嗜碱性粒细胞活化试验用于过敏诊断

嗜碱性粒细胞活化试验是一种补充的体外诊断试验，用于评估 IgE 介导的过敏反应，这些反应已被证明对药物、食物或吸入剂引起的反应以及某些形式的慢性荨麻疹有用。该测试基于通过流式细胞术测量活化标志物来确定嗜碱性粒细胞对变应原或药物交联 IgE 活化的反应。嗜碱性粒细胞活化试验可以是一种有用且互补的工具，可以避免受控激发试验以确认过敏诊断，尤其是在经历严重危及生命的反应的受试者中。

此外，与其他仅适用于少数药物和过敏原的体外方法相比，该测试的优点是能够分析对任何药物或过敏原的反应。该测试的主要局限性与非最佳敏感性有关，特别是在药物过敏中。需要在样本提取后不超过24小时进行测试，以及实验室和诊断算法之间缺乏标准化。

首先在九毫升肝素化管中收集外周血，并将样品放在转子中以将其保持在室温下，直到实验方案需要为止。标记两个五毫升细胞仪管，每个管用于阴性和阳性对照。还要为每个管子标记一个用于测试的不同过敏原或药物浓度。

然后将管子放在架子上，使管子完美贴合而不会滑动。对于第一个阳性对照，在0.05%PBS-T中制备N-甲酰甲硫酰基-亮酰基-苯丙氨酸或fMLP的四微摩尔溶液，以确认嗜碱性粒细胞的质量。对于第二个阳性对照，使用 PBS-T 制备每毫升 0.05 毫克的抗 IgE 溶液。

通过每 20 微升刺激缓冲液中加入 CCR3-APC、CD203c-PE 和 CD63-FITC 抗体各 1 微升来制备染色混合物。然后向每个试管中加入 23 微升这种染色混合物。向阴性对照管中加入100微升PBS-T。

向其中一个阳性对照管中加入 100 微升 fMLP，并在其余试管中向另一个管中加入 100 微升抗 IgE E。加入100微升不同浓度的过敏原或药物，并在37摄氏度下孵育10分钟。孵育后，向每个试管中轻轻加入100微升血液以避免溶血。

然后轻轻涡旋试管，并在恒温浴中以中等搅拌在37摄氏度下孵育25分钟。将试管保持在四摄氏度至少五分钟以停止脱颗粒。向每个试管中加入两毫升裂解缓冲液以裂解红细胞。

涡旋每个试管，然后在室温下孵育试管五分钟。将试管以 300 克在 4 摄氏度下离心五分钟。然后将架子倒入水槽中以倒出上清液，而细胞仍保留在管的底部。

向每个试管中加入三毫升PBS-T以洗涤细胞并涡旋试管。使用相同的参数集进行第二轮离心，并通过将架子翻转到水槽中来倒出上清液。然后将样品保持在四摄氏度避光，直到流式细胞术。

将流式细胞仪连接到计算机软件，等待细胞仪准备就绪。按照文本手稿中的说明加载模板和仪器设置。开始样品采集过程。

要选择活化的嗜碱性粒细胞，首先，从侧散射-前向散点图中门禁淋巴细胞。然后将淋巴细胞群中的嗜碱性粒细胞作为CCR3 + CD203c +细胞进行门禁，并且每管至少获得500个嗜碱性粒细胞。使用阴性对照管将CD63阈值设置为约2.5%并分析样品。

通过使用过敏原和药物进行嗜碱性粒细胞活化试验（BAT）来研究IgE依赖性超敏反应。通过测量多个降低的过敏原浓度的反应性来分析嗜碱性粒细胞敏感性，这有助于确定诱导50%嗜碱性粒细胞或EC50反应的过敏浓度。首先，从侧散射-前向散点图中对淋巴细胞进行门控。

然后将嗜碱性粒细胞从淋巴细胞群中选门为CCR3 + CD203c +细胞。然后使用CCR3-CD63图分析使用CD63作为两种药物和不同浓度过敏原的激活标志物的嗜碱性粒细胞活化。该测试是用新鲜的全血进行的，必须在抽血后不超过24小时进行。

测试中使用的刺激剂不应包括任何赋形剂，并且需要考虑药物的化学特性。其他附加的体外方法用于诊断IgE介导的过敏反应，或测定sIgE，或组胺释放试验。