神经肌肉疾病小鼠模型行为花型的低成本盖特分析

足迹分析是一种低成本的替代方案，用于数字化步态分析程序，用于研究人员量化小鼠的运动异常。由于其速度、简单性和纵向潜能，此方法非常适合小鼠模型的行为表型，包括神经退行性疾病、神经肌肉疾病或中风模型。演示这个程序的将是弗吉尼亚·韦特曼，一个来自我实验室的研究技术员。

在开始实验之前，让完全清醒并警觉至少5分钟的小鼠适应检测室30分钟。将隧道放置在略宽、比隧道长度和宽度长的纸条上。使用鼠标 ID 标记纸张和测试日期。

根据需要将向日葵种子添加到目标室，以激励，并牢固地将第一只要测试的小鼠擦伤。使用直径约 0.5 厘米的锥形刷尖，用一种无毒可洗水性油漆颜色绘制所有脚趾的整个底面和每个前爪的中心。以类似的方式涂上对比鲜明的无毒可洗水性油漆颜色的后爪。

使用干净的湿布去除鼠标在其身体其他部位上得到的任何油漆，以防止可能干扰数据收集的污迹。然后将鼠标放在隧道的开始处。让鼠标一直进入目标室，然后取回动物用水阻尼布轻轻清洁其脚。

然后将鼠标返回到其家庭笼子，并在测试下一只动物之前用消毒剂擦拭测试区域和隧道。为进行准确评分，在选择具有透明无污迹的脚印的步数之前，允许尺寸完全干燥。要生成足够的评分数据，每个英尺必须至少连续两个步骤。

不要在纸上包含第一个和最后一个脚印，因为它们不太可能代表正常的步态，因为鼠标正在改变其行走速度。要将步幅长度定义为同一英尺创建的两个连续脚印之间的距离，请使用铅笔在单个步幅中围绕两个前肢脚印前脚区域绘制两到四毫米的圆，并使用标尺在圆之间绘制一条线。将每个圆中间的两个打印件之间的距离记录为右前一或左前一个，并根据需要对可评分的每个步骤重复测量。

然后，平均所有个体记录的步幅距离，每个肢体平均单个分数在一组一起作为实验适当。要将步幅宽度定义为左前肢或后肢之间的距离，请从一个后肢的圆形前脚区域绘制并测量一条线，该线与反侧后肢上步幅长度的线垂直相交。对可评分的所有后印打印重复此测量，并平均测量值。

要将脚趾张差定义为单个前肢或后刻脚印上的第一个脚趾和最后一个脚趾之间的距离，请使用卡钳测量第一个脚趾打印的尖端和最后一个脚趾打印的尖端之间的距离。然后重复所有可评分的后印打印的测量，并平均测量值。对于足够数量的动物，这个程序能够检测小鼠基因型在相同菌株中随着时间的推移的步态差异。

例如，这里显示了使用 x 链接脊髓和球茎肌肉萎缩的小鼠模型收集的足迹图像的代表性痕迹，一种影响下运动神经元和骨骼肌的神经退行性疾病。对症状前和症状后转基因和垃圾伴侣对照的盖特分析表明，在疾病发生之前，转基因小鼠的步幅、步幅和足趾传播与它们的垃圾伴侣非转基因对照相似。然而，在疾病发病后，转基因动物的步幅明显变短。

类似的纵向分析显示，在测试的两个年龄段宽度没有差异。症状后转基因小鼠的后脚趾传播也明显较年龄匹配的垃圾伴侣对等。将油漆正确涂在爪子上将产生最佳效果。

请记住，只有始终带透明无污迹脚印的步骤才应评分。此技术足够灵敏，可以检测步幅的细微变化。由于其非侵入性方法，它允许测试在其生命周期中组表型呈现和治疗干预。