在Vitro重建空间细胞接触模式与孤立的Caenorhabditis elegans胚胎冲击器和粘性聚苯乙烯珠

多细胞组织复杂，此协议以简化的方式重组细胞行为。有一件事是这种技术来研究细胞导体质子和细胞反应之间的直接关系。该协议使用化学功能聚苯乙烯珠子来重组细胞导体质子。

珠子可以与任何感兴趣的质子切割，以测试它们对细胞反应的影响。我们在小鼠胚胎上的C-优雅中使用过这种方法。因此，该协议可以直立于对广泛生物的研究。

由于胚胎在高全氯处理后很脆弱，因此在成功分离异丙酮之前，需要大量实践。视觉演示将加深对在风波分离方法期间如何处理毛细管的理解。首先，在1.5毫升微型离心管中，重达10毫升的碳氧酸酯改性聚苯乙烯珠。

将一毫升 MES 缓冲液加入管中进行清洗。旋转管混合珠子。通过台式离心机在 2000XG 下旋转管 60 秒。

通过小心地移出缓冲液，将上看液去掉。用一毫升的 MES 缓冲液再次清洗珠子。洗涤后，将含有10毫升EDAC的1毫升 MES 缓冲液加入管中，激活表面的箱状组。

旋转管混合珠子。在室温下旋转并孵育管子15分钟。在 2000XG 下旋转珠子 60 秒。

通过小心地将缓冲液点出，用一毫升 PBS 清洗，丢弃上流水线。漩涡管混合珠子，重复PBS洗涤一次。从 0.65 毫升罗达明红-X 库存溶液中准备一毫升的一升、10、100 和千倍稀释系列的罗达明红-X。

皮佩特20微升珠到每个串行稀释管。在室温下旋转并孵育管子五分钟。用一毫升 PBS 清洗珠子两次。

洗涤后，将一毫升PBS加入管子，并在4摄氏度下储存长达六周。在用于实时成像的显微镜下检查珠子的荧光强度。用右手和左手将微型毛细管的每一端握住，容量为 10 微升。

将微毛细管拉向两端，以施加张力，并将毛细管的中心放在燃烧器上，使两个手动拉毛细管。在解剖显微镜下，用钳子修剪手拉毛细管的尖端。使两个尖端开口大小大约两倍，并分别是用于胚胎移植和蛋壳去除的C-优雅胚胎的短访问长度的一倍。

将拉扯的毛细管连接到口蹄疫装置中。Pippette 45 微升蛋盐溶液放到多井滑梯的井上。将5至10名成人C-优雅放在井上。

为了获得早期的C-优雅胚胎，通过将两根针定位到C-Elegance身体的左右两根针，然后互相滑动针头，将成人切成碎片。皮佩特45微升次氯酸盐溶液到井旁边的井含有蛋盐溶液和皮佩特45微升谢尔顿的生长介质到随后的三口井。将一个细胞阶段和早期两个细胞阶段胚胎转移到次氯酸盐溶液中，用较大的开口，等待40至55秒。

用谢尔顿的生长介质将胚胎移植到接下来的三口井中，以清洗胚胎。前两口井各有一到两秒。使用手绘毛细管与较小的开口仔细重复管道胚胎的蛋壳去除。

之后，用手绘毛细管连续分离双细胞阶段胚胎胚胎。去除蛋壳后，尽量减少上下对胚胎进行管道的力，以防止破裂。通过将盖玻片放在盖玻片支架上，并胶带固定盖玻片的边缘来稳定其，来准备成像室。

翻转盖玻片支架，用疏水笔在盖玻片上画一个圆圈。在疏水标记绘制的圆内添加 Shelton 的生长介质，并将隔离的爆炸体转移到圆内的成像室。现在，使用具有较大开口的手绘毛细管将少量化学功能化珠子分配到盖玻片上。

通过吹入手绘毛细管，直到珠子附着在孤立的气管上，控制珠子的位置。安装盖玻片，以避免介质蒸发，并使用倒置显微镜进行实时成像。在这项研究中，用0.005微克处理的珠子的荧光信号，用于表达GP miosin-2和M-cherihistone的转基因菌株。

另一方面，从珠子处理五微克每毫升罗达明红-X苏西尼米基酯的荧光信号太强。罗达明红-X苏西尼米基酯的浓度为0.5微克每毫升是最佳的这种特殊的转基因菌株。在实时成像过程中，识别到两个中心垂直对齐的平面。

此平面的正负 90 度角的平面是主轴平面。细胞因子后相对于细胞/珠接触界面的主轴方向角度显示，两个子细胞在通过两个接触眼的线中连接到珠子，用作接触方向。人们需要了解胚胎和蛋壳对嘴嘴皮盘施加的某些外力的反应。

从理论上讲，任何细胞反应都可以研究，例如，硫酸盐规格可以通过培养细胞和接触胶粘珠长期研究。此技术已用于了解接触依赖细胞分裂方向机制。PTF过滤器用于防止通过口蹄疫吸入次氯酸盐溶液的烟雾。