نحن تنفيذ ميكروك مع حمض فوسفوتونجستيك لتعزيز تباين الأنسجة الرخوة في التحقيق غير الغازية من orbicularis الإنسان الاحتفاظ الرباط، وهو هيكل دقيق داخل منطقة المدار. وقد تم تحسين هذا البروتوكول لمساعدة الباحثين في التحقيق غير الغازية للأنسجة الرخوة الإنسان وبسيطة لأداء مع قدر معقول من النفقات. للحصول على العينات، استخدم أول قلم رصاص ملون للإشارة إلى منطقة القطع على الجلد لحصاد العينة.
تأكد من أن الخط المميز يمتد إلى الحرم الجامعي المتوسط ، إلى الحرم الجامعي الجانبي ، متفوقًا على الحدود العليا للجفن السفلي ، وأقل من سنتيمتر واحد تحت الخط من الحافة المدارية. بعد ذلك، استخدم شفرة لقطع أنسجة الوجه على طول الخط المميز، مع التأكد من أن القطع عميق بما يكفي لتلميح النصل للمس العظم. يجب أن تشمل العينة المحصودة الجلد والأنسجة تحت الجلد والعضلات والدهون وطبع الزّمن.
عند جمع، على الفور إصلاح العينة في 10٪ formalin لمدة خمسة إلى سبعة أيام في درجة حرارة الغرفة. في نهاية فترة التثبيت، شريحة العينة في ثلاث قطع سميكة من خمسة إلى سبعة ملليمترات. استخدام إبرة وخيط أسود لخياطة الجانب الفائقة من كل عينة بحيث يمكن تحديد اتجاه العينة في وقت لاحق من نقطة.
يجفف العينة في سلسلة تركيز الإيثانول التصاعدية ليوم واحد لكل تركيز، تاركاً العينات في محلول الإيثانول بنسبة 70٪ حتى تلطيخ. قبل أسبوع واحد من المقرر التصوير المقطعي الكمبيوتر الصغير المسح، إضافة 2.1 غرام من منطقة التجارة التفضيلية إلى 210 ملليلتر من 70٪ الإيثانول ووضع الحل على شاكر في 55 إلى 60 التناوب في الدقيقة الواحدة. إعداد ثلاث حاويات بلاستيكية 70 ملليلتر لكل قطعة شرائح.
عندما حلّت الصبغة في محلول الكحول، املأ الحاويات بالمحل. ضع عينة واحدة في كل حاوية بنسبة 1٪ PTA، واهز العينات بمعدل 55 إلى 60 دورة في الدقيقة لمدة خمسة إلى سبعة أيام. عندما يكتمل التلطيخ، قم بتخزين العينات في 70٪ الإيثانول الطازج لمدة أسبوع واحد للتحضير للمسح الضوئي.
بالنسبة للمسح الضوئي الدقيق، لف العينات في Parafilm لمنع التجفيف ووضع عينة على صينية الماسح الضوئي. تعيين الجهد مصدر الماسح الضوئي إلى 70 كيلوفولت، مصدر التيار إلى 114 ميكرومبير، مرشح الألومنيوم إلى 0.5 ملليمتر، وحجم بكسل الصورة إلى 20 ميكرومتر مربع، بكسل إلى 2، 240 في 2، 240، والتعرض ل500 مللي ثانية، وخطوة دوران إلى 0.3 درجة. ثم، بدء المسح الضوئي.
عند اكتمال المسح الضوئي، افتح برنامج إعادة البناء وحدد إجراءات وفتح مجموعة البيانات لإطلاق الملفات الممسوحة ضوئيًا. حدد علامة التبويب الإعدادات وقم بتعيين الحد من القطع الأثرية الدائرية إلى سبعة وتصحيح الشعاع. لبدء إعادة البناء، حدد ابدأ.
سيتم تخزين البيانات النهائية في المجلد المعين. في نهاية إعادة البناء، افتح برنامج تغيير حجم الملف، وحدد مجموعة البيانات المصدر لإطلاق الملفات التي تم إعادة بنائها. حدد jpg على علامة التبويب مجموعة بيانات الوجهة وحدد خيار تغيير الحجم 1/2 مع خيار الجودة من عدم الاستيفاء ثم ضبط شريط الشرائح إلى 100 في علامة التبويب ضغط الصورة وبدء التحويل.
لإعادة إنشاء ثلاثي الأبعاد، افتح برنامج عرض وحدة التخزين ثلاثية الأبعاد، وحدد الإجراءات وبيانات حجم التحميل. لضبط مستوى السطوع والتباين، قم بتعديل وظيفة نقل الشكل في الرسم البياني في علامة التبويب محرر وظيفة النقل. بعد ذلك حدد خيارات والإضاءة، وحدد الرموز الظلال والإضاءة السطحية لتحقيق نغمة النمذجة واقعية.
انقر واسحب، وانقر بزر الماوس الأيمن واسحب لنقل وتدوير الصورة ثلاثية الأبعاد للعثور على أفضل طريقة عرض، والتمرير للتكبير أو التصغير حسب الرغبة. انقر فوق Shift واسحب لشرائح المكان لعرض الصور المقطعية. قم بتشغيل أيقونة Light وضبط شريط إشارة الإضاءة للعثور على أفضل إضاءة للعرض، ثم قم بإيقاف تشغيل رمز Light وإغلاق علامة التبويب الإضاءة.
في علامة التبويب خيارات، حدد إظهار ومربع قص لإخفاء المربع للصورة النهائية. ثم، حدد الإجراءات وحفظ الصورة لتخزين الصورة. وقد تم تحقيق هذا إعادة البناء التفصيلية من ORL بواسطة microCT مع إعداد PTA كما هو موضح ، مما يسمح بالتصور لهيكل عضلي ليفي أربطة تمتد بشكل غير مباشر بين الأدمة و periosteum.
في عرض التاجية ، يزيد مقدار وتعقيد الألياف بشكلٍ عرضي. في الرأي الأفقي ، ويلاحظ شبكة معقدة مع تشكيل. في وجهة نظر القوس، سمك ألياف ORL يقلل أقل.
وعموما، فإن هذه الملاحظة المتعددة الاتجاهات تثبت أن ORL تتكون من شبكة متعددة الطبقات من لوحات مستمرة مع اختلافات في عدد وسمك الألياف اعتمادا على موقعها. عندما تكون مدة تلطيخ غير كافية بالمقارنة مع حجم العينة ، قد تتضمن الصورة النهائية ثقبًا فارغًا في المنطقة المركزية للعينة. يمكن استخدام وكلاء آخرين بجانب منطقة التجارة التفضيلية وكلاء مختلفة لها مزايا مختلفة أو تلطيخ ملامح المصالح.
لذلك ، من المفيد تحسين منطقة التلوين وفقًا لتجربتك.
