在多细胞生物体内，组织在空间方向上进一步显示高度。在形态形成过程中，细胞在远距离上对齐并显示一系列优先级。要了解在发育过程中如何达到表皮的平面排列，在体内以高空间时间保真度跟踪细胞的方向和生长动力学至关重要。
所述协议旨在成像和分析细胞行为在全球和地方水平在果蝇幼皮表皮。这种方法可以提供对不同研究理论、细胞生物学、形态生成和平面极性见解，并可应用于其他组织、结构和模型的分析。经过一些练习后，所有步骤都可以轻松执行。
它们要求精确。此协议的可视化有助于在更短的时间内实现最佳结果。幼崽解剖是复杂的。
首先，使用湿润的画笔将分阶段的白色预包装转移到新鲜的塑料小瓶中，并在25摄氏度下尽可能长时间地保留它们。然后，在钳子的帮助下，从小瓶壁上取下每个幼崽。将每个小狗的腹侧粘在用双面胶带覆盖的玻璃滑梯上。
用钳子的尖端轻轻敲击头尖和钳子的背表面，以确保钳子盒附着在胶带上。在立体显微镜下开始解剖，用钳子轻轻从钳子中去除蛋白石。通过手术开口将钳子的一角插入到钳子外壳和幼崽表面之间的浅体中。
在一个或多个摆动中横向将箱子从头撕到尾部，避免捏住小狗。当您继续向后部结束时，将破裂的小狗箱折叠回侧侧。小心地将钳子插入动物的下面，轻轻拉起，从打开的幼崽盒中取下幼崽。
小狗粘在钳子的尖端。轻轻地握住腹侧，将幼崽转移到一小滴气体渗透卤化油顶部的玻璃底盘上。在盘子边缘卷一块湿纸巾，盖上盘子以保持湿度。
根据要评估的域和工艺，将油滴放在玻璃底盘上的油滴上。对于长期活成像的早期扩展的后巢，后向横向定向的幼崽。要形象地显示它们的后期扩张和组织重塑，请对幼崽进行定向。
将装有安装过的幼崽的玻璃底盘转移到显微镜阶段，并使用透光聚焦在腹部区域的表面。要采用线粒体重组来诱导腹部上皮的遗传马赛克，准备携带热冲击诱导性翻转酶的处女，特定基因组位置的FRT位点，以及一个可识别的细胞标记物，对FRT站点的致病。准备在等效基因组位置携带 FRT 位点的突变雄性。
在25摄氏度的塑料小瓶中，以三到一的比例交叉几个雌雄，为期四到五天。为了在组细胞中产生体细胞，在十字架后代的第三个星幼虫阶段进行热休克处理，将含有动物的塑料小瓶淹没在37摄氏度的水浴中，在37摄氏度的热水浴中45分钟到1小时。在图像 J 软件中，使用最大强度投影功能保护 2D 中共和显微镜获取的 Z 堆栈切片。
巢具有特征形状，在左侧的平面坐标系中定向，在顶部的背向中定位它们。为了通过此分析获得最佳结果，必须以高分辨率获取输入图像。若要在本地单元格边上获取质量方向值，请单击插件菜单并选择方向 J 分布选项。
将高斯窗口西格玛设置为一个像素，将立方样条设置为渐变，将最小一致性设置为 20%，将最小能量设置为 1%。使用插件的颜色调查选项。将色调设置为方向，将饱和度设置为一致性，将亮度设置为输入图像。
此颜色将相对于设置的平面坐标系对单元格边缘方向进行编码。接下来，在插件菜单下，使用方向 J 测量选项量化细胞方向和方向单元格到单元格对齐。在组织细胞所占据的范围内，产生20微米左右、面积均匀的相邻非重叠区域。
按量值计算与 ROIS 的主导局部方向和一致性。在这项研究中，所使用的方法能够产生高分辨率的影片的发展，长达48小时，没有显著的照片漂白或照片毒性。此处显示了以 RFP NLS 及其双点为标志的野生类型克隆示例。
克隆沿分段边界拉长。双克隆是并行排列的或串联排列的。野生型克隆在幼虫形成后26小时47小时形态图显示两个阶段的复杂边界形态。
在百分层形成后 26 小时 47 小时，几何参数的框和胡须图显示，在此时间窗口中，平均面积和周长显著增加。克隆人的方向在扩展和改造期间保持。在幼虫形成后26小时47小时的形状参数表明，野生克隆的粗糙度、圆度和圆形几乎没有变化。
一定要不损坏幼崽，否则它会在几个小时内死亡，影响活成像。本协议不要求使用沙图斯试剂或仪器。解剖时避免捏自己。
通过应用这些方法，可以使用不同的想象技术长期生成高分辨率电影。光子或旋转磁盘的焦点。氯分析可用于探索非自主反应，因为随机细胞有助于识别交叉说话或细胞通信机制。
这些方法可以很容易地适应研究各种形态遗传现象，包括表皮、肌肉和在变质期间神经发育的协调。
