使用微X射线计算机断层扫描与磷酸制备可视化人类纤维肌组织

我们实施带磷酸的微CT，以增强人体球状保持韧带的非侵入性研究中的软组织对比度，这是轨道区域内的一种微妙结构。该协议经过优化，有助于研究人员进行人体软组织的非侵入性研究，并且操作简单，费用合理。要获取样品，请先使用彩色铅笔指示样品采集时皮肤上的切割区域。

确认标记线在医疗上延伸到中层校园，横向延伸至横向校园，优于下眼睑的优越边界，低于轨道边缘线以下一厘米。接下来，使用刀片沿标记线切割面部组织，确保切口足够深，使刀片尖端接触骨骼。收获的样品必须包括皮肤、皮下组织、肌肉、脂肪和周分。

采集后，立即将样品在室温下固定为10%甲醛5至7天。在固定期结束时，将样品切成三块五到七毫米厚。使用针和黑线缝制每个样品的超边，以便可以在以后的点确定样品的方向。

将样品在上升乙醇浓度系列中脱水一天，将样品留在70%乙醇溶液中，直到染色。在微机断层扫描计划前一周，将 PTA 加入 2.1 克至 210 毫升 70%乙醇，并将溶液以每分钟 55 至 60 次旋转的速度放在摇床上。准备三个70毫升的塑料容器，每个切片片。

当染料溶解到酒精溶液中时，用溶液填充容器。将一个样品放入每个 1%PTA 的容器中，每分钟 55 至 60 次旋转摇动样品 5 到 7 天。染色完成后，将样品储存在新鲜 70%乙醇中一周，以准备扫描。

对于 microCT 扫描，请将样品包装在 Parafilm 中以防止干燥，然后将样品放在扫描仪托盘上。将扫描仪的源电压设置为70千伏，源电流设置为114微安，铝滤片设置为0.5毫米，图像像素大小设置为20平方微米，像素设置为2，240乘2，曝光到500毫秒，旋转步长为0.3度。然后，启动扫描。

扫描完成后，打开重建软件并选择"操作"和"打开数据集"以启动扫描的文件。选择"设置"选项卡，将环伪影缩减为 7 和光束硬化校正。要开始重建，请选择"开始"。

最终数据将存储在指定的文件夹中。在重建结束时，打开文件调整大小软件，然后选择源数据集以启动重建的文件。在"目标数据集"选项卡上选择 jpg，然后使用"无插值"选项选择 1/2 调整大小选项，然后在"图像压缩"选项卡中将幻灯片栏调整为 100 并开始转换。

对于 3D 重建，打开 3D 卷渲染软件，然后选择"操作"和"加载音量数据"。要调整亮度和对比度级别，请修改"传输功能编辑器"选项卡中的直方图中的形状传输功能。接下来选择"选项"和"照明"，然后选择"阴影"和"曲面照明"图标，以实现逼真的建模色调。

单击并拖动，右键单击和拖动以移动和旋转 3D 图像以查找最佳视图，滚动以根据需要放大或缩小。单击"移位"并拖动以滑动位置以查看剖面图像。打开"灯光"图标并调整照明指示栏以查找最佳照明以进行查看，然后关闭"灯光"图标并关闭"照明"选项卡。

在"选项"选项卡中，选择"显示"和"剪切框"以隐藏最终图像的框。然后，选择"操作"和"保存图像"以存储图像。ORL 的这种详细重建是通过微CT实现的，如证明的PTA制剂，允许可视化韧带纤维肌肉结构斜向于真皮和周密之间延伸。

在日冕视图中，纤维的数量和复杂性横向增加。在水平视图中，观察到与树化地层精心设计的网格。在下垂视图中，ORL 纤维的厚度减小率低。

总体而言，这种多向观测证明，ORL是由连续板的多层网格组成，根据光纤的位置，其数量和厚度的变化。与试样体积相比，染色持续时间不够时，最终图像可能包括试样中心区域的空孔。PTA 旁边的其他代理可以使用，不同的代理具有不同的优点或染色功能的兴趣。

因此，根据实验优化染色区域是很有用的。