Ранее основным методом изучения влияния химических веществ на сократительную способность артерий была проволочная миография ex vivo в ваннах органов. Значение этого метода заключается в том, что влияние химических веществ и манипуляций с генами на сегмент сосуда in vivo может быть изучено. Основным преимуществом данной методики является то, что можно проводить хроническое воздействие и длительную оценку влияния препаратов на сократимость артерий и кровоток.
Это невозможно в изолированных сосудах в органных ваннах. Чтобы начать экстериоризацию плода, обеспечьте достаточную глубину анестезии овцематки. Выполните 10-сантиметровый стандартный лапаротомический разрез лезвием скальпеля под номером 20 над линейной альбой от пупка до черепной части вымени.
Затем сделайте небольшой разрез по средней линии стенки тела под разрезом кожи, и вскрывайте брюшную полость ножницами Метценбаума. Экстериоризируйте матку, содержащую плод, через брюшную стенку, подложив под нее стерильные хирургические полотенца между брюшной полостью матери и маткой. Затем пропальпируют матку, чтобы определить положение плода и каудальные выводы.
С помощью прижигания сделайте 10-сантиметровый разрез через стенку матки с большим изгибом над тыльной стороной головы, избегая видимых кровеносных сосудов и плацентомов. Затем с помощью четырех зажимов Бэбкока закрепите оболочки матки и плаценты и потяните зажимы Бэбкока за четыре противоположных угла, чтобы сделать видимой головку плода. Экстериоризируйте черепную половину плода через этот разрез и накройте голову стерильной безлатексной перчаткой, наполненной теплым стерильным физиологическим раствором при температуре 37 градусов Цельсия, чтобы предотвратить начало дыхания.
Для проведения инструментария периваскулярного катетера сонной артерии с обнаженной шейкой плода делают косой разрез кожи длиной от трех до 3,5 сантиметров вдоль передней границы грудино-ключично-сосцевидной мышцы или мышцы SCM с одной стороны шеи в средней области. Затем отделите фасцию с помощью комарных щипцов. Разделите платизму и рассеките по медиальной границе СКМ мышцы от ее сухожилия сверху и до уровня подъязычной мышцы снизу.
Втяните кожу зажимами Бэбкока. Выполните тупое рассечение, чтобы освободить сонную артерию от окружающих тканей и каротидного листа. Затем возьмите трехмиллиметровый датчик потока из стерильной упаковки, отвинтите опорную пластину и сдвиньте ее, чтобы обнажить L-образный кронштейн.
С помощью щипцов закройте кронштейн датчика потока, осторожно сдвинув опорную пластину в закрытое положение. Затем закрепите кронштейн датчика расхода, затянув опорный винт датчика расхода. Поместите предварительно промытый периваскулярный катетер рядом с сонной артерией проксимальнее датчика потока с помощью нерассасывающегося шелкового шовного материала 3,0.
Закрепите проксимальную и дистальную длины периваскулярной системы и проточный зонд к ближайшей интерстициальной ткани. Непрерывным швом закройте место разреза и кожу плода нерассасывающимся швом 3,0. Закрепите катетеры на коже, трижды обернув шов вокруг катетера.
Сняв перчатку, поместите головку плода обратно в матку. Чтобы выполнить катетеризацию конечностей плода, экстериоризируйте заднюю ногу плода, возьмите ногу и поверните ее вбок, чтобы визуализировать внутреннюю часть бедра. Очистив участок стерильной марлей, выполните двухсантиметровый разрез и обнажите бедренную артерию.
Поместите и закрепите датчик потока, как показано ранее для сонной артерии, и закройте разрез. Далее сделайте двухсантиметровый разрез вдоль медиальной стороны большеберцовой кости, примерно на 0,5 сантиметра дистальнее колена. Обнажают толстостенную заднюю большеберцовую артерию и тонкостенную подкожную вену.
Для введения поливиниловых катетеров, используя стандартную технику разреза, освобождают интересующий сосуд тупым рассечением. Затем перевязать дистальную часть сосуда шелковым швом 3,0 и без иглы, используя квадратный узел с тремя бросками. Предварительно поместите вторую стяжку без шелка на проксимальную сторону сосуда, но оставьте лигатуру незавязанной.
С помощью ножниц Кастровьехо сделайте небольшой поперечный надрез в сосуде на два миллиметра проксимальнее дистальной лигатуры. Ограничьте кровоток сосудов, осторожно потянув за проксимальный развязанный шов. Затем наполните катетер стерильным гепаринизированным физиологическим раствором.
