建立稳定的双生糖核糖核关系从口腔

糖精是有义务的寄生虫，需要与适当的宿主细菌共同培养。由于人类口腔糖精可以很容易地分离为大多数人使用已知的宿主细菌物种。该协议将允许任何研究者或实验室在二元共生培养中隔离自己的菌株。

该技术使用大多数微生物实验室中存在的简单设备和设备，并已成功地用于培养代表六种糖精的 30 多种分离物。如果能够识别和隔离适当的活性细菌宿主，此协议可能有助于隔离其他候选辐射物种，以及不同环境和其他哺乳动物的糖精。证明这个程序的将是安德鲁·柯林斯，他曾是我实验室的博士后研究员。

首先，开始培养宿主细菌，如阿拉奇尼亚丙酸菌，有足够的时间让它们生长到早期静止阶段。为了启动这种培养，接种2至5毫升含有0.1%酵母提取物的试管大豆汤，并在37摄氏度下24小时孵育。接下来，用轨道蚀刻 0.2 微米滤膜组装滤芯支架。

用铝箔包裹，通过高压灭菌，以及离心管和盖组件消毒。在意外接触非消毒表面时，对额外用品进行消毒。通过沿着牙龈线刮牙菌斑，使用无菌纸点、优雅的卷发或无菌牙签或移液器尖端收集牙菌斑，并将其转移到适当的缓冲区，如 MRD 或 PBS。

将样品放在冰上，直到准备继续。使用涡流和管道与小移液器尖端相结合，大力补充牙菌斑，然后将重新喷出的牙菌斑样本添加到含有 9 毫升 MRD 缓冲器的管中。使用无菌技术小心地拆解无菌过滤器组件。

取消四分之一转弯，并重新拧紧滤镜支架，以确保螺纹正确接合，并且设备正确关闭。使用注射器通过仪器通过 10 毫升 MRD 缓冲器清洗膜。要将样品涂抹在洗涤的滤镜上，请从注射器中取出柱塞并将其连接到滤芯装置上。

将无菌离心管放在过滤装置下方以捕获过滤液，然后将分散的牙科样品倒入注射器中并将其加载到过滤器中。然后将光压施加到柱塞上，将样品推过过滤器。再用 10 毫升 MRD 缓冲器清洗膜，然后与过滤样品在同一管中收集流。

然后用怀疑的封管，并保持冰上。在管子和盖子上做一个方向标记，以识别离心后细胞颗粒的位置。将管子放在一个高速离心机中，上面有标记，在4摄氏度下将样品在6万G处离心一小时。

离心后，小心地倒出超细剂，将颗粒保持在管子的上侧。然后通过大力涡流，将颗粒在一到两毫升的 MRD 缓冲器中重新喷出。通过将两毫升适当的生长介质引入管中，准备培养管。

然后，在每个管中加入200个宿主生物的隔夜培养微升和100至200微升的再悬念过滤样品。在适合宿主有机体的条件下孵化组合样品。每两到三天通过将二元培养的200微升转移到新管中的两毫升新鲜生长介质中通过细胞。

如果通道培养物在未受感染的宿主培养物的 200 微升中未出现生长，则通过细胞时，将接种管返回孵化器。阿里报价 24 微升的 PCR 主混合成 0.2 毫升 PCR 管。在受感染的糖精培养的微升中，将管子置于热循环器中。

设置文本手稿中描述的 PCR 程序。在 1% 的Agros凝胶上加载并运行 PCR 产品。一个约600个基地的波段将确认糖精的存在。

为了确认正文化的纯度，在无菌缓冲区中对糖精的共文化进行10倍的连续稀释，并在 agar 板上铺上 100 微升。在适当的生长条件下孵化养殖，观察污染物。一个约600个基地的波段将确认糖精的存在。

PCR 检测在初始感染培养中可能呈阴性，因为糖皮共生体数量少。然而，经过几段，一个强大的PCR产品应该出现，表明已经发生了稳定的感染。测试几个主机物种与相同的糖皮菌过滤通常会有一个较低的成功率。

由于共生主机的交互非常具体。随着受感染文化的生长，正常浊增长应该会出现。随着共生关系的建立，受感染的文化将比未受感染的宿主生物的培养物显得不那么浑浊。

通过在电镀后采摘受感染的菌落，可以净化受污染的文化。与未受感染的殖民地相比，受感染的殖民地有时可以通过不规则的殖民地形状来识别。普通殖民地的比例取决于二元文化中糖精的滴定。

如果滴定率较低，则出现不规则的菌落会更少，因此很容易选择受感染的殖民地并开始纯二元文化。对于几段话来说，文化可能并不积极。因此，将需要一些病人。

还必须定期检查二元文化的污染情况，因为这样会破坏文化的稳定，导致糖体的死亡。二元文化可用于各种实验室实验。DNA和RNA可以分别提取用于基因组测序和转录体分析。

也可以使用动物模型来调查致病性。