小鼠的共性共性隔离和识别

这种方法识别可行的眼结膜微生物，这是具有挑战性的，由于眼睛敌对的环境。它可以帮助回答眼微生物群是否存在，以及眼部疾病的细菌存在如何变化。与DNA测序（可识别可行和不可行微生物）不同，该方法只识别可行的微生物，从而更清楚地了解眼共体群落。

研究表明，难以诊断的眼疾，如非自身免疫和自身免疫性干眼有独特的眼部细菌存在。这种方法可用于诊断具有独特微生物特征的眼部疾病。首先自动切割适量的棉击和牙签，让老鼠数量被擦拭，然后捏掉一厘米长的棉击1/2块，然后拉到边缘，形成一个扁平的单孔层，在击球分崩离析之前停止。

在牙签尖端扭曲时轻轻握住伸出的一块，围绕牙签的一端旋转击球。成品眼拭子将有一个非常薄的棉层伸展在尖端延伸约1/2至1厘米远的尖端。将棉签插入一个小烧嘴中，向下拭子侧，然后盖住并高压灭菌。

使用消毒剂清洁工作区域，以尽量减少污染，并引用 0.5 毫升无菌脑心脏输液，或 BHI 介质放入标有 1.5 毫升无菌微离心管。将管子盖在架子上，并将机架放在冰上。从左到右设置工作流程，从小鼠麻醉站开始，该站包含带实验鼠的笼子、空无菌笼、室温麻醉、25号针头和1毫升注射器。

接下来，准备一个眼拭子站，其中含有冰上引用的 BHI、消毒眼拭子、润滑眼药水、生物危害容器、干净的纸巾和 70% 异丙酚喷雾剂。最后，设置了带室温血脂板的电镀站、10微升移液器、10微升无菌一次性提示和生物危害废物容器。通过挤压后脚垫，确保鼠标正确麻醉。

只有在没有移动的情况下才能继续。分配一只手处理麻醉小鼠，另一只手处理眼拭子和文化。将鼠标从笼子中取出，放在工作面的顶部，使其侧面露出左眼。

用异丙酚喷洒戴手套的手，用纸巾擦干。用专用介质处理手解开标记的 BHI 微型离心机管，并将两者放回机架中。将棉质涂层的眼拭子尖浸入 BHI 中，然后从管中取出拭子，同时将尖端两次旋转到内管上，以去除多余的液体并将其取出。

用鼠标处理手，轻轻地按住鼠标的脖子擦伤。另一方面，将眼睑尖端贴在左眼的中间结合区域。轻轻压低眼球，在下眼睑和眼睛之间移动拭子10次，保持恒定的压力。

无需触摸毛皮，请轻轻取出垂直于插入位置的拭子尖端。将棉签侧向下放置，直接放入带有 BHI 介质的标记微型离心机管中。将眼滴涂在擦拭的眼睛上。

如有需要，获取皮肤或毛皮拭子作为控制样本，在每个拭子之间适当消毒手套。完成后，将鼠标返回笼子。让拭子在冰上站立10至15分钟，然后消毒戴手套的手，取出拭子，同时在介质中混合尖端10次旋转。

将尖端旋转到管内壁上进行五次旋转，将其丢弃在生物危害容器中，从而提取拭子。重复每个鼠标的过程。通过在37摄氏度下静态地孵化管一小时来丰富样品。

在孵化过程中，给每个鼠标眼拭子或控制拭子贴上一个室温 TSA 板的标签，并将其分成两半。从孵化器中取出浓缩样品，放在冰上。短暂地将样品漩涡混合，然后将样品的 10 微升引到 TSA 板上，并将板倾斜以形成条状。

重复两次。在板分界线的另一边，创建 10 个点，每个点有 10 微升样品。在37摄氏度的高温下将盘子孵化18小时，两天四天，在一个干净的室内，防止阿加板干燥。

数一数条带中的殖民地。注意形态，并计算每个拭子的菌落形成单位，以形成形态相似的分离物。看看在条带中没有捕获独特生物的点。

为了便于可视化，我们在中间和右板密集地镀细菌。通常，我们观察到的眼拭子板中的细菌要少得多。请注意，有时，眼拭子可能不会产生可恢复的细菌。

此处显示了具有代表性的眼拭板，其形态多样化的分离物与 C57 黑色六只鼠标分离。对于每个不同的隔离区，殖民地被计算在条中，相对丰度被计算和绘制。对于微生物特征，细菌是从单个鼠标眼拭子板中挑选出来的，以产生主TSA板。

当生长出现时，会进行其他测试来描述或识别微生物。主板用于提供足够的接种，以扩大各自的隔离。为了识别隔离物，TSA 板在一夜之间被条纹和孵育，并进行了 MALDI-TOF MS。

此处显示的分离物示例被确定为链球菌酸性氨基尼穆斯和气管病毒。从雄性C57黑六只小鼠身上发现了明显不同水平的共生生物。链球菌酸性氨基尼穆斯、气可可病毒凝固阴性葡萄球菌和大肠杆菌从C57黑六N小鼠中分离。

在尝试此协议时，请记住，最佳结果将通过在眼拭子步骤中涂上拭子并花时间来实现。如果获得 MALDI-TOF MS 的机会有限，则可以通过微生物和生化测试识别分离物。