שלום לכולם. אני צ'יקסיאו ג'יאנג, פרופסור חבר במחלקה טוקסיקולוגיה, בית הספר לבריאות הציבור באוניברסיטת צ'ינגדאו. בשם קבוצת המחקר שלי, אני הולך להציג את הנכסים של שימוש בעובר העוף בפיתוח הערכת רעילות הלב שלנו.
עובר עוף הוא מודל התפתחותי קלאסי בעל יתרונות רבים כמו מניפולציה קלה, נגישות גבוהה, מערכת עצמאית סגורה וכולי. עבודה עם מזהמים סביבתיים מרובים, כגון חומצה טאנית פנולית. פליטת דיזל, במיוחד העניין בצינורות ננו הפחמן.
יש לנו שיטות חשיפה מרובות שהוקמו במעבדה, אבל מסיבה גדולה יותר, ההערכות התפקודיות מבוצעות גם באופן שגרתי. בסרטון הזה, אני אראה לכם את הפרטים, של שיטות החשיפה ושיטות ההערכה התפקודית המורפולוגיות שלכם. תרגישו חופשי ליצור איתנו קשר אם אתם מעוניינים.
תודה. הנה שיטות החשיפה שלנו שאני יכול להציג בפניכם. השיטה הראשונה שאני הולך להציג היא הזרקת תאי אוויר, שבו תוכל להזריק ישירות לתא האוויר.
נקו את פני הביצים עם תמיסה פולי-יודיד. זהו פתרון פולי-יודיד זמין מסחרית, מדולל עם מים deionized, 1/5. ואז, אני מייבש את קליפת הביצה עם נייר טישו, בלי קרצוף.
זה חשוב כי קרצוף ישבור את ציפוי שכבת המגן שלהם בצד החיצוני של הקליפה. ניקה את כל הביצים בחדר החשוך ואת לסמן את תא האוויר עם עיפרון. אל תכלול ביצים עם סדקים על הקליפה.
כמו כן לא לכלול ביצים עם תאי אוויר בצד. אם יש לזה קצה בוטה, אלה מאוד לא סביר לבקוע בדרך כלל. לחטא את אזור תא האוויר, כמו גם את גשושית המתכת, עם 75% אלכוהול.
לנגב אותם יבש, ולאחר מכן לקדוח חור קטן במרכז אזור תא האוויר עם הגשוש. אל תתקע את הגשוש עמוק לתוך תא האוויר. במקום זאת, רק לשבור את הקליפה עם קצה הגשוש.
אם החור עדיין אינו גדול מספיק, לשבור את הקליפה שוב בקרבת החור הקיים, עד שהוא גדול מספיק כדי לאפשר לך החדרת הקצה. הכנס קצה פיפטה לתוך החור עם הקצה נוגע בממברנה הפנימית. לאט, להזריק את התערובת ולהחזיק אותו שם לפחות 10 שניות.
זאת כדי לאפשר את חלוקת השמן המלאה. ואז להסיר את הקצה. עכשיו, לאטום את החור עם מברשת טיפה של פרפין מומס.
היזהר לא לטפטף פרפין מומס על הזיכרון הפנימי. לאחר האטום, מניחים ביצים באינקובטור עד שהן מגיעות לשלב העוברי הרצוי. השני, השיטה שאני הולך להציג היא הזרקת מיקרו.
קודם כל, הביצים צריך להיות ניקה ומטופל כמתואר בסעיף הזרקת אוויר. הליך זה צריך להתבצע במכסה המנוע המעוקר. לחטא את אזור תא האוויר, ומכשירים עם אצטון.
לקדוח חור קטן במרכז אזור תא האוויר עם גשוש המתכת. אין לתקוע את הגשוש עמוק לתוך תא האוויר, או שהזיכרון הפנימי עלול להיפגע. לאחר מכן, השתמש באותו תהליך כדי להגדיל בזהירות את החור עד הקוטר הוא כשני מילימטר.
זה יכול לאפשר את אישור היחס של הזיכרון הפנימי. לאחר מכן לטעון את הפתרון מזרק מיקרו בזהירות להכניס את המחט דרך החור לתוך הממברנה הפנימית עבור כשלושה מילימטרים בסך הכל. בעדינות לוותר על הפתרון ולאחר מכן להסיר את המחט.
שמור את המחט מאונכת ככל האפשר. אטם דק את החור עם חתיכת סרט דבק קטנה. לכסות לחלוטין את החור כדי למנוע התייבשות עובר ומוות במהלך הדגירה הבאה.
השיטה השלישית שאני הולך להציג היא עירוי תא האוויר. שבו אתה להחדיר מזהם גז לתוך תא האוויר. לנקות ולטפל בביצים כמתואר בסעיף הזרקת תא האוויר.
ואז אתה יכול לקרוא ביצים עד היום העוברי 17. לטפל בביצים ביום עוברי 17 כדי לסמן את אזור תא האוויר. ביום העוברי 18, להוציא ביצים מן האינקובטור, לחטא את אזור תא האוויר ואת המכשירים, עם אצטון.
ואז לקדוח בזהירות שני חורים קטנים משני צידי תא האוויר. אחד הוא להזרקת גז או תרסיס. השני הוא להרחבת האוויר שלנו.
