环境污染物对斑马鱼幼虫的神经行为影响研究

我们的协议为研究这些物质和感兴趣的污染物对斑马鱼幼虫的神经行为影响以及揭示这些制剂的潜在神经毒性提供了一个清晰的过程。该技术可以使用斑马鱼模型中的神经行为的高通量测试进行。该方法可用于评价污染物的等位神经行为效应，以证明潜在的神经毒性，因为斑马鱼基因组与人类具有很高的同源性，因此可以为污染物引起的化学管理和公共卫生问题提供指示。

由于斑马鱼具有高通量筛选的优势，该方法为精神药物的发展和环境毒理学研究提供了深入的见解。不要因为研究第一个实验而害怕。如果您遵循协议，您将有一个成功的结果。

在进行实验前至少两小时，将室温设定为 28 摄氏度，并在 48 孔微孔的每个孔中添加 800 微升的暴露溶液。然后，使用带改性尖端的一毫升移液器将 200 微升暴露溶液中的一个幼虫转移到微孔板的每个孔中，以准备运动和路径角度实验。为了准备一个六孔微孔板用于社会行为实验，在六孔微孔板的每个井中加入四毫升的暴露溶液，并将两个幼虫在200微升的暴露溶液中转移到每口井中。

在开始测试之前，打开高吞吐量监控软件程序并选择跟踪旋转路径角度模块。将 48 孔微孔板转移到记录平台并向下拉盖。单击"文件和生成协议"开始生成新协议，然后输入 48 到位置计数位置。

单击参数、协议参数和时间，将实验持续时间设置为 1 小时 10 分钟，将集成周期设置为 60 秒。使用椭圆形形状工具，在左上角周围画一个圆圈。选择圆圈，然后单击"复制"、"右上标记"、"粘贴"和"选择"。

使用鼠标将复制的圆圈拖到右上，然后单击"复制"、"右上标记"、"粘贴"和"再次选择"。然后，将复制的圆圈拖到右下角，然后单击"生成"和"清除标记"。系统会自动在盘子的所有其他井上画一个圆圈。

接下来，单击"绘制比例"并在屏幕上绘制校准线。输入行的长度，设置单位，然后单击"应用于组"。将动物颜色设置为黑色，将检测阈值设置为 16 到 18，以便检测动物，将非活动速度设置为小速度为小速度，将小到大速度设置为 2.5 厘米/秒。

如前所述，将路径角度类从负 180 设置为正 180。要设置光条件，请单击"参数"，"光驾驶"，使用下面的 3 种触发方法之一，并增强刺激以设置光条件。单击"边缘"并设置 10 分钟的暗周期，然后设置三个周期的交替 10 分钟光和暗周期。

然后，保存协议。设置所有参数后，请关闭测试室中的照明，让幼虫在系统中适应 10 分钟。在适应期结束时，单击"实验和执行"，然后创建要保存实验文件的文件夹。

然后，输入结果名称并单击"背景"和"开始"。在实验结束时，单击"实验"和"停止"。然后将 48 孔微孔板放回光培养箱进行后续实验。

由于每组可以包括 16 只动物，因此该系统可用于在单个 48 孔微孔板的不同处理条件下对运动和路径角度进行高通量测试。幼虫的社会活动可以使用六孔板进行测试。在这个具有代表性的实验中，BDE-47的最高浓度组在黑暗时期表现出明显的低活性，而在光时期观察到BDE-47暴露导致的变化。

此外，高浓度组6-羟基-BDE-47在受精后五天进行较少的常规和平均转弯。然而，在6-甲氧BDE47接触组中，诱导了反应更多的转弯。斑马鱼的社会活动受到氯化石蜡-70和短链氯化石蜡-52b的刺激，而长链氯化石蜡-52a缩短了幼虫接触的持续时间。

重要的是要确保被转移的幼虫的测试应该有一个正常的游泳能力，没有畸形。其他变量，如颜色偏好，浅暗偏好，所有黑暗，斑马鱼的尾巴运动，可以包括回答有关环境污染物的神经行为毒性的其他问题。BDE-47 暴露溶液具有神经毒性，具有内分泌中断潜力，因此一定要避免直接接触皮肤。