Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen im Zusammenhang mit der Entwicklung, Behandlung und Diagnose des menschlichen Pleuramesothelioms zu beantworten. Der Hauptvorteil dieses zuverlässigen präklinischen orthotopischen Modells besteht darin, dass es das Fortschreiten der menschlichen Krankheit und Pathologie in einer Mikroumgebung repliziert, die der bei Patienten mit Pleuramesotheliom nahekommt. Daher ist dieses unschätzbare Modell von hoher Bedeutung und der Einsatz nicht-invasiver molekularer Bildgebung ermöglicht eine Längsüberwachung im Einklang mit dem Drei-R-Konzept.
Vor Beginn der Vorbereitung des Anästhesiesystems und des Operationsbereichs in einer laminaren Strömungshaube durch Besprühen aller Oberflächen mit Desinfektionsmittel. Legen Sie die mikroisolierten SPF-Käfige in die desinfizierte Durchflusshaube. Legen Sie ein Heizkissen, Povidon-Jod-Lösung 30 Gauge Hamilton Spritze, Gaze und Wattestäbchen Chirurgische Instrumente und Mikropipetten und Spitzen in der laminaren Strömungshaube.
Sobald die Maus richtig anästhetisiert subkutan injiziert 0,05 Milligramm pro Kilogramm Buprinorphin für postoperative Pfanne Relief. Dann legen Sie die Maus auf der rechten Seite auf die Oberseite des Heizkissens und reinigen Sie den operationschirurgischen Bereich mit Povidon-Jod-Lösung und machen Sie einen 5-Millimeter-Schnitt der Haut. Löschen Sie das umgebende Fett und die Muskeln mit einer stumpfen Schere, um die Rippen freizulegen.
Homogenisieren Sie die Zellsuspension und laden Sie 50 Mikroliter in die Hamilton-Spritze, um Luftblasen zu vermeiden. Wischen Sie die Nadel vor jeder Injektion mit 70% Alkohol ab. Injizieren Sie die Zellen langsam in die Pleurahöhle zwischen der sechsten und siebten Rippe, die die Nadel in einem Winkel von 30 Grad und zwei bis drei Millimeterunter den interkostalen Muskeln hält.
Halten Sie die Nadel knapp unter den Rippen, um eine Injektion in die Lunge zu vermeiden. Es sollte durch die Muskeln sichtbar sein. Wenn sie fertig ist, schließen Sie die Wunde mit drei bis vier resorbierbaren Nähten und bewahren Sie die Maus in einer erwärmten Umgebung auf, bis sie aufwacht.
Bei der Implantation ist es sehr wichtig, die Nadel richtig zu positionieren, um die Tiefe des Nadeldurchdringtes zu begrenzen. Verwenden Sie ein Heizkammer-Heizkissen oder eine Infrarotlampe, um die Mäuse 30 Minuten vor der Injektion von Fluor-18 (FDG) bei 30 Grad Celsius vorzuwärmen, indem Sie einen Dosisrechner verwenden, um drei bis vier Megabecquerel-Dosen von Fluor-18 (FDG) in 150 bis 200 Mikroliter Saline in 1 Milliliter-Insulinspritzen vorzubereiten. Achten Sie darauf, alle Zeiten von Radioaktivitätsdosismessungen Und PET-Scans aufzuzeichnen, um Standardaufnahmewerte oder SUVs zu berechnen.
Wiegen Sie die Mäuse dann intravenös injizieren die Fluor-18 (FDG)Nach der Injektion lassen Sie die Mäuse wach in warmen Bedingungen für 45 Minuten. Dann laden Sie die Mäuse auf das Scannerbett übertragen das Bett zu einem Scanner und unterziehen Sie die Tiere zu einem CT-Scan zentriert auf die Lunge. Bewegen Sie das Bett in das PET-Subsystem setzen Sie die Erfassung eine Stunde nach der Fluor-18(FDG)-Injektion für eine Dauer von 15 Minuten ein.
