检验比较两种治疗方法并确定显著性与生长差异。
对于正畸甲状腺肿瘤细胞接种暂停在PBS的5微升中释放CAL-62细胞,并在皮下将100微升镇痛剂和100微升抗生素注射到7周大的瓣膜C裸鼠中。在确认对手趾捏没有反应后,将动物置于解剖显微镜下,用碘多莫酮对动物的脖子进行消毒。接下来,在皮肤上做一个大约2厘米的切口,并取代唾液的格兰斯暴露颈部。
使用解剖钳和/或剪刀解剖带状肌肉以暴露气管和甲状腺,并使用 10 微升注射器,将 5 微升体积的肿瘤细胞注入位于十分软骨一侧的右甲状腺球。当所有细胞都已交付,重新定位唾液的牙,并使用丝绸编织,涂层,不可吸收的缝合线关闭切口。然后将碘多莫酮涂抹到伤口区域,将鼠标放在热毯上进行监测,直到完全恢复。
在甲状腺内细胞注射两到三周后,如所证明的,准备治疗方案,通过麻醉甲状腺肿瘤携带动物静脉鼻窦的逆轨道注射,静脉注射。在这个具有代表性的实验中,肿瘤内注射无微RNA146B抑制剂的生长在负对方面受到显著抑制。与控制性肿瘤相比,在低水平、抗肿瘤治疗的肿瘤中,也观察到一些增殖标记的肿瘤内表达水平。
此外,可以通过分析肿瘤提取的RNA或蛋白质来研究微RNA靶点的恢复。共同揭示个体微RNA的体内抑制是有效的,可用于甲状腺癌的治疗。如证明,对小鼠建立的甲状腺肿瘤进行组织学分析,可对肿瘤周围的上皮细胞进行染色,揭示肿瘤组织的甲状腺毛囊结构。
值得注意的是,将微RNA146B抑制剂静脉注射到小鼠体内,与经过控制治疗的动物相比,肿瘤体积显著下降。此外,新描述的微RNA 146B靶在原发性肿瘤中的表达,在抗微RNA146B治疗后增加,进一步突出了抑制非原性微RNA表达的潜力,从而恢复其靶基因作为甲状腺癌的治疗。这项技术,以及随后的利平结果,为探索基于非固化RNA治疗甲状腺癌的新疗法提供了可能性。