使用激光多普勒流测量测量大鼠脑血流自动调节的评估

该协议非常适合评估大脑微循环在正常和病理条件下血压变化期间调节自身血流的能力。LDF 提供了一种相对非侵入性的方法，用于在各种条件下持续监测脑血流量，而其他方法则无法采用。激光多普勒流量测量可用于非侵入性血流量评估。

例如，评估高盐饮食对健康年轻女性的血流量调节受损的影响。LDF 允许血液流动在人类和动物的许多不同的血管病床中轻松监测，并可用于各种研究。与阿德里安·艾伦一起演示这个程序的将是梅根·斯图普夫，我的研究技术专家和实验室经理。

在开始手术之前，将大鼠放在保持在37摄氏度的循环水毯上，并确认麻醉实验大鼠对踏板反射缺乏反应。将软膏涂抹在动物的眼睛上，剃开颅骨、腹颈区域和股骨三角形的顶部。从暴露的皮肤上去除任何掉发。

用酒精消毒皮肤。用循环温水泵将老鼠移动到加热垫上。并使用医疗胶带暂时将大鼠固定在上位。

在同位素氯化钠溶液中，用每mL肝素一个单位填充两个PE 50 cannulas。用手术剪刀将导管的开端斜面，以方便插入动脉。在解剖显微镜下仔细分离股动脉与周围组织后，将分离的股骨动脉段的远端进行缝合，并在动脉的中间和近端周围放置两个附加缝合线，而不拧紧结。

插入一根由主动脉下回形针制成 V 形电线，以遮挡容器，直到固定管。然后用vannas剪刀在心结附近股动脉做一个小切口。将管的斜端插入切口，将管状动脉推进到股动脉中。

取出回形针。在中间连字上拧紧结，确保管管固定到位。释放提升连字上的张力，然后拧紧近线字并关闭切口。

在动物被放置后，立即将动物放在一个尾体位置。将头部固定到立体设备中，注意不要将导管分离。在覆盖颅骨的皮肤上做一个椭圆形切口。

并使用棉签去除任何结缔组织，确保颅骨清洁干燥。将一小块卷起的拉长纸巾放在头皮的切口周围，以阻止任何出血，在解剖显微镜下，使用适当大小的钻头，用 2.15mm 钻头将 0.5 至 1 厘米的骨骼区域从左或右躯体感觉皮层上薄薄，具体取决于大鼠的大小。缓慢而小心地将骨头薄，以避免穿透头骨。

执行此步骤时，应自由应用盐水溶液，以防止区域过热。当该区域有一个粉红色的外观和/或血管可以可视化，覆盖薄骨与矿物油。并使用微操纵器将激光多普勒探针定位在外露的脑微循环上，使探针的尖端仅接触矿物油池的顶部。

对于初始探头放置，最好从大约 150 个单位的信号开始，以确保探头位于微环流上。当激光多普勒流量测量探针就位时，让动物休息30至45分钟，然后从适当的股动脉管中抽出1.5mL的血液，为期30秒。为了保持导管专利，每次抽血后，每 mL 中每 mL 中注入 100 个单位的肝素。

让大鼠恢复两分钟，然后每30秒测量一次LDF和血压两分钟。在血压和 LDF 测量后，每两分钟重复一次血量提取，直到动物达到约 20mmHg 的动脉压力。在这些具有代表性的实验中，前三次血量退血后，10只Sprague-Dawley大鼠喂养标准化实验周的激光脑血流量保持在出血前值的20%以内，直到平均动脉压力达到自动调节的下限。

随后的血量在低于自动调节下限的压力下抽血，导致激光脑血流量逐渐减少，表明脑循环不再能够产生足够的血管扩张水平，以保持脑血流量在较低的灌注压力下保持不变。在自动调节下限或高于下限时，激光脑血流与动脉压力无显著相关性，表明激光脑血流与自动调节曲线高原范围内的动脉压力无关。在自动调节的下限下，激光脑血流动脉压力关系呈负斜率。

激光脑血流与动脉压力有显著相关性。要记住的最重要的事情是非常小心地将头骨变薄，并确保 LDF 探针牢牢固定在组织的同一区域。本程序可用于测试通过胡萝卜动脉逆行输液后各种制剂微循环的活性，或评估脑循环中的功能性高血症和神经血管耦合。

该技术使研究不同药物和麻醉剂对脑循环的影响，以及高血压等疾病模型中大脑自动调节的变化。