原位杂交的色原性杂交是HPV相关头颈部癌症诊断的工具

HPV RNA CISH 允许检测活跃的人类教皇瘤病毒感染。由于原位杂交目标HPV RNA，这种技术允许病毒的活性转录的可视化。具有精确的空间分辨率和良好的诊断性能。

HPV 的检测可能支持诊断几种与 HPV 相关的病变，如口咽鳞状细胞癌或宫颈肿瘤。它也可能影响预后。制备缓冲液和反染色试剂后，在大型烧杯中制备一个 x 靶量检索试剂，将 70 毫升 10 倍靶量检索试剂添加到 630 毫升蒸馏水中。

将烧杯放在带磁力搅拌器的加热板上，用铝箔盖住。在100摄氏度下煮沸其内容物10至15分钟，确保煮沸时间不超过30分钟。要阻止幻灯片上的过氧化物酶活性，将以前去甲酸并放置在幻灯片架中的组织部分，将四到六滴（刚好够覆盖样品）的过氧化物氧化氢添加到每个幻灯片中，并在室温下孵育 10 分钟。

在室温下用蒸馏水清洗两次滑梯两分钟。要打破RNA组织部分的RNA组织边界，首先用爪从沸腾的铝箔中去除铝箔xTRR，然后停止搅拌。缓慢而非常小心地浸入滑架。

再次用铝箔盖住烧杯，孵育15分钟。使用爪立即将热滑架转移到蒸馏水浴中，然后洗涤两分钟。然后用新鲜的100%乙醇清洗幻灯片两分钟，让它们在室温下干燥两分钟。

接下来，使用疏水屏障笔在每个样品周围绘制一个屏障，并让它干燥至少五分钟。对于蛋白酶消化，将幻灯片放在湿度控制托盘中，并添加每个样品约四滴蛋白酶 Plus。用盖子盖住托盘，在 40 摄氏度下将其插入杂交烤箱 30 分钟。

从烤箱中取出托盘，然后取下滑架。一次工作一个幻灯片，快速清除多余的液体，将幻灯片放在浸在装满蒸馏水的染色盘中的幻灯片架中。在室温下用蒸馏水清洗两次，持续搅拌。

要开始混合，请轻点幻灯片以去除多余的液体，并将其放回幻灯片架中。从烤箱中取出预热的HPV探针，并添加大约四滴，以完全覆盖每个部分。用盖子盖住托盘，在 40 摄氏度下将其插入烤箱两小时。

完成孵育后，从烤箱中取出托盘并拆下滑架。一次一张幻灯片，快速去除多余的液体，将幻灯片放在浸入一个填充一个 x 洗涤缓冲液的染色盘中的幻灯片中，在室温下用不断的搅拌方式清洗幻灯片两分钟，然后用新鲜的一个 x 洗涤缓冲液重复。轻点并轻拂以清除幻灯片中多余的液体，然后将它们再次放在幻灯片架中。

每节添加大约四滴室温 AMP1，以完全覆盖每个部分。用盖子盖住托盘，在 40 摄氏度下将其插入烤箱 30 分钟。从烤箱中取出托盘后，拆下滑架。

一次工作一个幻灯片，快速去除多余的液体，将幻灯片放在浸有一个 x 洗液缓冲液的染色盘中，在室温下用不断搅拌洗涤两分钟，然后用新鲜的一个 x 洗涤缓冲液重复。在适当尺寸的管中分配相同数量的 DAB-A 和 DAB-B 溶液滴，使每个部分约 120 微升 DAB 基板和涡流。从幻灯片架上取下每张幻灯片，然后轻点以去除多余的液体，然后放回幻灯片架中。

将 DAB 混合物的大约 120 微升移液到每个组织部分，确保覆盖这些部分。在室温下孵育10分钟，然后进行反污。将每杯板条放置一滴安装介质，然后将板条放在幻灯片上，让其风干。

几个小时后，使用手稿中描述的光学显微镜进行评估。如这里描述的头部和颈部鳞状细胞癌，在细胞质或肿瘤细胞核中出现棕色双核染色，定义的阳性情况。结果分为两个分数，RNA CISH高和低分，观察20倍目标。

RNA CISH评分染色被认为是低，当观察到低于50%的肿瘤细胞，并覆盖不到80%的细胞表面。另一方面，RNA CISH得分高，当观察到超过50%的染色癌细胞，或染色表面超过80%以上的肿瘤细胞。人们不应该让幻灯片干涸杂交。

别忘了预热探头。对于每个样品，执行阳性和阴性控制，以评估RNA的质量。