我们感谢Choi和Jung实验室的所有成员进行的方法论讨论。我们感谢 C. Jang 和 D. Guertin 提供的建议和反馈。我们感谢 M.S. Choi 对手稿的批判性阅读。这项工作由 NRF-2022R1C1C1012034 资助给 S.M.J.;NRF-2022R1C1C1007023 至 D.W.C;NRF-2022R1A4A3024551 至 S.M.J. 和 D.W.C.这项工作得到了忠南国立大学对WTK的支持，图1和图2是使用BioRender（http://biorender.com/）创建的。

所有实验均在成均馆大学机构动物护理和使用委员会（IACUC）的批准下进行。将小鼠饲养在IACUC批准的动物设施中，该设施位于22°C和45%湿度的洁净室中，每天进行12小时的光/暗循环。他们被放在通风的架子上，可以随意获得标准的食物饮食（包括 60% 的碳水化合物、16% 的蛋白质和 3% 的脂肪）。垫料和筑巢材料每周更换一次。在这项研究中，使用了12周龄且体重在25g至30g之间的雄性C57BL / 6J小鼠。这些动物来自商业供应商（见 材料表）。
1.通过温度驯化和药理刺激调节棕色脂肪组织的代谢活性
注意：数天至数周的温度适应或使用β-肾上腺素能受体激动剂的药理学刺激是调节 BAT 活性1 的常用方法。因此，下面提供了该方法的简明概述，以便读者能够根据需要选择适当的方法。为了获得代谢不活跃（产热性较低）的BAT，为C57BL / 6J小鼠选择称为热中性的基线温暖温度（28-30°C）。这个范围确保小鼠不需要消耗额外的能量来维持恒定的体温。为了获得代谢适度或高活性（产热）BAT，可以分别选择温和的寒冷（20-22°C）或严寒（6°C）温度。出于该实验的目的，在22°C的标准饲养条件下饲养小鼠，尽管对小鼠来说温和寒冷，但不涉及任何药理学刺激。
<ol><li>温度适应<ol><li>在开始温度适应之前至少1周，将小鼠分开，每个笼子容纳1或2只小鼠。准备配备空气通风、温度和湿度控制的啮齿动物培养箱，并满足所需条件。</li>
		<li>在适当的日子将笼子移至各自的啮齿动物培养箱中，以适应所选的温度。</li>
		<li>确保小鼠数量在所有组中的分布均匀，每个笼子有 1 或 2 只小鼠。单体壳是首选，因为与组壳体相比，单体壳体对温度引起的生理变化更敏感43.以下是每个群体的具体住房条件：<ol><li>热中性（30°C）组：将该组中的小鼠在30°C的温度下连续保存长达四个星期。</li>
			<li>严寒组：最初，将该组中的小鼠饲养在18°C，没有任何筑巢材料。它们将经历每周逐渐下降的温度，到第四周达到 6 °C。温度变化如下：18°C→14°C→10°C→6°C。</li>
			<li>轻度寒冷组（20-22°C）：在与前面提到的标准饲养条件相同的条件下，将该组中的小鼠饲养在啮齿动物培养箱中。</li>
			<li>急性冷挑战：对于急性冷挑战，在没有任何筑巢材料的情况下，每个笼子放置1-2只小鼠，并将它们暴露在6°C的啮齿动物培养箱中长达8小时。 注意：这些住房条件和温度变化对于研究不同温度环境对 BAT 活性和新陈代谢的影响至关重要。</li>
		</ol></li>
		<li>每周更换笼子并补充食物和水。在补充前至少24小时，在各自的温度（啮齿动物培养箱）下预适应笼子。 注意：为了防止适当温度刺激的干扰，重要的是不要提供可能导致筑巢的小鼠富集。为了应对严寒，小鼠会消耗更多的能量来维持体温，从而增加食物摄入量和排泄率。因此，每周至少检查笼子两到三次（遵循当地机构指南）至关重要，以确保小鼠有足够的食物和水供应，并且笼子不会过度潮湿。这种监测对于在研究期间维持小鼠的福祉和健康至关重要。</li>
	</ol></li>
	<li>使用 β3-肾上腺素能受体激动剂 CL316,243 进行药理学刺激1<ol><li>为了最大限度地提高刺激效果，在注射前将小鼠预置于热中性（30°C）下2-4周。</li>
