우리는 인간 orbicularis 유지 인대의 비 침습적 조사에서 연조직 대비를 향상시키기 위해 인조동산과 마이크로CT를 구현, 궤도 영역 내에서 섬세한 구조. 이 프로토콜은 인간 연조직의 비침습적 조사에 있는 연구원을 돕기 위하여 최적화되고 비용의 적당한 양으로 능력을 발휘하기 쉽습니다. 샘플을 얻으려면 먼저 색연필을 사용하여 샘플 수확을 위해 피부의 절단 영역을 나타냅니다.
표시된 선이 내측 캠퍼스로, 측면 캠퍼스로, 아래 눈꺼풀의 우수한 테두리에 우월하게, 궤도 림에서 라인 아래 1센티미터로 열등하게 확장되어 있는지 확인합니다. 다음으로 블레이드를 사용하여 표시된 라인을 따라 얼굴 조직을 잘라 블레이드 팁이 뼈를 만질 만큼 충분히 깊다는 것을 확인합니다. 수확된 견본은 피부, 피하 조직, 근육, 지방 및 periosteum을 포함해야 합니다.
수집 시 실온에서 5~7일 동안 10%의 포르말린으로 샘플을 즉시 수정합니다. 고정 기간이 끝나면 샘플을 5~7mm 두께의 3개 조각으로 자른다. 바늘과 검은 색 실을 사용하여 샘플의 방향을 나중에 결정할 수 있도록 각 샘플의 초측 면을 바느질한다.
농도당 1일 동안 상승하는 에탄올 농도 계열에서 시료를 탈수하여 얼룩이 날 때까지 70%에탄올 용액에 샘플을 남깁니다. 마이크로컴퓨터 단층 촬영 이 예정되기 1주일 전에 PTA 2.1그램을 70%에탄올210밀리리터에 추가하고 분당 55~60회 회전시 셰이커에 솔루션을 배치합니다. 슬라이스된 조각마다 70밀리리터 플라스틱 용기 3개를 준비합니다.
염료가 알코올 용액에 용해되면 용기에 용액을 채웁니다. 1%PTA의 각 용기에 표본 1개를 넣고 5~7일 동안 분당 55~60회 회전시 시료를 흔들어 줍니다. 염색이 완료되면 샘플을 1주일 동안 신선한 70%에탄올에 보관하여 스캔을 준비합니다.
microCT 스캐닝의 경우 파라필름에 샘플을 싸서 건조를 방지하고 샘플을 스캐너 트레이에 놓습니다. 스캐너의 소스 전압을 70킬로볼트로 설정하고, 소스 전류는 114마이크로앰프, 알루미늄 필터를 0.5밀리미터로, 이미지 픽셀 크기는 20제곱마이크로미터로, 픽셀은 2, 240 x 2, 240, 500 밀리초에 대한 노출, 회전 단계는 0.3도로 설정합니다. 그런 다음 스캔을 시작합니다.
스캔이 완료되면 재구성 소프트웨어를 열고 작업 및 데이터 집합을 선택하여 스캔된 파일을 시작합니다. 설정 탭을 선택하고 링 아티팩트 감소를 7개로 설정하고 빔 경화 보정을 설정합니다. 재구성을 시작하려면 시작을 선택합니다.
최종 데이터는 지정된 폴더에 저장됩니다. 재구성이 끝나면 파일 크기 조정 소프트웨어를 열고 원본 데이터 집합을 선택하여 재구성된 파일을 시작합니다. 대상 데이터 집합 탭에서 JPG를 선택하고 보간 없음의 품질 옵션으로 1/2 크기 조정 옵션을 선택한 다음 이미지 압축 탭에서 슬라이드 막대를 100으로 조정하고 변환을 시작합니다.
3D 재구성의 경우 3D 볼륨 렌더링 소프트웨어를 열고 작업 및 로드 볼륨 데이터를 선택합니다. 밝기 및 대비 수준을 조정하려면 전송 함수 편집기 탭의 히스토그램에서 셰이프 전송 함수를 수정합니다. 다음으로 옵션 및 조명을 선택하고 그림자 및 표면 조명 아이콘을 선택하여 사실적인 모델링 톤을 구현합니다.
클릭하고 드래그하고 마우스 오른쪽 단추를 클릭하고 드래그하여 3D 이미지를 이동하고 회전하여 최적의 뷰를 찾고 스크롤하여 원하는 대로 확대또는 축소합니다. 시프트를 클릭하고 드래그하여 단면 이미지를 보려면 장소를 밉니다. 라이트 아이콘을 켜고 조명 표시 막대를 조정하여 볼 수 있는 최고의 조명을 찾은 다음 라이트 아이콘을 끄고 조명 탭을 닫습니다.
옵션 탭에서 상자 표시 및 클리핑을 선택하여 최종 이미지에 대한 상자를 숨깁니다. 그런 다음 작업을 선택하고 이미지를 저장하여 이미지를 저장합니다. ORL의 이 상세한 재건은 입증된 바와 같이 PTA 준비와 microCT에 의해 달성되었다, 진피와 음막 사이 비스듬히 확장 인대 섬유 근육 구조의 시각화를 허용.
관상 관상보기에서 섬유의 양과 복잡성은 측면으로 증가합니다. 수평 뷰에서는 중단된 형성을 가진 정교한 메쉬워크가 관찰됩니다. 적신시야에서 ORL 섬유의 두께는 열등하게 감소합니다.
전반적으로, 이 다방향 관측은 ORL이 자신의 위치에 따라 섬유의 수와 두께의 변화와 연속 플레이트의 다층 메쉬 워크로 구성되어 있음을 증명한다. 시편의 부피에 비해 염색 지속시간이 충분하지 않은 경우, 최종 이미지는 시편의 중앙 영역에 빈 구멍을 포함할 수 있다. PTA 옆에 다른 에이전트를 사용할 수 있으며 다른 에이전트는 다른 장점이 있거나 얼룩 기능 관심사를 가지고있다.
따라서 실험에 따라 염색 영역을 최적화하는 것이 유용합니다.
