以前,检查化学物质对动脉收缩力影响的主要方法是在器官浴中进行体外金属丝肌造影。该技术的意义在于可以检查化学物质和基因操作对体内血管段的影响。该技术的主要优点是可以进行长期暴露和长期评估药物对动脉收缩力和血流的影响。
这在器官浴的孤立容器中是不可能的。要开始对胎儿进行外部麻醉,请确保母羊有足够的麻醉深度。使用 20 号手术刀刀片在从脐部到乳房颅骨部分的线性白膜上进行 10 厘米的标准剖腹切口。
然后在皮肤切口下方的体壁中线做一个小切口,然后用梅岑鲍姆剪刀打开腹腔。通过腹壁将包含胎儿的子宫外部化,同时在母体腹部和子宫之间放置无菌手术毛巾。然后触诊子宫以确定胎儿位置和尾部引线。
使用烧灼术,在子宫壁上做一个 10 厘米的切口,在头部背部有一个大的弯曲度,避免任何可见的血管和胎盘造口。接下来,用四个 Babcock 夹子固定子宫和胎盘膜,并在四个相对角处拉动 Babcock 夹子,使胎儿头部可见。通过这个切口将胎儿的颅半部外部化,并用无菌非乳胶手套覆盖头部,手套中装满温热的无菌盐水,温度为37摄氏度,以防止呼吸开始。
为了进行颈动脉血管周围导管的器械处理,胎儿颈部暴露在外,沿着颈部一侧的胸锁乳突肌或 SCM 肌的前缘在中间区域做一个 3 至 3.5 厘米的斜皮肤切口。然后用蚊子镊子分离筋膜。将颈阔肌分开,沿SCM肌的内侧缘从其肌腱上部解剖,并从肌腱下方解剖至舌骨肌的水平。
用 Babcock 夹子缩回皮肤。进行钝性解剖,将颈动脉从周围组织和颈动脉片中释放出来。接下来,从无菌包装中取出一个三毫米的流量探头,拧下背板,然后将其滑开以露出 L 型支架。
使用镊子,通过轻轻滑动背板到关闭位置来关闭流量探头支架。然后拧紧流量探头的背螺钉固定流量探头支架。使用 3.0 不可吸收的丝线缝合线在血流探头近端的颈动脉附近放置预冲洗的血管周围导管。
将血管周围系统的近端和远端长度以及血流探头固定到附近的间质组织。使用连续缝线,用 3.0 不可吸收缝合线闭合切口部位和胎儿皮肤。将缝合线缠绕在导管上三次,将导管固定在皮肤上。
取下手套后,将胎头放回子宫内。要进行胎儿肢体导尿术,请将胎儿的后腿外侧,握住腿,然后侧身以观察大腿内侧区域。用无菌纱布清洁该区域后,切开两厘米的切口并暴露股动脉。
放置并固定流动探头,如之前为颈动脉演示的那样,然后关闭切口。接下来,沿着胫骨内侧做一个 2 厘米的切口,在膝盖远端约 0.5 厘米处。暴露厚壁胫后动脉和薄壁隐静脉。
要插入聚乙烯导管,请使用标准切割技术,通过钝性解剖释放感兴趣的血管。然后用 3.0 丝缝合线结扎血管的远端部分,无需针头,使用方形结结和三次投掷。在血管的近端放置第二条无丝领带,但不要系结扎。
使用 Castroviejo 剪刀,在远端结扎线近端两毫米处的血管上做一个小的横切口。通过轻轻拉起近端松开的缝合线来限制血管血流。然后用无菌肝素盐水填充导管。
插入导管的斜面端,并将尖端推进 20 厘米进入胎儿血管。用镊子将导管固定到位,同时助手将近端无丝系线缝合线绑扎以将血管固定到导管上。使用距离插入部位两毫米的方结将血管完全结扎在插入的导管周围,并投掷三次。
然后将远端结扎带绑在近端绑扎带上,将血管固定在导管上。使用 3.0 不可吸收缝合线闭合皮肤切口,使用连续模式。确保缝合线绑在导管周围,以避免在拉扯时限制血流。
将预冲洗的导管放入子宫,并使用 3.0 不可吸收缝合线通过缝合线将其固定在胎儿上。将胎儿放回子宫。使用 3.0 不可吸收缝合线缝合胎儿膜,并采用连续锁定模式,然后使用 3.0 不可吸收缝合线闭合子宫肌肉层。
将一根 18 英寸的不锈钢手术棒沿腹壁皮下插入直至肋旁区域。将导管连接到手术棒的远端,让助手将导管和流探针电缆完全推过肋旁开口,从而将导管和探针电缆完全推入肋旁出口部位。接下来,将所有导管和流量探头电缆固定在肋旁切口部位。
放置防水胶带后,将导管缝合到母羊的皮肤上。将塑料网袋缝合到母羊的外部,穿过导管和探针以储存导管。使用 1.0 单丝合成可吸收缝合材料,以连续图案固定白线,并用手术钉固定皮肤层。
要测量血流,请将插入胎儿的血流探头与血管周围血流模块一起连接到 PowerLab 和连接的计算机。将动脉导管和羊膜导管连接到连接到模数转换器的桥放大器。静脉内给予胎儿 1 毫升推注 10 微摩尔去氧肾上腺素,并测量颈动脉和股骨血流 15 分钟。
然后等待 30 分钟,或直到血流恢复到基线。接下来,将一毫升 10 微摩尔去氧肾上腺素注入血管周围导管,测量血流量 15 分钟。通过血管周围导管施用 5 毫升温盐水来洗掉去氧肾上腺素。
然后等待 30 分钟,或直到血流恢复到基线。本研究检查了血流操纵对近足月和早产胎儿和绵羊的局部影响。在颈动脉血管周围间隙施用 1 毫升 10 微摩尔去氧肾上腺素(一种 α-1 AR 激动剂)后,观察到近足月胎羊和早产儿的颈动脉血流量显着减少,对全身血压没有任何影响。
相反,静脉注射去氧肾上腺素可使近足月胎羊和早产儿的全身血流量显着增加,而不会影响颈动脉血流量。结果显示,早产儿对去氧肾上腺素介导的颈动脉血流调节没有反应,但近足月胎儿的反应是成熟的。值得注意的是,静脉注射去氧肾上腺素仅增加早产儿的颈动脉血流量,对近足月胎儿没有显着影响。
然而,静脉注射去氧肾上腺素可提高早产儿和近足月胎儿的全身血压。结果还表明,去氧肾上腺素的血管周围安装不影响全身血压。在进行钝解剖以识别血管并切开它们以插入导管的斜端时,必须格外小心。
缺口应小,避免切割整个容器。这种方法可以测量任何血管的血管收缩力和血流量。此外,它还可用于在目标器官或组织附近递送化学物质和载体。
该技术可用于确定发育中的胎儿子宫内脑血流自动调节的变化,并靶向任何基因以上调或沉默转录。