		<li>驯化期后，腹膜内注射1mg/kg CL316,243。 注意：对于β3-肾上腺素能受体激动剂的慢性刺激（例如 从3天到第1,44,45周），由于药物稳定性，需要每天注射。稀释的CL316,243应在注射当天制备，因为稳定性。</li>
	</ol></li>
</ol>2. 动静脉采血
注意：最好建议12-14周以上的小鼠进行动静脉采血。年轻的小鼠可能没有足够大小的苏尔寿静脉，这是一种独特的血管，专门从肩胛间 BAT46 排出静脉血。
<ol><li>使用校准的汽化器轻轻麻醉，其中 3% 异氟醚用于诱导（在 205 x 265 x 200 毫米大小的腔室中）和 2% 异氟醚用于维护（使用气体麻醉面罩）。 注意：整个动静脉采样程序应在麻醉后立即进行。麻醉期间可以使用水加热的加热垫来维持核心体温。 注意：异氟醚吸入时具有高度挥发性和毒性。因此，一期麻醉必须在通风橱下进行。</li>
	<li>验证动物的反应，例如爪子缩回，以确认麻醉已达到适当的深度。</li>
	<li>从苏尔寿静脉采集静脉血<ol><li>放置鼠标以暴露背部皮肤，在切口前通过脚趾捏合确认麻醉深度。用充足的 70% 乙醇润湿背部皮肤以防止毛发脱落，并沿着胸部下部一直切开一个切口，一直到颈部。 注意：肩胛间 BAT 位于皮肤正下方，由两个脂肪垫组成，上面覆盖着薄薄的白色脂肪组织。重要的是要确保小鼠通过气体麻醉面罩保持麻醉状态。</li>
		<li>用弯曲的尖端镊子轻轻提起肩胛间 BAT，小心地切割附着的组织，其中大部分是肌肉。将脂肪垫抬向头部，继续切割附着的组织并小心地打开该区域，直到苏尔寿静脉（连接到肩胛间 BAT 的两个脂肪垫的“Y”形深红色大血管）暴露出来。 注意：注意不要切割与肩胛间 BAT 前部和侧面区域相连的肌肉组织的毛细血管，因为这样做会显着降低从苏尔寿静脉排出的血液量和质量。</li>
		<li>小心地切开苏尔寿的静脉，并使用底部切口的 200 μL 移液器吸头和 P100 移液器收集约 40 μL 血液。将血液储存在采血管中，并将管子放在冰上，直到血清采集过程。 注意：重要的是从苏尔寿静脉的 Y 形分割点正下方收集血液，以防止血液污染来自上腔静脉47。收集过多的血液会削弱苏尔寿静脉的特征。因此，请务必从苏尔寿静脉中收集所需的最低量血液进行分析。选择采血管时要深思熟虑，因为血清和血浆会产生不同的代谢物谱 48,49,50。对于血浆采集，有必要使用肝素包被的管。在该实验中，选择凝血活化剂包被的管子来获得血清。在任何情况下都不应使用EDTA涂层管，因为EDTA会显著影响质谱信号51,52。</li>
	</ol></li>
	<li>从左心室采集动脉血<ol><li>翻转鼠标而不失去与鼻锥的接触，露出腹侧皮肤。在切口之前通过脚趾捏确认麻醉深度。用足量的70%乙醇润湿腹侧皮肤，以防止毛发脱落，并用剪刀小心地打开胸腔，在不破坏任何内部结构的情况下露出心脏。</li>
		<li>使用 1 mL 注射器和 29 G（1/2“）针头准确刺穿左心室的顶点区域。将三分之二的1/2英寸针插入心尖右侧水平3-5mm处（图1B），然后将注射器向后拉以从左心室收集血液（50-100μL）。左心室的血液是含氧动脉血，呈鲜红色。将血液储存在采血管中，并将管子放在冰上，直到血清采集过程。 注意：应在胸腔内做一个最小的切口，以便进入心脏。切口过多可能导致局部出血，进而导致低血压。这可能会影响从左心室收集的动脉血的质量。避免旋转或翻转心脏，因为这会使确定左心室的精确位置变得困难。</li>
		<li>执行安乐死，并按照当地机构的指导方针使用适当的方法确保安乐死。例如，安乐死可以通过颈椎脱位进行，并通过心跳停止来确认。</li>
	</ol></li>
	<li>在4°C下以10,000× g 离心血液样品10分钟。 使用移液管小心收集上清液。上清液应含有血清或血浆，具体取决于所用采血管的类型。可以在这里停下来，将样品储存在-20°C下，直到血清处理以进行GC-MS分析。 注意：如果观察到红色上清液，则可能发生溶血。为避免溶血，请在凝血完成前涡旋样品。一些富含红细胞的代谢物（包括谷氨酰胺和乳酸）可能导致数据误解，尽管大多数代谢物可能不会受到溶血的显着影响。建议在一周内分析血清/血浆。</li>
