人性化调解员发布分析作为过敏原效力的读出

检测是模拟由患者IgE和过敏原的交叉连接引起的嗜血杆菌脱粒的重要研究工具。因此，检测可用于模拟1型过敏反应。检测是健壮的，可重复的，可定制的。

此外，它具有高度敏感性，因为它可以用少量的重组或纯化过敏原，甚至与复杂的过敏原提取物一起执行。该方法用于诊断过敏症，因为它分析患者的IgE对过敏原的反应。此外，该方法也适用于分析交叉反应和监测 AIT 治疗效果。

首先从细胞培养瓶中采集Ag8细胞，并将细胞转移到离心管中。通过离心将细胞压低5分钟，在室温下为250倍。吸气超高分子，并重新将细胞颗粒重新消耗到人性化的RBL细胞介质中每毫升约10到6个细胞的最终浓度。

在Ag8细胞悬浮中稀释人类血清1至10，在检测中最后稀释1至20，在37摄氏度和5至7%的二氧化碳下孵育1小时。当人性化的RBL细胞达到50%至90%的汇流时，小心地从T-75细胞培养瓶中吸气介质，而不接触粘附的人性化RBL细胞。将10毫升DPBS加入烧瓶的对面，而不是直接加入细胞，清洗细胞两次。

吸气DPBS，加入5毫升预热1次尝试普辛EDTA细胞分离和孵育5分钟在37摄氏度。轻轻敲击烧瓶以分离细胞。将细胞悬浮器转移到15毫米离心管中，用人性化的RBL细胞介质或DPBS填充管，稀释试剂-EDTA。

在室温下，以250倍g为离心，使细胞离心5分钟。吸气超高分子，并重新使用五毫升的人性化RBL细胞介质的颗粒进行细胞计数。计算细胞后，稀释人性化的RBL细胞介质中的细胞，最终浓度为每毫升2倍10至6个细胞。

每口井加入50微升人性化的RBL细胞悬浮物，相当于无菌96井板中每口井的1倍10至5个细胞。离心预孵化的Ag8血清悬浮，并将离心Ag8血清悬浮物的50微升转移到每个含有人性化RBL细胞的井中，而不会干扰Ag8细胞颗粒。使用无抗原的敏感未刺激细胞作为没有抗原控制的底部信号高原或背景的指示，并且不敏感背景和最大裂解控制井。

盖上盖子，在37摄氏度和5%至7%的二氧化碳下过夜孵育。吸气含有细胞介质的塞拉，倒置并点击吸水纸上的板，清空板以清洗人性化的RBL细胞。通过每口井添加200微升的Tyrode缓冲物来清洗细胞三次，并在前两次洗涤中每洗一次孵育约30秒。

第三次添加 Tyrode 缓冲后，吸气缓冲器，将溶液留在井中，直到准备好添加抗原稀释。将100微升抗原溶液转移到每个含有预敏化人性化RBL细胞的井中，但不刺激具有抗原的最大裂解和非敏感背景细胞。在最大裂解控制井、非敏感背景控制井和敏感无抗原井中加入 100 微升 Tyrode 缓冲器。

在37摄氏度和5%至7%的二氧化碳下孵育细胞一小时。用每口井10%的10%Triton X-100微升处理最大裂解控制井，并正确混合，完全裂解细胞，100%释放β-六氧沙米尼达塞。将 50 微升基板溶液添加到新的不绑定 96 井板中。

将50微升超高分子从含有板的人性化RBL细胞的井中转移到含有基板溶液的新板中，并在37摄氏度下孵育板一小时，以允许氟基板的转换。每口井加入100微升停止溶液，测量文本手稿中描述的荧光。在β-六索氨基酶活性检测中获得的钟形曲线，表明由于过敏原的过量，免疫球蛋白E的抗原表位的单价占用，从而抑制了过敏原免疫球蛋白E在高抗原浓度下的交叉连接。

使用线性回归分析计算了半最大介导器释放所需的抗原浓度。进行细胞生存性检测，以排除从敏感血清或用于刺激的抗原中产生的细胞毒性效应。五种不同的人类血清用于β-六氧氨基苯甲酸酶活性检测，五分之四的血清来自白木花粉过敏患者对Bet v 1刺激的反应，表明Bet v 1是一种有效的过敏原，负责免疫球蛋白E介导过敏症状。

评估了免疫球蛋白E对同源过敏原的交叉反应。对 Bet v 1 的反应在两个患者中都被发现， 但患者 2 也对 Cor a 1 做出反应。Bet v 1 同源食物过敏原， 表明高 Cor 在患者 2 中具有 1 个交叉反应免疫球蛋白 E 水平。

评估了过敏原突变变异的低过敏性，并将其与野生类型对应物进行比较。Bet v 1折变异的释放曲线与野生类型过敏原相比，转向更高的抗原浓度，导致抗原浓度显著提高，从而引起半最大释放，这使得突变体过敏性降低，因此成为过敏原特定免疫治疗的候选者。不要忘记将洗涤液留在细胞上，直到应用抗原稀释，以避免细胞干燥，否则，这将导致检测性能差。

该检测可用于许多不同的应用，包括基于其生物活性的过敏产品的标准化，如皮肤刺测试解决方案或用于过敏原特异性免疫治疗的提取物。