由上皮细胞和原发免疫细胞组成的多细胞人类Alveal模型，用于危险评估

这些单独的人类音频模型使用相关的免疫细胞作为一个强大的工具，以预测包括纳米材料和知识药物在内的物质的急性免疫反应。这些医学结合人类上皮细胞和人类原发免疫细胞来评估这些特定的反应。使用新鲜和冷冻的单核细胞为实验计划提供了灵活性。

许多研究表明，该模型可以提供行为感和免疫感之间的星际通信的洞察。由于本演示包括所有重要细节，用于在细胞培养中学习模型的个人特征，以及复制实验的视觉指令。膀胱协议中的几个步骤很复杂，需要特殊处理。

因此，它们通过所有必需的详细信息进行演示，这些详细信息可以很容易地遵循。为了将外周血单核细胞与人布菲涂层分离，将收获的布菲大衣袋内装物均匀地分割在 250 毫升锥形管之间。小心地将每个管中的总体积与 PBS 一起携带 250 毫升，并将管子与三个温和的反转混合。

然后将 Buffy 涂层 PBS 溶液平均分割在四个新的 50 毫升管之间，然后将 10 微升 CD 14 正磁珠的第七个总细胞添加到管中，通过移液混合。灌装后，将移液器从移液器上拆下，并立即用拇指插入移液器的上部开口，然后将填充的移液器放在一个管的底部，并拔下移液器开口，使密度梯度介质慢慢流到吹毛糖比涂层 PBS 混合物下方，直到移液器内留有一毫升密度梯度介质。当密度梯度介质以相同方式添加到每个管中时，通过密度梯度离心分离细胞，并使用血清移液器从血浆和密度梯度介质层之间收集白色两到三毫米厚的外周血单核细胞层。

连接层的最佳方法是先移除等离子体，然后抑制我们的逻辑移液器来收集细胞。将外周血单核细胞从每组两根管子中拉入一个新的50毫升管中，每次洗涤时，用50毫升的新鲜PBS总体积洗涤两次。然后丢弃上清液，将移液器重新悬浮在五毫升新鲜 PBS 中，将细胞悬浮液集中到一根管子中进行计数。

计数后，再次离心细胞，并重新悬浮的pelette到80毫升的磁分离缓冲液每个出席第七细胞。然后添加10微升CD 14正磁珠每个参加第七总细胞到管中，通过移液混合良好。在4摄氏度下孵育15分钟后，用3毫升的磁分离缓冲液冲洗磁柱，并将细胞添加到该柱中。

每次洗涤用三毫升缓冲液清洗柱三次，然后将柱转移到含有一毫升新鲜磁性分离缓冲液的 15 毫升管中。然后使用柱塞和五毫升缓冲液将CD 14阳性细胞冲洗到管中。请诱导磁珠分离CD14正细胞的分化。

首先，在细胞培养培养培养中，每毫升浓度的六个细胞中，重新增加细胞。或MDDC分化，每毫升添加10毫微克和粒细胞位巨噬菌体组刺激因子到管中，并在六井细胞培养板的每个井中加入3毫升细胞，或MDM分化添加10毫微克每毫升巨噬菌体刺激因子到细胞和板细胞，就像刚刚证明的。要建立人类肺活骨上皮细胞组织三重细胞共培养模型，首先将1.5毫升预热细胞培养基转移到12孔板的适当孔中，并将细胞培养物插入到每口井中。

接下来，将500微升的上皮细胞悬浮液以每毫升5倍10的密度添加到每个插入物的阴面，并覆盖板，在细胞培养箱中进行为期四天的孵化。或者MDDC播种用一毫升新鲜温暖的细胞培养剂取代用于MDDC分化的六孔板的井中的上能，并使用细胞刮刀将粘附细胞从每口井中分离出来。用超生和每井清洗每一个井三次，并将所有细胞溶液组合到一个离心管中。

通过离心和无菌钳子收获的 MDDC 将 12 个井板中的刀片倒置在无菌培养皿中。从插入的基底侧刮掉任何上皮细胞，并在新鲜细胞培养基中重新暂停 MDDC，每毫升的浓度为该细胞的 4.2 倍 10。然后在每个刀片上添加 150 微升的细胞，使刀片的整个基底表面均被无气泡的液体覆盖。

对于在收获分化的MDDM后播种，如为MDDC所展示的，将细胞稀释至每毫升新鲜细胞培养基集中的2.5倍至4个细胞，并在每个上皮细胞和含有细胞培养物的MDDC壁上添加500微升细胞，然后将盖子放在盘子上，并将板放在细胞培养库中24小时。第二天，从每个细胞培养物插入和威尔斯的脂肪和基底区域吸入上一代。然后，对钳子进行消毒，从井中提起刀片，并将 600 微升新鲜预热剂添加到每个孔的细胞培养基中。

经过六天的分化后，MMM在形状上出现圆形，而MDDC则形成由形状更拉长且可观察到的凸出的细胞构成的簇。在膜插入物上生长三天后，上皮细胞在基底室的细胞培养基中形成致密性，在接触膜破裂的正对照后观察到乳酸脱氢酶释放显著增加，证明模型对细胞毒性物质的反应能力。哺乳脱氢酶释放量没有增加，如使用TNFα或LPS的脂肪刺激时测量的。

与对照未处理的细胞相比，在LPS和TNFα处理样品中观察到IL6和IL8的释放显著增加。与使用LPS和TNF alpha外露共培养物中的细胞解冻模型相比，使用MDDMs和MDDC的新鲜外周血单细胞的共培养模型在细胞形态上没有差异，观察到上皮层被破坏。可以使用其他类型的人体细胞，如气道或支气管细胞，其他端点也可以分析。

主要是研究人员已经受到这种技术的启发，使用类似的设置，但具有不同的细胞类型。