我们的基因分型协议的主要优点是，它最大限度地减少了母体DNA的污染，这是基因分型固定、石蜡嵌入的摩尔组织时的主要挑战。流细胞学是一种快速而廉价的方法，大大方便了对子宫内子摩尔的诊断。对于每个形式固定石蜡嵌入，或FFPE，受孕的产物，准备一个四微米厚的赤氧树脂和 eosin 染色部分，详见本视频，通过显微镜进行形态学评估。
将 FFPE 块放在冰上 15 分钟，以便于进行剖切。调整显微原子以切割四微米厚的截面，进行微观形态评估。将冷块放在微管中，从每个块中切一个部分进行 H&E 染色。
使用钳子，将每个部分转移到 45 摄氏度的水浴。使用铅笔使用带样品标识编号的带正带电的幻灯片从水浴中拾取该部分。将包含部分的幻灯片放在烤箱中，温度为 65 摄氏度，以便这些部分粘附在幻灯片上。
将幻灯片放在烤箱中 25 分钟。通过将幻灯片淹没到文本协议中表格中的正确时间段中，执行 H&E 染色。使用安装介质安装四微米部分，进行形态分析。
用玻璃盖滑盖。使用 H&E 幻灯片和光学显微镜，选择具有最大胆碱量的 FFPE 块。如果可能的话，有胆碱分离的块，而不是与母体组织混在一起。
调整显微原子以切割10微米厚的片段，用于DNA提取。切割 10 到 30 节，具体取决于块中胆小音的量。与之前一样使用幻灯片拾取部分后，将包含部分的幻灯片放在烤箱中，温度为 65 摄氏度，以便这些部分粘附在幻灯片上。
将幻灯片放在烤箱中 20 分钟。通过将幻灯片淹没到文本协议中表格中的正确时间段中，执行 H&E 染色。将幻灯片留在烟罩下至少三个小时，以便有毒二甲苯气味消散。
使用钳子，从湿润的纸擦中撕下一小张纸。在光学立体显微镜下，使用钳子和小块水湿纸巾刮掉所有不需要的母体组织，从 H&E 污渍 10 微米厚的部分。这一步的关键是耐心，尤其是对于具有挑战性的方块。
同样重要的是让别人看看，以确保没有错过产妇组织。现在，从湿润的纸湿巾中撕下一张新纸，并用它来收集巧克力。将纸巾片及其附着的巧克力 villi 放入标有 1.5 ml 的管中。
尽量减少此步骤中使用的纸擦拭量，因为太多纸擦量可能会堵塞 DNA 提取柱，从而减少最终收集的 DNA 量。按照 FFPE 试剂盒的 DNA 提取协议执行 DNA 提取。使用实验室分光光度计，加载 1 微升 DNA，并在 216 nm 测量吸收度以进行定量。
在 2%agarose 凝胶上加载 1 微升 DNA，并在 80 至 100 伏的电压下运行凝胶电泳，进行定性评估。根据DNA评价结果，选择多路复用短串联重复PCR扩增中使用的DNA体积。目标是使用至少1000纳米的DNA。
继续进行PCR扩增、毛细管电泳和数据分析，如文本协议中所述。要选择理想的 FFPE 块，请使用光学显微镜上的 H&E 幻灯片选择具有大约 50% 到 70% 的组织由胆碱组成的 FFPE 块。对于没有理想量的胆碱的块，在执行分节时丰富巧克力维利。
为此，根据相应的 H&E 幻灯片，确定新切节的哪一侧包含更多的胆碱。然后，使用刀片切断另一半，需要丢弃，以丰富巧克力 villi 。要执行最佳 FFPE 块的剖切，请使用微原子切割四个 50 微米厚的截面。
在没有理想的FFPE块的情况下，旨在保持胆碱与母体组织的比例。例如，如果只有30%的块是由胆碱，而其余的有母体组织，然后删除至少一半的部分，包含母体组织，并使用更多的部分来补偿。将截面放在标有 15 mL 的管中。
对于去分离和补液，在烟罩中工作以添加每个试剂，并等待文本协议中表格中的适当时间段。然后，用巴斯德移液器通过真空吸气去除试剂。接下来，在15 mL管中加入4摄氏度的柠檬酸溶液。
在80摄氏度的水浴中放置两个小时后，让溶液冷却至室温。通过真空吸气去除柠檬酸盐溶液。加入六毫升1x PBS，漩涡，等待一到两分钟，让组织沉淀到底部。
如果需要，以 1000 RPM 将样品离心 30 秒。通过真空吸气去除 1X PBS。现在加入一 mL 预热辣椒溶液，放在 37 摄氏度的干浴中 30 分钟。
每10分钟一次漩涡。在孵育的最后10分钟中准备碘二白糖酶A溶液。再加入6 mL的1xPBS，漩涡，并等待一到两分钟，让组织稳定到底部。
再次，通过真空吸气去除 1x PBS。加入550微升的碘二碘核糖酶溶液溶液，将样品放在37摄氏度的干浴中30分钟。使用钳子将五厘米 x 五厘米的 48 微米过滤网放在聚苯乙烯圆形底部管的顶部，用于流式细胞仪。
通过将液体通过网状物移入管中过滤溶液。样品现在可以在流量环测仪上运行。将它们包裹在铝箔中，直到它们准备好运行。
最后，执行文本协议中描述的流式细胞测量和数据分析。部分催眠摩尔的微卫星基因分型，以及患者及其伴侣的DNA，揭示了患者的摩尔是三倍体脱皮。第一个标记显示了受孕产品中的两个峰值。
第一个峰起源于母亲，因为只有母亲有这种大小的峰。按照同样的推理，第二个峰值来自父亲，因为他共享相同的等位基因。请注意，第二个峰值比第一个峰值高很多，表明该峰值中可能有两剂同一父级等位基因。
在受孕的这种产品中，母体污染非常小，因为它在第二个母体等位位置显示一个非常微小的峰值。第二个标记显示了受孕产品中的三个峰值。其中两个山峰来自父亲，一个来自母亲。
第三个和第四个标记类似于第一个标记，还显示来自父亲的两个等位基因和来自母亲的等位基因。由于所有四个标记始终显示三个等位基因，两个来自父亲，一个来自母亲，我们可以得出结论，这个受孕的产物是三倍体性，并确认部分摩尔的诊断。对于基因分型结果的解释，重要的是要根据清洁步骤中记下的笔记来了解污染程度。
在某些情况下，我们无法按照这两种方法得出结论。在这种情况下，我们使用其他方法，如 FISH，以揭示真正的基因型。微型卫星基因分型允许精确的摩尔诊断，并为更好地了解与二甲二甲状摩尔的各种特征相关的基因型铺平了道路。
