用于临床前药物测试的卵巢癌患者来源的类器官模型

该协议描述了一种使用患者来源的卵巢癌类器官进行药物活力测定的低成本方法。该技术的主要优点是使用低成本和现成的材料和实验室设备。这种方法可以在进行昂贵的高通量药物筛选之前使用。

尽管该方法涉及在患者来源的卵巢癌类器官中进行药物活力测定，但它可以应用于任何类器官系统，包括那些源自小鼠的类器官系统。首先，在明场显微镜下观察含有类器官的基底膜提取物或 BME，以确保 70% 至 90% 的汇合度。使用移液管，将一到两毫升预热的基础培养基加入含有类器官的孔中，并通过上下移液来机械解离类器官。

将整个类器官悬浮液转移到 15 毫升锥形管中，并在管中涡旋 5 至 10 秒以进一步分解细胞。然后，在室温下以1,107G离心细胞五分钟。使用单通道移液管，吸出并弃去上清液。

将沉淀重悬于预热至37°C的一毫升类器官解离试剂中，并将悬浮液转移到1.5毫升微量离心管中。将样品在 37 摄氏度下孵育 7 分钟。然后在室温下将结果在1,107G的细胞悬浮液中离心五分钟。

弃去上清液后，将细胞沉淀重悬于一毫升预热的基础培养基中。在基础培养基和BME的混合物中复溶细胞，保持每10微升20， 000个细胞的终浓度。在黑色不透明的96孔板的每个孔中，铺板一个三微升重悬细胞液滴。

将板在 37 摄氏度的细胞培养箱中孵育 15 分钟。最后，在将板在 37 摄氏度下孵育 24 至 72 小时之前，向每个孔中加入 100 微升预热的高级类器官培养基。在接种后两天对类器官进行药物治疗。

药物治疗后 7 天对类器官进行活力测定。向每个孔中加入 100 微升活力测定试剂，使总体积达到 200 微升，并以 80 RPM 摇动板五分钟。然后让板在室温下再孵育 25 分钟。

同时，打开生物发光酶标仪并打开眼控软件。导航连接仪器“，选择Infinite 200Pro”选择发光“和默认脚本”接下来，从下拉菜单中选择BD 96 FB Falcon BD Falcon 96 Flat Black“作为板类型来设置发光参数。将衰减指定为无。

积分时间为 1000 毫秒，建立时间为 0 毫秒。最后，揭开板，将其装入读板器，然后按开始“开始”。为方案中使用的两种不同的患者来源类器官（PDO）获取明场图像。

PDO 1 来源于肿瘤活检，PDO 2 来源于腹水。活力测定的结果显示，在用不同浓度的卡铂处理后，PDO 1 和 PDO 2 中的活细胞百分比。将计算出的生长速率或GR值与相应的卡铂浓度作图，GR指标显示PDO 1的GR50值远高于PDO 2的GR50值。

这表明PDO一对铂化疗的抵抗力更强 在铺板时，将细胞悬液的三微升液滴直接放置在孔的中心至关重要。如果将液滴放置在靠近孔的边缘，可能会导致液滴塌陷，从而影响测定结果。