只有一个实验的信息量是巨大的。我们可以检测这些细胞壁聚合物的存在，并确切地知道它们是如何分布在细胞和组织中的，甚至确定它们的丰度。这种方法的设计方式，它可以应用于几乎任何种类的植物组织从任何物种，人们可能想要分析。
植物组织的免疫化涉及许多细致的工作，很难解释，没有实际看到会发生什么。在收集植物组织样本之前，在玻璃瓶中装满足够的冷固定溶液，以完全淹没所有样品。然后选择要分析的植物组织，并将样品修剪到不超过 16 平方毫米的大小。
立即将样品浸入固定溶液中。谷胱甘肽和甲醛都是很好的固定剂，但两者都是危险的，必须在流罩中处理。将小瓶转移到真空室，慢慢吸尘。
当压力达到负60公斤时，小瓶中的漂浮物将开始沉入底部。将室内压力保持在不超过负 80 千卡。下沉过程可能需要长达两个小时。
样品在真空室中经过两个小时后，慢慢释放真空。密封玻璃瓶，在摄氏四度下冷藏过夜。隔夜固定后，丢弃任何没有沉入小瓶底部的样品。
用25毫摩尔PBS清洗剩余样品10分钟，然后用25毫摩尔管道缓冲液清洗20分钟。删除所有浮动样品非常重要，因为固定样品极有可能没有穿透样品。将样品脱水至乙醇系列中，每次乙醇浓度浸入样品20分钟。
为了渗透样品，在乙醇中加入越来越多的LR-白色树脂浓度，从一部分树脂开始到三部分乙醇。每次浓度，在4摄氏度下孵育24小时。用新鲜树脂代替LR-白色树脂，并在4摄氏度下将样品再孵育12小时。
准备嵌入明胶胶囊，选择比样品稍大的胶囊，以便样品可以完全封闭在树脂中。用铅笔标记纸标签，因为墨水会污染树脂。将一滴新鲜的LR-白色树脂涂抹在每粒胶囊的底部。
将样品放在每个胶囊中，然后用新鲜树脂填充胶囊，以达到最大容量。将盖子放在胶囊上，轻轻按压以密封。要将树脂聚合，在58摄氏度下固化胶囊，直到24至48小时左右完全硬化。
从LR-白色树脂中去皮明胶胶囊后，将树脂块置于立体显微镜下。使用锋利的剃须刀刀片，以 45 度角修剪 LR-白色方块。旋转样品，以90度角向第一个切口进行第二次切割。
继续以相同的模式切割，形成金字塔的顶点，直接位于样品感兴趣的区域之上，然后开始去除垂直于主轴的细片，直到切割表面到达样品。理想情况下，目标样品应封闭在梯形形状中。将修剪过的树脂块放置在超微切除术中。
调整刀刃和树脂块之间的角度。从块上切割厚度在 200 到 700 纳米之间的部分。使用钢丝环小心地从微原子中提起一些采样部分。
将它们放在玻璃滑梯上的一滴蒸馏去离子水中。将滑梯放在50摄氏度的热板上蒸发水，然后给部分添加一滴污渍。30 秒后，冲洗污渍并观察显微镜下的滑梯，以验证该部分的一般状态，并查看所需的植物结构。
准备一个干净的反应幻灯片，在幻灯片的每口井中放置一滴蒸馏去离子水。将一到两个样本部分转移到每滴水中。将滑梯放在一个10厘米的方形培养皿中，盖上它，让它在50摄氏度下干燥。
要为反应滑动准备一个孵化室，在移液器提示盒的底部放置一些阻尼纸巾，然后用铝箔包裹盒子。将幻灯片从盒子转移到孵化室。将 50 微升阻塞溶液放入每个井中。
孵化幻灯片 10 分钟后，取出阻塞溶液，然后每次用 PBS 两次清洗所有油井 10 分钟。在准备了手稿中描述的主要抗体溶液后，用蒸馏除离子水对水井进行最后洗涤五分钟。将主要抗体溶液放入反应井中，然后将阻塞溶液移到控制井中。
关闭孵化室。让它在室温下站立两个小时，然后在四摄氏度下冷藏过夜。在阻塞溶液中准备辅助抗体的 1% 溶液。
每口井大约需要40微升。用铝箔盖住溶液。用PBS两次清洗反应滑梯的水井，每次用蒸馏的去离子水清洗一次，每次10分钟。
确保井中不保留阻塞溶液或沉积物。将二次抗体溶液放入所有油井中。在室温下在黑暗中孵化滑梯三到四个小时。
再次，用PBS洗两次反应滑梯的井，一次用蒸馏去离子水，然后给每口井加一滴白钙氟。无需清洗，在每个油井中加入一滴安装介质，并盖上每口油井的盖子。使用荧光显微镜观察反应幻灯片中的样本部分。
对于每次观察，使用紫外线过滤器检测被钙氟污染的细胞壁和FITC过滤器来检测免疫化。为了更好地可视化结果，请使用 ImageJ 或类似的图像分析程序将每个紫外线滤镜图像与相应的 FITC 滤镜图像合并。通过精确定位特定表位的本地化，该协议能够对细胞壁组成进行定性。
例如，1，5-阿拉比南在正在发育的Quercus子醚的细胞壁中是丰富的。很少消毒的同源体通常发现在Quercus子胚胎的根端，指定器官的机械性质。木龙存在于退化细胞中，例如在奎尔库斯亚橡子成熟期的最后阶段的内窥板细胞。
JIM13 或 JIM8 识别的 AGP 表观存在于与生殖相关的结构上，例如与阿拉比多普西斯塔利亚纳的微游戏生成相关的细胞系，以及基底血管三叶草潜水器的耻辱性瘤和微生物。实施此协议时常见的错误通常很容易检测和识别。当洗涤被跳过或反应井被允许干燥时，次要抗体通常会以涂片出现。
如果未绑定的原发抗体未正确冲走，将形成绿色荧色聚合物。折叠或分离的部分通常与由于使用不干净的滑梯或侵略性洗涤不良粘附有关。样品准备也至关重要。
树脂块应没有裂缝，有清晰可见的淡黄色到浅棕色样品。低效嵌入式样品将显示粉状白点或区域。将样品尺寸保持在 8 毫米以下对于固定解决方案的渗透至关重要。
固定不良的样品会出现深棕色或几乎黑色。温度过高会导致树脂破裂，使样品的分割变得不可能。免疫化技术的使用开辟了几个研究方向。
人们可以继续使用更具体的技术，如细胞壁的生化分析，甚至进行分子方法。该技术提供的结果有助于理解细胞壁的组成，这种极其复杂的结构很难通过简单的化学分析来分析。
