人卵成熟度评估及其临床应用

在临床实践中，它习惯假设显示极性身体的每个卵母细胞都准备好受精。人类卵母细胞成熟的生命成像显示，在双极性元相II主轴组装之前，极性体就会变得可见，从而产生不合时宜的精子注射风险。偏振光显微镜能够对人类卵母细胞中的美卵主轴进行非侵入性可视化，并在 IFV 中安全地用于在细胞内精子注射之前评估卵子成熟度。

优化ICSI的时机对于IVF周期预后不佳尤为重要，可用于受精的卵母细胞数量较低。此临床程序是标准试管婴儿治疗的附加技术，应由经验丰富的人员根据良好的实验室实践进行预制。人类胆碱性腺激素注射后35至36小时，收集在二氧化碳无关的处理介质中检索到的积液-卵母细胞复合物。

在37摄氏度的与二氧化碳无关的培养箱中，平衡卵母细胞10至15分钟。将卵母细胞暴露在高海卢诺西溶液中，在处理介质中稀释。30秒后，使用200微升移液器机械去除积糖-冠状细胞。

根据细胞核和第一极体的存在或不存在，评估被登的卵母细胞的数量和发育状况。将胚芽囊泡阶段，和元相一和元相II期卵母细胞放入单独的滴中，形成与二氧化碳无关的培养基，覆盖矿物油。然后，将卵母细胞在37摄氏度、5%的二氧化碳和6%的氧气下放置3至4小时。

为胚胎培养准备培养板，在适当大小的培养板的单个孔中加入适当体积的预均衡培养介质。用平衡的矿物油盖住液滴，用唯一的标识符标记板，并放在二氧化碳依赖的未分配器中至少 20 分钟。要准备 ICSI 盘，请为每个极性身体显示卵母细胞添加 5 微升预加热处理介质液滴，并在干净的塑料盘中添加 1 个用于针洗的微升液滴。

在细胞质精子注射之前添加额外的PVP溶液，用于精子固定，并将液滴与预热的矿物油覆盖。一定要给菜贴上标签。然后，将精子注射盘放在与二氧化碳无关的培养箱中至少20分钟。

当板处于平衡状态时，将每个极性身体显示卵母细胞的5微升预加热处理介质滴添加到玻璃底培养皿中。用预热矿物油覆盖所有液滴。一定要给菜贴上标签。

然后，将盘子放在与二氧化碳无关的培养箱中至少20分钟。当板处于平衡状态时，打开倒置显微镜上的加热阶段，将无菌保持和精子注射针头放入微注射支架中。将针头放在焦点上，并选择适当的目标，注意冷凝器处于明亮的磁场位置。

插入绿色干扰滤波器，并将液晶分析滑块设置为工作位置。将快门设置为约 50%，并调整圆形偏振器以降低背景噪音。要设置用于极化光显微镜检查的计算机，请启动成像软件，并在视频菜单中选择视频、视频源和极坐标。

然后，切换到实时视频，通过进入视频页面并选择图标来激活主轴和 zona 分析。要确定每个卵母细胞的成熟度，请将所有卵母细胞转移到准备好的玻璃底盘上的单个液滴中，然后将盘子盖在准备好的倒置显微镜下。将第一个卵母细胞聚焦到焦点上，观察检测到的卵母细胞双反图像，因为它是计算机处理的，并在计算机屏幕上实时显示。

使用保持和精子注射针转动卵母细胞，使极性身体处于12点钟的位置，并专注于极性身体。如果主轴双反光在 PB 附近一见钟情，请稍微触摸 zona pellucida，并轻轻地将卵母细胞围绕每个轴转动，以确保偏振光与阵列主轴光纤对齐。在识别所有主轴阳性卵母细胞后，将卵母细胞转移到准备好的ICSI培养皿内的单个液滴中，然后根据标准协议将卵母细胞接受细胞质内精子注射。

如果卵母细胞没有可检测的元相II主轴信号，将偏振光显微镜盘放入与二氧化碳无关的培养箱2至3小时。在重新预制偏振光显微镜检查之前，在注射后，将卵母细胞转移到准备好的胚胎培养板中，用于培养，直到达到胚极化阶段。注意确保人类卵母细胞的所有微操作在37度的控制环境中，以最佳的培养基pH值进行。

主轴成像允许从正在经历重要成熟过渡的卵母细胞中对在元相II阶段逮捕的完全成熟的卵母细胞进行歧视。在发育延迟的卵母细胞在体外挤压极性体时，元相II主轴信号的缺失不一定反映细胞扰动，但可以指示卵母细胞从元相一阶段到元相II阶段的进展。卵形主轴的存在是鸡蛋发育能力的一个积极标志。

推迟ICSI为发育延迟的卵母细胞提供了额外的时间来完成成熟过程，并在注射前组装元相II主轴。使用这种方法，即使是不成熟的卵母细胞，通常丢弃可以临床使用，并导致成功的怀孕。