碳-11放射性标签允许小化合物用于正电子发射断层扫描或PET，而无需改变分子。这对于研究受体表达水平至关重要。碳-11无线电标签的优点是，我们可以使用PET直接评估SNAP的结合动力学对黑色素浓缩激素受体的实时性。
SNAP作为黑色素浓缩激素受体拮抗剂将有助于更好地了解这种受体及其与代谢条件如肥胖和糖尿病的关系。在血脑屏障上表达的 Efflux 运输器会显著阻碍放射性药物用于中央受体表达成像。因此，在体外评估痕迹非常重要。
SNAP的自动放射性合成广泛适用于具有易于评估的甲基群的放射性标记低分子量化合物。一旦确定，此程序可以适用于其他化合物。协助示威的将是高级博士生莎拉·普法夫和特蕾莎·巴尔伯。
为了开始碳-11 SNAP合成，建立了一个干净的碳-11自动化合成模块，并配有适当的试剂和材料。在模块计算机上启动 SNAP 合成过程，该过程将从系统检查和调理开始。在模块准备进行 C-11 交付前约 30 到 40 分钟，选择回旋加速器上的 C-11 二氧化碳目标，然后以 65 微微束启动光束。
一旦模块准备好交付，关闭内窗和外门。确认 CO2 疏水阀已冷却至至少 40 摄氏度，甲烷陷阱已开始冷却。一旦回旋加速器产生了大约 120 千兆的 C-11 CO2，点击模块软件中的"确定"，打开从目标到 CO2 陷阱的路径。
在回旋加速器计算机开始向模块提供 C-11 CO2。在模块计算机上监控活动转移，并确保在三分钟后将其还原为二氧化碳至甲烷。监测过程中产生的甲烷被冲到甲烷陷阱，并通过碘烤箱循环转化为甲基碘化物。
在转换序列的末尾等待，因为副产品从甲基碘化物陷阱冲洗到排气，然后通过单击"确定"确认反应器已准备好接收活动。当甲基碘化物从陷阱中释放出来，通过甲基三叶酸烤箱冲洗并困在反应器中时，对系统进行监控。当反应器中的活动确认捕获已完成时。等待反应混合物在75摄氏度下反应三分钟。
然后监测系统，当反应混合物冷却到35摄氏度以下，用1.5毫升的水淬火。当反应混合物加载到 HPLC 喷射回路中并注入半预备 HPLC 柱时，监控系统进行监控。在色谱进行时，观察紫外线和伽玛探测器的痕迹。
当产品峰值开始出现时，手动开始收集模块中的圆底收集瓶中的产品。当伽玛信号低于大约 400 个计数/秒时，手动结束收集。在氦气压力下将产品装载到固相萃取盒上时，观察圆形底部烧瓶中的液位。
一旦烧瓶是空的，液体通过 SPE 墨盒，单击"确定"开始清洗夹在墨盒上的产品。然后监控产品收集瓶中的活性，因为产品首先从墨盒中洗入小瓶，然后用 0.9% 盐水溶液稀释。观察产品溶液在氦压下通过无菌过滤器转移到产品小瓶。
当传输完成时，关闭产品输出阀。当放射性跟踪器到达产品小瓶时，测量绝对放射性产量。然后使用铅屏蔽注射器将示踪剂的 100 微升转移到小瓶中进行质量控制。
将质量控制样品带到屏蔽质量控制工作区。将 40 微升的 QC 样品放入气密注射器中，将其装入配备分析柱的制备 HPLC 仪器中并注入产品。在 HPLC 运行期间执行其他质量控制测量。
一旦 HPLC 运行完成，从放射性检测器集成色谱中的所有峰值，以确定 SNAP 放射性化学纯度是否大于 95%，集成 UV 色谱中的峰值以确定产品的化学纯度。使用 UV 产品峰值下的区域计算特定活动。一旦产品被确认满足使用要求，将无线电跟踪器释放到实时动力学实验实验室。
实验前至少30分钟用DPBS清洗准备好的野生细胞或转染细胞，并加入两毫升无血清生长介质。为了阻止转染细胞，在二甲基磺胺中加入20.4毫摩尔溶液的0.98微升。在斜面上孵育细胞30分钟。
然后打开实时检测仪器和相关计算机。打开控制软件并选择一个目标。将位置数设置为两个，检测时间设置为三秒，检测延迟时间设置为两秒，将第一阶段的名称设置为基线。
将细胞培养盘插入设备倾斜支撑中，底部有细胞杆。确保细胞杆被细胞培养培养所覆盖。开始 10 分钟的背景测量并设置文件名和路径。
将时间刻度设置为分钟，将核素收集设置为碳-11。配置图形以显示背景、目标和背景减去的目标数据。一旦无线电示踪剂被交付并批准使用，请采取小样本进行检测。
计算所需的无线电示踪剂溶液体积，并准备移液器。在仪器软件暂停运行，并等待菜旋转停止。打开设备盖，将支撑装置向左转动 90 度，使用准备好的移液器添加无线电示踪器，然后将设备返回到初始位置。
合上设备的盖子，立即恢复实验。让实验运行 20 分钟，然后再结束实验。处理和分析数据，以评估单元中的 SNAP 吸收。
现在，对于DMSO处理的控制细胞培养菜和野生型细胞系，可以重复该程序。使用非PGP表达野生细胞进行实时动力学检测，PGP表达细胞以维帕米尔作为PGP抑制剂预先阻断，并解除阻止PGP细胞。未处理的细胞和车辆处理的细胞之间没有显著差异。
碳-11 SNAP在野生细胞中快速积累，而在PGP表达细胞中未观察到积累。预阻断具有维拉帕米尔的PGP外流运输器，导致PGP细胞中的SNAP积累与野生细胞相当。结合实时动力学测量，这种设置使对低分子量化合物的药代动力学有广泛的了解，因此对于放射性药物的临床前开发非常重要。
时机和组织是成功的碳-11无线电合成和随后的实时动力学实验的主要成分，因为碳-11的半寿命只有20分钟。由于碳-11的半寿命短，本程序的许多部分同时执行。对于每个参与者来说，了解其角色的范围和时间非常重要。
产品安全和辐射防护是放射性药物制备的关键。所有实验必须遵循尽可能低的可合理实现或ALARA原则，以限制操作员的辐射暴露。
