大家好。我是青岛大学公共卫生学院毒理学系副教授蒋启晓。我将代表我的研究小组介绍使用鸡胚胎进行心毒性评估的资产。
鸡胚胎是一种经典的发育模式，具有操作方便、可访问性高、封闭式独立系统等多种优点。处理多种环境污染物，如酚类晒黑酸。柴油排气，尤其是碳纳米管上的物质。
我们在实验室中建立了多种暴露方法，但对于更大的原因，功能评估也定期执行。在这段视频中，我将向您展示曝光方法和形态功能评估方法的细节。如果您有兴趣，请随时与我们联系。
谢谢。以下是我们可以向您介绍的暴露方法。现在，我要介绍的第一种方法是空气细胞注射，在那里你将直接注射到空气细胞。
用多碘化物溶液清洁鸡蛋表面。这是市售的多碘化物溶液，用去离子水稀释，1/5。然后，我用纸巾擦干蛋壳，不擦洗。
这很重要，因为擦洗会打破外壳的保护层涂层。用铅笔清洁黑暗房间里所有的鸡蛋和空气电池的标记。排除壳上有裂缝的鸡蛋。
也排除有空气细胞的鸡蛋在一边。如果这有一个钝尖，这些都是极不可能正常孵化。用 75% 的酒精对空气电池区域以及金属探头进行消毒。
擦干它们，然后用探头在空气电池区域的中心钻一个小洞。不要将探针深入空气电池。相反，只需用探头的尖端打破外壳。
如果孔仍然不够大，请在现有孔附近再次打破外壳，直到它足够大，允许您插入尖端。将移液器尖端插入孔中，尖端接触内膜。慢慢地，注射混合物，并在那里举行至少10秒。
这是为了让已分配的石油得到充分分配。然后取下提示。现在，用刷子和一滴融化的石蜡封住这个洞。
小心不要将融化的石蜡滴到内记忆中。一旦密封，将卵子放在孵化器中，直到它们达到所需的胚胎阶段。第二，我要介绍的方法是微注射。
首先，鸡蛋需要按照空气注入部分的描述进行清洁和处理。此程序需要在绝育罩中执行。用丙酮消毒空气细胞区和仪器。
用金属探头在空气电池区域中心钻一个小洞。不要将探针深入到空气单元中，否则内记忆可能会受损。然后，使用相同的过程小心地放大孔，直到直径约为两毫米。
这可以允许内记忆的比例确认。然后将溶液装入微型喷油器中，小心地将针头通过孔插入内膜，总长约三毫米。轻轻分配溶液，然后取出针头。
保持针头尽可能垂直。用一小块胶带把洞封住。完全覆盖孔，以防止胚胎脱水和死亡在随后的孵化。
我要介绍的第三种方法是空气细胞输液。将气体污染物灌输到空气细胞中。清洁和处理空气细胞注射部分所述的鸡蛋。
然后你可以读鸡蛋直到胚胎第17天。在胚胎日17时处理卵子，以标记空气细胞区域。在胚胎18日，从孵化器中取出卵子，用丙酮对空气细胞区和仪器进行消毒。
然后小心地在空气电池的两侧钻两个小孔。一种是用于注入气体或气溶胶。另一个是扩大我们的空气。
小心地控制孔的大小，使注射孔的侧面足以插入导管针，而膨胀孔的直径应稍大一些。直径约一毫米。现在，这是我们用来容纳目标气体或气溶胶的样品袋。
您可以用您使用的任何设备替换。轻轻将 10 mL 的气体或气溶胶倒入注射器中。然后，小心地将注射器与内针遥控连接到导管针上，使其柔软。
轻轻地将导管针插入输液孔。一旦它在那里，对导管针施加压力。这是为了尽量减少注射部位的泄漏。
另一个手指可以放在周围与驱逐孔为您的输液确认。如果你轻轻地输液，应该很容易感觉到从驱逐孔流出的空气流。那是被驱逐的空气室里的原始空气。
输液完成后，立即密封两个孔。这些磁带和返回鸡蛋到您的孵化器。我可以介绍我们的端点评估流程。
用五巴比妥33毫克/千克完全麻醉动物。通过打开测试的 IP 喷射。然后把鸡放在手术台上。
用乙醇消毒腹部区域和电极。然后，连续从腹部子的两侧插入两个针电极。通过抬起皮肤一点点，确保针头不会进入腹腔。
并从那里插入针头。插入后，小心地向前推针，直到针头到达胸腔的一侧。确保针头不会深入身体或从皮肤伸出来。
然后用心电图仪进行测量。其他能够进行电子政务的神学院仪器也可使用。这是我们的第二个终点评估方法是为莫特林绘制地图。
这是 HME 方式中心脏的横截面。这是我们要测量的正确的心室。为此，我们使用两个统治者。
标尺 1 和标尺 2。现在，我们只是复制尺子一到屏幕，我们调整到适当的大小，然后旋转。我们移动它，使水平线的两端休息在3右心室墙壁的两端。
现在我们有七条测量线穿过我们的三个右心室壁。现在我们也把次要的尺子复制到图片上。我们还调整了一点大小，并旋转和更换，以便它将被放置一样。
此水平线与右心室的外壁平行。垂直的一个会穿过点，统治者的白质线满足内壁或右心室。然后我们制作测量点，以便以后可以用图像 J 进行测量，我们每个样品重复这个过程 7 次，以便我们代表测量右心室。
我给你看一份目前结果的摘要。这是孵化前向卵子注射的全氟辛烷磺酸，你可以看到，随着注射的增加，血清中的血清浓度 LPF 会有效增加。根据示范，效果，微注射。
你可以看到，A是控制，而B，是注射大荧光q蛋白的杀毒表达的地方。你可以看到强烈的荧光。这是上皮输液有效性的证明。
你可以看到，通过输液，心肌组织中观察到了巨大的光纤变化。好。你还可以看到孵化鸡0，1和2周的R-R间隔。输注柴油废气后，情况也发生了显著变化。
表明您考虑了这一点，此方法。在这里，您还可以在此示例中看到上皮输注的有效性。你可以看到，心脏的右心室有效地增加后，气溶胶注入柴油排气。
当然，在这里我们使用的是组织形态测量方法。我们只是告诉你这是相当有效的。好。
这就是我要呈现给你的所有方法。我希望这能促进其他人的工作与鸡胚胎作为一个强大的研究工具，在发展毒理学。祝你今天愉快。
