Bu protokol, normal ve patolojik koşullar altında kan basıncı değişiklikleri sırasında kendi kan akışını düzenlemek için serebral mikrosirkülasyon yeteneğini değerlendirmek için idealdir. LDF, diğer yöntemlerle mümkün olmayan çeşitli koşullar altında serebral kan akışının sürekli izlenmesi için nispeten non-invaziv bir yöntem sağlar. Lazer Doppler flowmetry non-invaziv kan akımı değerlendirmesi için kullanılabilir.
Örneğin, sağlıklı genç kadınlarda bozulmuş kan akımı düzenleme üzerinde yüksek tuz diyetetkilerini değerlendirmek için. LDF, insan ve hayvanların birçok farklı vasküler yataklarında kan akışının kolayca izlenmesini sağlar ve çok çeşitli çalışmalarda kullanılabilir. Adrienne Allen ile prosedürü gösteren Megan Stumpf, benim araştırma teknoloji ve laboratuvar yöneticisi olacak.
İşleme başlamadan önce, 37 santigrat derece tutulan dolaşan bir su battaniyesi üzerine sıçan yerleştirin ve anestezili deneysel sıçan da pedal refleks yanıt eksikliği onaylamak. Hayvanların gözlerine merhem uygulayın ve kafatası, ventral boyun bölgesi ve femoral üçgenlerin üst tıraş. Maruz kalan cilt herhangi bir saç dökülmesi kaldırın.
Ve alkol sürtünerek cildi dezenfekte edin. Dolaşan bir sıcak su pompası ile bir ısıtma yastığı için sıçan taşıyın. Ve fareyi geçici olarak supine pozisyonunda sabitlemek için tıbbi bant kullanın.
İzotonik sodyum klorür çözeltisinde mL başına iki PE 50 kanülü heparin başına bir ünite doldurun. Ve arterlere yerleştirilmelerini kolaylaştırmak için kateterlerin açık ucunu cerrahi makasla besle. Dikkatle bir diseksiyon mikroskop altında çevre dokudan femoral arterler ayırdıktan sonra, izole femoral arter segmentinin distal ucunu ligate ve düğümleri sıkma olmadan arterin orta ve proksimal uçları etrafında iki ek dikişler yerleştirin.
Kanül sabitlenene kadar damarı tıkamak için arterin altına ataştan yapılmış V şeklinde bir tel yerleştirin. Sonra distal ligasyon yakınındaki femoral arter küçük bir kesi yapmak için vannas makas kullanın. Kanülün yontma ucunu kesiye yerleştirin ve kanülü femoral artere doğru ilerletin.
Ataş çıkarın. Yerde kanül güvenli kanül üzerinde kanül üzerinde orta ligature düğüm sıkın. Kaldırma ligatür üzerinde gerginlik bırakın, sonra proksimal ligature sıkın ve kesi kapatın.
Kanüller yerleştirildikten hemen sonra hayvanı sert bir konuma getirin. Ve kateterleri yerinden çıkarmamaya özen takınarak kafayı stereotaksik bir cihaza sabitle. Kafatasıkapsayan deride eliptik bir kesi yapın.
Ve herhangi bir bağ dokusu kaldırmak için bir pamuklu bez kullanın, kafatası temiz ve kuru olduğundan emin olun. Herhangi bir kanamayı durdurmak için kafa derisi üzerinde kesi etrafında küçük, haddelenmiş kağıt parçası yerleştirin ve diseksiyon mikroskobu altında, sıçan boyutuna bağlı olarak, sol veya sağ somatosensoriyel korteks üzerinde parietal alanda kemik 0,5 ila 1 cm alan inceltmek için 2.15mm matkap ucu ile uygun büyüklükte bir matkap kullanın. Kafatasına girmemek için kemiği yavaşça ve dikkatlice inceltin.
Bu adımı gerçekleştirirken, alanın aşırı ısınmasını önlemek için tuzlu çözelti serbestçe uygulanmalıdır. Alan pembe bir görünüme sahip olduğunda ve/veya kan damarları görüntülenebilirse, inceltilmiş kemiği mineral yağile kaplayın. Lazer doppler sondasını maruz kalan serebral mikrosirkülasyonüzerine konumlandırmak için bir mikromanipülatör kullanın, böylece sondanın ucu mineral yağ havuzunun tepesine dokunuyor.
İlk sonda yerleşimi için, sondanın mikro sirkülasyon üzerinde konumlandırıldığından emin olmak için yaklaşık 150 birimlik bir sinyalle başlamak en iyisidir. Lazer doppler flowmetry probu yerinde olduğunda, 30 saniyelik bir süre içinde uygun femoral arter kanül1.5mL kan çekmeden önce 30 ila 45 dakikalık bir eşitlik süresi için hayvan dinlenme için izin verin. Kateter patentini korumak için, her kan alındıktan sonra kanüle izotonik tuzlu heparin inmülin başına 100 birim heparin aşılayın.
Sıçan iki dakika kurtarmak için izin verin ve daha sonra iki dakika boyunca her 30 saniyede LDF ve kan basıncı ölçmek. Kan basıncı ve LDF ölçümlerinden sonra, hayvan yaklaşık 20mmHg ortalama arteriyel basınca ulaşana kadar her iki dakikada bir kan hacmi çekilmesi tekrarlayın. Bu temsili deneylerde, standart laboratuvar chow beslenen 10 Sprague-Dawley sıçanların ortalama lazer serebral kan akımı, ortalama arteriyel basınç otoregülasyon alt sınırına ulaşana kadar, ilk üç kan hacmi çekilmesinden sonra kanama öncesi değerin %20'si içinde muhafaza edilmiştir.
Otoregülasyon alt sınırının altındaki basınçlarda sonraki kan hacmi çekilmesi, serebral dolaşımın artık alt profüzyon basınçlarında serebral kan akımı sabitini korumak için vazodilatasyon yeterli düzeyde üretmek mümkün olduğunu gösteren lazer serebral kan akımının ilerleyici bir azalma neden oldu. Otoregülasyonalt sınırının üstündeki veya üzerindeki basınçlarda, lazer serebral kan akımı ile arteriyel basınç arasında anlamlı bir korelasyon yoktu, bu da lazer serebral kan akışının otodüzenleyici eğrinin plato aralığındaki arteriyel basınçtan bağımsız olduğunu gösteriyordu. Otoregülasyon alt sınırının altında, lazer serebral kan akımı arteriyel basınç ilişkisi olumsuz bir eğim vardı.
Ve lazer serebral kan akımı arteriyel basınçla anlamlı bir şekilde ilişkiliydi. Hatırlanması gereken en önemli şey kafatasını çok dikkatli bir şekilde inceltmek ve LDF sondasının aynı doku bölgesine sıkıca bağlı kaldığından emin olmaktır. Bu prosedür karotis arter yoluyla retrograd infüzyon sonrası çeşitli ajanların mikrosirkülasyon reaktivitesini test etmek için kullanılabilir, ya da serebral dolaşımda fonksiyonel hiperemi ve nörovasküler kaplin değerlendirmek için.
Bu teknik, farklı ilaçların ve anesteziklerin serebral dolaşım üzerindeki etkilerinin ve hipertansiyon gibi hastalık modellerinde serebral otoregülasyondaki değişikliklerin araştırılmasını sağlamıştır.