Введите скошенный конец катетера и продвинуте наконечник на 20 сантиметров в сосуд плода. Удерживайте катетер на месте щипцами, в то время как ассистент завязывает проксимальный шов без шелка, чтобы закрепить сосуд на катетере. Перевязать сосуд полностью вокруг введенного катетера квадратными узлами в двух миллиметрах от места введения тремя бросками.
Затем привяжите дистальную лигатуру проксимально к проксимальной связке, закрепив сосуд к катетеру. Закройте разрез кожи с помощью нерассасывающегося шва 3.0, используя непрерывный рисунок. Убедитесь, что швы завязаны вокруг катетеров, чтобы избежать ограничения кровотока при растяжении.
Поместите предварительно промытый катетер в матку и закрепите его на плоде с помощью нерассасывающегося шва 3,0. Поместите плод обратно в матку. Зашить плодные оболочки нерассасывающимися нитями 3,0 с непрерывной фиксацией, а затем закрыть мышечный слой матки нерассасывающимся шовным материалом 3,0.
Введите 18-дюймовый хирургический стержень из нержавеющей стали подкожно вдоль брюшной стенки до парареберной области. Прикрепите катетеры к дистальному концу хирургического стержня, попросив ассистента подать катетеры и пропустить кабель зонда через место парареберального выхода, полностью протолкнув стержень через парареберное отверстие. Затем закрепите все катетеры и кабели проточного зонда в месте парареберного разреза.
После наложения водонепроницаемой ленты пришить катетеры к коже овцы. Пришить пластиковый сетчатый мешочек к внешней стороне овцематки поверх катетеров и зонда для хранения катетеров. Используя монофиламентный синтетический рассасывающийся шовный материал 1.0, закрепите белую линию непрерывным рисунком и закрепите слой кожи хирургическими скобами.
Чтобы измерить кровоток, подключите датчики потока, введенные в плод с модулем периваскулярного потока, к PowerLab и подключенному компьютеру. Прикрепите артериальный и амниотический катетеры к мостовому усилителю, подключенному к аналого-цифровому преобразователю. Внутривенно ввести плоду болюс объемом 10 микромоляров фенилэфрина объемом один миллилитр и измерять сонный и бедренный кровоток в течение 15 минут.
Затем подождите 30 минут или пока кровоток не вернется к исходному уровню. Далее в периваскулярный катетер вводят один миллилитр 10 микромолярного фенилэфрина и измеряют кровоток в течение 15 минут. Смойте фенилэфрин, введя пять миллилитров теплого физиологического раствора через периваскулярный катетер.
Затем подождите 30 минут или пока кровоток не вернется к исходному уровню. В этом исследовании изучались локализованные эффекты манипуляций с кровотоком у недоношенных и недоношенных плодов и овец. При введении одного миллилитра 10 микромолярного фенилэфрина, агониста альфа-1 АР, в периваскулярное пространство сонной артерии наблюдалось значительное снижение сонного кровотока как у овец с недоношенным плодом, так и у недоношенного плода без какого-либо влияния на системное артериальное давление.
И наоборот, внутривенное введение фенилэфрина вызывало значительное увеличение системного кровотока как у недоношенных овец, так и у недоношенных плодов, не влияя на сонный кровоток. Результаты показали, что недоношенные плоды не реагируют на фенилэфрин-опосредованную регуляцию сонного кровотока, однако у недоношенных плодов реакция является зрелой. Примечательно, что внутривенное введение фенилэфрина усиливало сонный кровоток только у недоношенных плодов, без существенного эффекта у недоношенных плодов.
Однако внутривенное введение фенилэфрина повышало системное артериальное давление как у недоношенных, так и у недоношенных плодов. Результаты также показывают, что периваскулярная установка фенилэфрина не влияла на системное артериальное давление. При выполнении тупого рассечения необходимо соблюдать предельную осторожность для выявления сосудов и надрезания их для введения скошенного конца катетера.
Зазубрин должен быть небольшим, чтобы не порезать весь сосуд. Этот метод позволяет измерить сократительную способность сосудов и кровоток любого сосуда. Кроме того, он может быть использован для доставки химических веществ и векторов в непосредственной близости от органа или ткани, на которые следует нацелиться.
Этот метод может быть использован для определения изменений в ауторегуляции мозгового кровотока в утробе матери у развивающегося плода и нацеливаться на любой ген для усиления или глушения транскрипции.
