该方法有助于回答与人类胸膜间皮瘤的发育、治疗和诊断有关的关键问题。这种可靠的临床前正畸模型的主要优点是,它复制人类疾病进展和病理学在微环境接近一个发现在胸膜间皮瘤患者。因此,这一无价的模型具有很高的意义,使用非侵入性分子成像可以按照三个R概念进行纵向监测。
在开始准备麻醉系统和手术区之前,通过喷洒消毒剂的所有表面,在层流罩中。将微隔离的 SPF 保持架放在消毒流罩中。将加热垫、波维酮碘溶液 30 量汉密尔顿注射器、纱布和棉签手术器械以及微管和尖端放在层流罩中。
一旦小鼠被正确麻醉皮下注射0.05毫克每公斤布普里诺芬为术后锅缓解。然后将鼠标放在加热垫顶部的右侧,用波维酮碘溶液清洁手术区域,并制作5毫米的皮肤切口。用钝剪刀清除周围的脂肪和肌肉,露出肋骨。
使细胞悬浮液均匀化,将50微升装入汉密尔顿注射器,确保避免气泡。每次注射前用 70% 酒精擦拭针头。慢慢地将细胞注射到第六和第七根肋骨之间的胸腔中,在骨质肌肉下以30度和2到3毫米的角度拿着针头。
将针头留在肋骨下,避免注射到肺部。它应该通过肌肉可见。完成后,用三到四个可吸收的缝合线关闭伤口,将鼠标存放在温暖的环境中,直到它醒来。
进行植入时,正确定位针头以限制针头穿透深度非常重要。在注射氟-18(FDG)之前,使用加热室加热垫或红外灯在30摄氏度下预热小鼠,使用剂量计算器在1毫升胰岛素注射器中准备3至4个巨型贝克雷尔剂量的氟-18(FDG)。。用150至200微升盐水注射。确保记录所有时间放射性剂量测量注射,和PET扫描,以计算标准吸收值或SUV。
称重小鼠,然后静脉注射氟-18(FDG)后注射让小鼠在温暖的条件下清醒45分钟。然后,将鼠标加载到扫描仪床上,将床转移到扫描仪上,并让动物接受以肺部为中心的CT扫描。将床移动到 PET 子系统,在氟-18(FDG)喷射一小时后插入采集,持续时间为 15 分钟。
然后将小鼠从成像室中取出,并允许它们在笼子里恢复,将它们放在一个专门用于放射性衰变的区域。在图像分析之前,重建CT和PET扫描,如手稿中所述。通过扫描幻象圆柱来校准图像,并根据内置的软件解决方案自动注册扫描。
通过单击打开的数据图标来分析图像加载 CT 数据作为参考。然后通过单击追加数据图标加载 PET 数据作为输入。调整色度,使 CT 和 PET 对图像进行对比,以便进行目视检查。
从下拉菜单中选择 3D ROI 工具,单击"添加 ROI",并命名文件肺。单击分段算法和邻域阈值,然后将输入定义为背景,将图像定义为 ref。根据小鼠肺密度值输入最小值和最大值。
单击 VTK 图标检查 3D 渲染的肺。然后单击"显示表"图标并检索生成的表中的卷。要分析肿瘤中的氟-18(FDG),请从下拉菜单中选择荧光粉,将PET图像转换为SUV。
选择标量乘数,然后使用 NP 1 作为选定,并设置每毫升贝克雷尔到 SUV 因子作为标量。最后从下拉菜单中选择 3D ROI 工具,然后单击添加 ROI 并命名文件肿瘤。单击 3D 绘画模式和球体仅取消选中 2D,并调整形状的大小以包围肿瘤。
单击显示表图标并从生成的表中检索 SUV 最大值。CT 扫描的 3D 渲染概述了 MPM 肿瘤定位,并允许计算肺体积。注射宫内肿瘤后,肺体积测量会随着时间的推移显著减少。
PET扫描提供了有关MPM肿瘤代谢状态的宝贵信息。移植后两周肿瘤是可分辨的,通过提取与注射后天数呈正相关数的SUV来量化氟-18(FDG)吸收。此外,肺体积和氟-18(FDG)的特异性与0.6的R平方相互关联,支持这些测量的强度,以监测MPM正畸肿瘤的发展。
按照这个程序,其他方法,如组织学,免疫组织化学,流细胞学可以执行,以响应正畸问题,如肿瘤和微环境的增殖状态和表型特征。总之,这些临床前技术为研究人员探索胸膜间皮瘤的诊断和治疗新策略铺平了道路。此外,分子成像的使用需要迅速将新发现翻译到诊所。