שלוט בזהירות בגודל החורים, כך שהצד של חור ההזרקה מספיק רק למחט הצנתר, בעוד שקוטר החור המתרחב צריך להיות קצת יותר גדול. קוטר של כמילימטר אחד. עכשיו זה שקית הדגימה בה אנו משתמשים כדי להחזיק את גז המטרה או תרסיס.
באפשרותך להחליף בכל מכשיר שבו אתה משתמש. יוצקים בעדינות 10 מ"ל של גז או תרסיס למזרק. ואז, חברו בזהירות את המזרק למחט הצנתר שלנו עם המחט הפנימית מרחוק כך שהיא רכה.
הכנס בעדינות מחט קטטר זה לתוך חור העירוי. ברגע שזה שם, להפעיל לחץ על מחט הקטטר. זאת כדי למזער את הדליפה מאתר ההזרקה.
אצבע נוספת ניתן לשים סביב עם חור לגרש עבור אישור העירוי שלך. אם אתה עושה את עירוי בעדינות, זרימת האוויר מחור לגרש צריך להיות מורגש בקלות. זה האוויר המקורי בתא האוויר שגורש.
כאשר העירוי נעשה, לאטום את שני החורים מיד. הקלטות האלה והחזרת הביצים לאינקובטור שלך. אני יכול להציג את תהליך הערכת נקודות הקצה שלנו.
למרדים לחלוטין את בעלי החיים עם פנטוברביטל 33 מ"ג/ק"ג. הזרקת IP נבדק על ידי הפתיחות. ואז מניחים תרנגולות על שולחן המבצעים.
לחטא את אזור הבטן ואת האלקטרודות עם אתנול. לאחר מכן, הכנס שתי אלקטרודות מחט משני צידי הבטן תת ברציפות. ודא כי המחטים לא להיכנס לחלל הבטן על ידי הרמת העור קצת.
ולהכניס את המחט משם. לאחר החדרה, בזהירות לדחוף את המחט קדימה עד שהוא מגיע לצד חלל החזה. ודא כי המחט לא ללכת עמוק לתוך הגוף או לבלוט מן העור.
ואז לבצע את המדידות עם מכשיר אלקטרוקרדיוגרפי. ניתן להשתמש גם בכלי סמינר אחרים המסוגלים לאק"ג. זוהי שיטת הערכת נקודת הקצה השנייה שלנו היא למפות עבור Motrin.
זהו חתך הרוחב של הלב בדרך של HME. זה החדר הנכון שאנחנו הולכים להיות מדידה עם. כדי לעשות זאת, אנו משתמשים בשני שליטים.
סרגל 1, ושליט 2. עכשיו אנחנו פשוט להעתיק סרגל אחד למסך ואנחנו לשנות את גודלו לגודל המתאים ולאחר מכן לסובב את זה. ואנחנו מזיזים אותו כך ששני הקצוות של הקו האופקי נחים על שני קצות 3 קירות החדר הימני.
ועכשיו יש לנו שבעה קווי מדידה שחוקים את שלושת קיר החדר הימני שלנו. עכשיו אנחנו מעתיקים את הסרגל המשני לתמונה גם כן. אנחנו גם לשנות את גודלו קצת לסובב ולהחליף את זה, כך שהוא יהיה ממוקם אותו.
קו אופקי זה הולך במקביל לקיר החיצוני של החדר הימני. והאנוני היה חוצה את הנקודה שבה קווי החומר הלבן של השליט פוגשים את הקיר הפנימי או את החדר הימני. ואז אנחנו עושים נקודות מדידה כך שניתן למדוד את זה מאוחר יותר עם תמונה J.We חוזרים על התהליך הזה 7 פעמים לכל מדגם, כך המדידה הייצוגית שלנו של החדר הימני.
אני אראה לך סיכום של תוצאות הווה. זוהי הזרקת PFOA לתוך הביצה לפני הדגירה, ואתה יכול לראות כי עם הגדלת אלה של הזרקה ריכוז הסרום LPF בסרום גדל ביעילות. לפי ההדגמה, האפקטיביות, של הזרקת המיקרו.
אתה יכול לראות כי A הוא שליטה, ואת B, הוא המקום שבו האנטי וירוס אקספרס בחלבון q פלואורסצנטי גדול כבר מוזרק. אפשר לראות פלואורסצנטיות חזקה. וזו ההדגמה ליעילות עירוי האפיתל.
אתה יכול לראות כי עם עירוי, שינויים סיבים אופטיים דרמטי נצפתה ברקמת שריר הלב. בסדר. ואתם יכולים גם לראות כי מרווחי R-R של התרנגולות הבקיעות 0, 1, ו 2 שבועות. זה גם השתנה באופן משמעותי לאחר עירוי עם פליטת דיזל.
מה שמצביע על כך שאתה לוקח בחשבון את השיטה הזו. כאן, אתה יכול גם לראות כי האפקטיביות של עירוי אפיתל בדוגמה זו. אתה יכול לראות כי החדרים הנכונים של הלב גדל ביעילות לאחר תרסיס חדור פליטת דיזל.
וגם כמובן, הנה אנחנו משתמשים בשיטות ההסטומוורפומטריות. אנחנו רק מראים לך. זה די יעיל. בסדר.
אלה כל השיטות שאציג בפניך. אני מקווה שזה יכול להקל על עבודה של אנשים אחרים עם עובר עוף ככלי מחקר רב עוצמה טוקסיקולוגיה התפתחותית. שיהיה לך יום טוב.
