使用 PDMS 的高通量牵引力显微镜揭示了转化生长因子的剂量依赖效应 - 对中皮到中位过渡的影响

我的实验室对机械生物学感兴趣，它研究细胞如何发挥和受到机械力的影响。我们可以量化机械生物学的一个方法就是测量细胞收缩性。在粘附细胞中，收缩表现在对细胞基板施加的牵引力中。我们使用通常称为牵引力显微镜或 TFM 的方法量化这些力。TFM在各种各样的不同方法中实现，但一个常见的方面是，它是一种相当连续和缓慢的实验室技术，通常在像这里这样的单道菜中完成。这限制了我们一次评估一个人口或条件。在整个细胞培养改善前一段时间，但创建多井菜，我们认为，这不是伟大的，我们可以TFM与相同的增加吞吐量和相同的时间和试剂效率？这是我们的解决方案。因此，我们创造了一个96井牵引力盘。它看起来非常类似于传统的96井组织培养皿，然而，与这道菜，我们不仅可以检查96种不同的细胞培养条件，但也量化其细胞收缩性。这提供了一个比单盘方法更高的吞吐量解决方案，使我们能够检查不同的细胞条件和收缩反应。在癌症转移期间，癌细胞从初级部位传播到二级部位，在我们的体内传播疾病。癌细胞的这种转移行为占癌症相关死亡的90%。上皮癌细胞获得更迁移和侵入性表型的拟议机制之一是上皮-乳质过渡，EMT。在EMT期间，他们变得更加迁移和侵入，改变他们的身体行为。为了更好地了解这些物理行为的变化，我们利用软硅基质测量通过TGF诱导的小鼠乳腺细胞收缩的变化，在这项研究中，我们调查了TGF-影响细胞物理行为的不同浓度和孵化时间。聚二甲基硅氧烷是一种非常合规的橡胶，最低 Young 的模量约为 0.6 千帕。这种材料的刚度也可以使用不同浓度的交联剂（包括 SYLGARD 184.To测量我们使用的流变仪的PDMS的机械性能。混合 PDMS 的 A 部分和 B 部分后，以一对一的重量比加上指定重量百分比的固化剂，将准备的批次装载到流变表板上。确保装载足够的样品以完全覆盖主轴区域。确保主轴完全接触样品，边缘没有空位，这一点很重要。任何额外的样品应仔细修剪，并擦掉板。在0.5%Newsha的振荡剪切应变下进行时间和频率扫描，测量每个样品粘弹性的最终存储模量和时间依赖性。