Entfernen Sie dann die Mäuse aus der Bildkammer und lassen Sie sie sich in ihrem Käfig erholen und halten sie in einem Bereich, der dem radioaktiven Zerfall gewidmet ist. Vor der Bildanalyse rekonstruieren CT- und PET-Scans, wie im Manuskript beschrieben. Kalibrieren Sie die Bilder, indem Sie einen Phantomzylinder scannen und registrieren Sie die Scans automatisch entsprechend der integrierten Softwarelösung.
Um die Bilder zu analysieren, laden Sie die CT-Daten als Referenz, indem Sie auf das Symbol "Offene Daten" klicken. Laden Sie dann die PET-Daten als Eingabe, indem Sie auf das Anhängen von Daten klicken. Passen Sie die Farbskala so an, dass CT und PET Bilder für die visuelle Inspektion kontrastieren.
Wählen Sie das 3D-ROI-Tool aus dem Dropdown-Menü auf ROI hinzufügen und nennen Sie die Dateilunge. Klicken Sie auf Segmentierungsalgorithmen und Nachbarschaftsschwellen und definieren Sie dann Eingabe als Hintergrund und Bild als Ref. Geben Sie min und max nach Denklungendichtewerten der Maus ein.
Überprüfen Sie die 3D-gerenderte Lunge, indem Sie auf das VTK-Symbol klicken. Klicken Sie dann auf Tabellensymbol anzeigen, und rufen Sie das Volume in der generierten Tabelle ab. Um die Fluor-18(FDG)in Tumoren zu analysieren, konvertieren SIE PET-Bilder in SUV, indem Sie Arithmetik aus dem Dropdown-Menü auswählen.
Wählen Sie Skalar-Multiplizität aus, verwenden Sie dann NP eins wie ausgewählt und legen Sie den Becquerel pro Milliliter auf SUV-Faktor als Skalar fest. Wählen Sie schließlich das 3D-ROI-Tool aus dem Dropdown-Menü aus und klicken Sie auf ROI hinzufügen und benennen Sie die Dateitumoren. Klicken Sie auf den 3D-Malmodus und die Kugel deaktivieren Sie nur 2D und passen Sie die Größe der Form an, um die Tumore zu umgeben.
Klicken Sie auf das Symbol Tabelle anzeigen und rufen Sie den SUV-Höchstwert aus der generierten Tabelle ab. Die 3D-Renderings aus den CT-Scans geben einen Überblick über die MPM-Tumorlokalisierung und ermöglichen die Berechnung der Lungenvolumina. Lungenvolumenmessungen nehmen im Laufe der Zeit nach der Injektion von intrapleuralen Tumoren signifikant ab.
Der PET-Scan liefert wertvolle Informationen über den Stoffwechselzustand von MPM-Tumoren. Die Tumoren waren zwei Wochen nach der Transplantation unterscheidbar und die Fluor-18(FDG)-Aufnahme wurde durch Extraktion von SUVs quantifiziert, die positiv mit der Anzahl der Tage nach der Injektion korreliert waren. Darüber hinaus korrelieren Lungenvolumina und Fluor-18(FDG)-Avidität mit einem R-Quadrat von 0,6, das die Stärke dieser Messungen zur Überwachung der mPM-Orthotoptumorentwicklung unterstützt.
Nach diesem Verfahren können andere Methoden wie Histologie, Immunhistochemie und Durchflusszytometrie durchgeführt werden, um orthobiologische Fragen wie den Proliferationszustand und die phänotypische Charakteristik von Tumoren und der Mikroumgebung zu beantworten. Abschließend möchte ich sagen, dass diese präklinischen Techniken den Weg für Forscher ebnen, um eine neue Diagnose- und Behandlungsstrategie des Pleuramesothelioms zu erforschen. Darüber hinaus rechtfertigt der Einsatz molekularer Bildgebung eine schnelle Übersetzung neuer Erkenntnisse in die Klinik.
