鸡绒毛膜尿囊膜 （CAM） 模型作为研究卵巢组织移植的工具

与体外模型相比，使用 CAM 观察卵巢组织移植后的早期变化具有显着优势，因为它可以研究影响早期血管形成和卵泡丢失过程的机制。这种技术价格低廉，并且可以在前 17 天内由于天然胚胎免疫缺陷而没有任何移植物排斥的风险。此外，这种方法在欧洲法律方面不会引起任何道德或法律问题。

在实际实验之前，可以通过对未胚胎的卵子进行训练来获得开发卵子操作所需的手动技能的最佳策略。首先，使用记号笔标记从 Louvain 选定的白色长角雏鸡那里收到的零蛋日。在设置为37摄氏度的孵化器中孵化鸡蛋，尖头朝下。

将鸡蛋旋转 180 度，每天手动旋转两到三次。在黑暗中，将鸡蛋烛台靠在蛋壳上，并使用记号笔精确定位蛋壳上的气穴中心。打开灯并在标记位置旋转无菌直销，以打开约一毫米的口径。

使用鸡蛋烛台在黑暗中找到蛋黄袋。用无菌的 19 号针刺穿鸡蛋，向鸡蛋底部倾斜 45 度，而不会破坏蛋黄袋。吸出 1.5 至 2 毫升白蛋白，将 CAM 从外壳上分离。

然后用胶带封闭孔。打开灯，在水平放置的鸡蛋上画一个 1 x 1.5 厘米的矩形窗口。用一只手握住鸡蛋，用涡旋锯片轻轻地在蛋壳上切开一个窗口，不要让蛋壳破裂。

定期吹气以清除外壳灰尘和碎屑。将无菌镊子滑到矩形外壳下方，并在不损坏 CAM 的情况下将其干净地取出。然后丢弃白色外壳膜，看到胚胎和CAM。

在活的胚胎卵中，在雏鸡胚胎发育的第三天可以看到透明的白蛋白、胚胎周围的血管环，有时还有跳动的心脏。在层流罩下，将鸡蛋放在鸡蛋架上，窗户朝上，然后撕下胶带。轻轻放置并立即将一条一厘米见方的无菌乙醚提取晶状体纸条放在上皮表面上，以创伤 CAM 的一小块区域。

然后用显微外科镊子抓住一个冷冻解冻的卵巢皮质条，并将其放在受创伤的 CAM 上，髓侧靠在 CAM 上。在拍摄数码照片或视频之前，从宏观上评估移植物，并特别注意CAM对移植物的血管反应。完成后，用镊子抓住组织或周围的 CAM 来收获移植物，然后用剪刀小心地将移植物从 CAM 上切除。

在移植的第一天后，移植物在100%的病例中是可行的。他们已经部分粘附在CAM上，并显示出血管形成所需的血管的轮辐模式。移植六天后，植入物粘附在CAM上。

在移植后的第三天左右，移植物被第二层CAM覆盖并被封装。移植物显示出良好的血管形成，80%的移植物穿透了卵子。两个移植物没有附着在CAM上，呈现坏死外观，导致6天后移植物组织存活率为83%。

在移植的组织学评估中，在所有时间点都观察到健康的卵泡。移植后，观察到卵泡密度的显着降低。在移植期间，卵泡存活率在第一天保持在95%，在第六天保持在83%。

最具挑战性的部分是在创建应用窗口之前，制作吸出白蛋白所需的小孔，将 CAM 从蛋壳上分离出来。压力过大会导致过度刺激，甚至可能破裂并破坏卵子，对 CAM 或其脉管系统造成不可挽回的损害。该模型非常适合测试移植后早期卵巢组织的几个方面，包括促血管生成因子、保护性抗氧化剂、细胞因子、激素和其他控制卵泡活化和早期生长的因素的影响。

该模型表明早期血管形成和卵泡活化调节之间存在联系，这是导致卵巢组织移植后卵巢储备下降的两个主要事件。