基于多路复用珠子的流量分析系统的快速、多路双记者 IgG 和 Igm SARS-CoV-2 中和检测

据我们所知，这是基于珠子的复用协议的第一个例子，该协议使用两个报告信号同时测量每个分析的两个结果。该技术允许用户同时测量抗原特异性IgM和IgG，样本更少，结果时间更短。虽然这种双记者方法是专门针对抗体同位素的，它可以适应测量其他分析对，如转化后修改或自由与绑定的药物形式。

今天，我们展示了我们的程序，我们有史蒂夫·安杰洛尼博士，Luminex公司的高级现场应用科学家。要开始双记者IgG和IgM血清学测定，准备所需的多重珠混合从个别夫妇珠和控制珠子股票的浓度为1倍10至每毫升6珠。接下来，通过在 PBS-TBN 缓冲器的 990 微升中加入 10 微升血清，将血清样本稀释 100 倍，然后通过将 PBS-TBN 的 1：100 稀释的 20 微升稀释剂添加到 180 微升中，将样品再稀释 10 倍。

当珠子混合和血清样品准备好时，将50微升的多重珠混合到96井不结合微蒂特板的分配井中，然后将稀释血清样品的50微升加入到适当的油井中。添加所有样品后，用微板箔密封盖住板，在37摄氏度的加热板摇床上孵育15分钟。然后，将珠子从反应混合物中分离，将板放在磁板分离器上两分钟。

将板放在磁铁上，取出铝箔密封件。然后小心地将盘子倒置在废容器上，轻轻地将超高纳特从井中轻拂出来。当仍然把盘子放在磁铁上时，在吸血纸上弄脏盘子。

要清洗反应井，请从板磁体中取出板，并在每口油井中加入 150 微升 PBS-TBN。用新的铝箔密封盖住盘子，在加热的摇床上孵育两分钟，然后再将其放回板磁铁上两分钟。在将板保留在磁铁上时，倒置板以丢弃超高纳特，并将板印在吸血纸上。

第二次 PBS-TBN 洗涤后，从磁铁中取出磁板，并在每口井中加入 100 微升新鲜检测试剂混合物。用微板箔密封盖住板后，将其放在加热板摇床上15分钟，然后放在磁板分离器上两分钟。当磁铁板在磁铁上时，将板倒置在废容器上并将其涂在吸水纸上，从而丢弃检测试剂混合物。

用 PBS-TBN 清洗反应井，将之前演示的两倍，然后从磁铁中取出磁板。在每口油井中加入100微升PBS-TBN，然后用铝箔密封盖住板，在37摄氏度下摇晃两分钟。取下铝箔密封件，然后从流分析仪中的每口油井中读取 50 微升样品。

要读取板，请选择左上角的下拉菜单，导航到板配置，加载以前配置的板，并选择运行板。通过选择 Eject 图标弹出板载波，然后将板加载到板载体上，然后选择缩回图标以收回板载体。一旦板载体已延长到分析仪，选择运行图标开始读取板。

对于双记者中和分析，在96井不绑定微蒂板的分配井中加入50微升的多路复用珠混合体，然后在每米甲2井中加入每毫升ACE2的25微升微升，并用铝箔密封覆盖板。在加热板摇床上孵育两分钟后，在指定的油井中加入 25 微升 1：500 血清稀释。添加所有样本后，执行孵化、清洗、检测和分析步骤，如先前对血清学检测所证明的那样。

抗IgM的测试结合到DyLight 405记者染料使用血清样本在5至60天内从症状发作和IgG条血清样本没有产生高信号的尖峰抗原。对于IgM中荧光强度高的样品，对受体结合域和核胶囊抗原的信号最高。虽然某些样品中的IgM滴答声应该升高，但观察到的中等荧光强度水平不超过140 MFI单位。

此外，与同浓度的植物红素标记为抗IgM相比，IgM的控制珠在荧光强度中位数方面缺乏显著的动态范围。对于IgG检测，与荧光超级亮436的链球菌结合相比，亮紫罗兰结合体的荧光强度信号中位数更高。然而，在ACE2的点滴声中，灿烂的紫罗兰结合的信号强度各不相同。

ACE2 浓度的绚丽紫罗兰结合的这一信号波动也干扰了确定 ACE2 在 IgG 滴答声范围内的抑制百分比。对于IgM检测，植物红素抗IgM显示的信号高于DyLight 549抗人类IgM产生的信号。在确定 ACE2% 抑制 IgM 结合时，两种 IgM 检测试剂之间略有但微不足道的差异。

因此，该过程中最重要的步骤之一是准备您的多路复用珠混合从您的个人珠子股票，并确保你这样做正确。因此，这个程序也可以用来测量疫苗的疗效和监测对其他病原体的免疫反应。