基于化学发光的检测方法，用于检测自氧化和亚硝化化合物中的一氧化氮及其衍生物

该协议使研究人员能够熟练地使用化学发光检测器测量一氧化氮代谢物，而无需在现场雇用专职人员的指导或费用。基于化学发光的测定是检测任何给定生物样品中一氧化氮及其代谢物水平最小变化的最灵敏方法。吸入性一氧化氮是一种用于各种疾病的治疗气体。

至关重要的是，疾病的进展和恢复必须与一氧化氮代谢物水平准确相关。吸入性一氧化氮是一种抗菌剂，在治疗气道传染病患者方面显示出希望。化学发光方法可以深入了解一氧化氮剂量及其代谢物与微生物和病理生理学变化的相关性。

为了制备DETA-NONOATE溶液，在pH 7.4的PBS中加入10毫克DETA-NONOate到610微升的10毫摩尔氢氧化钠中，以产生100毫摩尔DETA-NONOate并将其保存在冰上。要继续，将氧气管连接到化学发光检测器，并根据文本中提供的制造商说明在压力下打开氧气罐。然后，将强场电介质滤波线连接到化学发光检测器。

在化学发光检测器接口上，开始运行液相检测的检测程序，确保氧气供应充足，检测器将开始采样，以毫伏为单位的信号指示检测，否则提示阴性诊断信号。要准备吹扫容器，请将针阀完全拧紧到右侧并关闭入口和出口止动旋塞，从而关闭所有三个端口上的吹扫容器。从吹扫容器中取出盖子。

将足够量的计划测定特异性试剂添加到反应室中，以便用于注射样品的注射器针头可以到达流体柱，同时验证是否存在稳定的，所需的基线。要启动吹扫气流，请确保惰性气罐装有两级调节器，并将惰性气罐与容器的进气口连接。然后，打开吹扫容器的出口，并在调节器处以每平方英寸一至五磅的出口压力打开气体。

然后，打开吹扫容器的入口，慢慢打开吹扫容器的针阀，以允许气体流入并验证吹扫容器内的鼓泡。为了调节气体流量，用强场介质过滤管路采样环境空气记录化学发光检测器测量的电池压力。将盖子重新定位在吹扫容器上，并将强场介质过滤器管路连接到吹扫容器。

使用针阀在化学发光检测器水平处达到与环境空气中记录的相同的细胞压力。要启动化学发光信号采集程序，请将化学发光检测器的串行端口连接到安装了采集程序的计算机串行端口。然后，运行分析程序。

单击“获取”，然后选择要保存数据文件的文件夹，键入文件名，然后单击“保存”。在准备样品进样时，通过单击最小和/或最大按钮，然后输入所需值，调整屏幕上的电压标度以控制目标基线。要进行样品进样，在取出每个样品之前，用去离子水和蒸馏水冲洗注射器至少两次或更多次，并确保在任务擦拭时无阻碍地喷射水。

然后，将注射器插入样品管中，同时将注射器和管保持近距离，并将柱塞拉至所需体积，同时确保没有气泡或未均质的固体部件被捕获。用任务刮水器清洁注射器的尖端，然后将注射器插入注射口的设置器盖中。在验证注射器的尖端在液相内后，将样品注入反应室。

要在软件程序中标记注射，请单击“样品名称”下的灰色框键入样品名称，然后单击“标记注射”，同时验证注射是否通过无细胞血红蛋白测定导致信号向上变化或一氧化氮消耗量下降。通过体外循环后通过化学发光法测定无细胞血红蛋白与一氧化氮消耗之间的剂量反应关系。可以假设在氧化状态清除一氧化氮中存在高浓度的血红素基团。

相反，在体外循环期间接受一氧化氮的患者中，大多数血红素组减少并且不消耗一氧化氮。无细胞血红蛋白浓度的测量表明，在体外循环后12小时内，血浆中缓慢消除。然而，一氧化氮消耗量在15分钟达到峰值，并没有反映无细胞血红蛋白的消除。

无细胞血红蛋白消耗一氧化氮的线性回归曲线显示，在 15 分钟时氧化和一氧化氮消耗血红蛋白的患病率，而在基线 4 小时和 12 小时时，体外循环后 12 小时血红蛋白的患病率更高。监测一氧化氮气体给药对一氧化氮消耗量的影响。当患者在术中和术后用一氧化氮气体治疗时，体外循环后观察到的游离血红蛋白的增加与一氧化氮消耗量的任何增加无关。

结果表明，外源性一氧化氮可减少大部分游离血红蛋白，防止一氧化氮清除。仅当所有条件保持不变时，实验才有效。如果液位的高度超过反应塔，我们必须停止并进行新的校准。