</ol>3. 从血清中提取代谢物和化学衍生化
<ol><li>提取准备 注：包括代谢物提取、衍生化和数据分析在内的所有方法都是先前描述的方法53,54 的略微修改版本。<ol><li>通过向MS级甲醇中加入100μM的DL-正缬氨酸内标溶液（参见 材料表）来制备提取缓冲液。</li>
		<li>确保所有实验程序都在冰上进行。</li>
	</ol></li>
	<li>将从苏尔寿静脉或左心室提取的 10 μL 小鼠血清转移到含有 40 μL 提取缓冲液的 1.5 mL 微量离心管中。</li>
	<li>为了除去细胞碎片和蛋白质，短暂涡旋血清样品，然后在4°C下以最大速度（18,000× g）离心30分钟。</li>
	<li>离心后，小心地将40μL上清液转移到玻璃小瓶中，然后在4°C的真空离心机中干燥3小时。 注意：建议使用玻璃插件（参见 材料表）代替塑料管，因为在随后的衍生化步骤中使用了塑料反应性化学品。</li>
	<li>将干燥的样品进行两个连续的衍生化步骤，以对血清代谢物进行GC-MS分析。 注意： 由于溶剂的刺激风险，应在通风橱下执行以下步骤。<ol><li>将干燥的血清提取物重悬于溶解在吡啶中的30μL10mg / mL甲氧胺盐酸盐（参见 材料表）中，并在37°C下孵育30分钟。</li>
		<li>用70μLN-甲基-N-叔丁基二甲基硅基四氟乙酰胺（MTBSTFA，参见 材料表）在70°C下衍生用于代谢物硅烷化1小时的样品。 注意：由于衍生化溶剂与塑料发生反应，因此建议在以下步骤中使用玻璃注射器而不是塑料尖端。</li>
	</ol></li>
</ol>4. 使用GC-MS进行代谢组学分析
注：采用单联 GC-MS（见 材料表）测量苏尔寿静脉和左心室衍生样品中的各种血清代谢物，包括碳水化合物、氨基酸和 TCA 循环中间体。也可以使用其他色谱柱，尽管包括温度程序在内的实验设置可能会因所用色谱柱的类型而异。
<ol><li>在280°C（入口温度）下，使用氦气作为流速为1.500mL / min（设定点）的载气，以不分流模式将1μL衍生化样品注入GC中。</li>
	<li>将四极杆设置为200°C，GC-MS接口设置为300°C。 注意：所有代谢物分析的烘箱程序从60°C开始，保持1分钟，然后以10°C / min的速率增加，直到温度达到320°C。</li>
	<li>通过设置为 70 eV 的电子电离 （EI） 收集数据，并在扫描模式 （50-550 m/z） 53 下获取样品数据。本研究中使用的所有代谢物均已通过标准品验证，以确认质谱和保留时间。</li>
	<li>使用市售分析软件进行峰面积积分（参见 材料表）。</li>
	<li>将化合物与每个TBMDS衍生物的子离子相匹配。然后，通过将碎片离子的 m/z 值积分到相应峰面积，得到提取离子色谱图（EIC），然后导出。碎片离子如 表1所示。 注：每个样品中每种化合物的EIC均由DL-正缬氨酸归一化。数据由对数2 苏尔寿左心室静脉 （Log2（SV/LV）） 表示，使用每个归一化 EIC 值。</li>
</ol>

探索棕色脂肪组织中的代谢物交换

作者声明他们没有利益冲突需要报告。

了解 BAT 在全身能量平衡中的代谢潜力的一个关键步骤是确定它消耗了哪些营养物质，它们是如何代谢处理的，以及哪些代谢物被释放到循环中。该协议引入了一种专门的动静脉取样技术，该技术能够进入 C57BL/6J 小鼠肩胛间 BAT 和全身动脉脉管系统的静脉脉管系统，该技术最近由 Park 等人42 开发和验证。以下是您在遵循协议时应认真考虑的关键点。
对于生热...

棕色脂肪组织 （BAT） 具有一种独特的能量消耗特性，称为非颤抖产热 （NST），它涉及线粒体解偶联蛋白 1 （UCP1） 依赖性和 UCP1 非依赖性机制1、2、3、4、5。这些显着特征使 BAT 参与全身代谢的调节和代谢疾病的发病机制，包括肥胖、2 型糖尿病、心血管疾病和癌症恶病质 6,7,8。最近的回顾性研究表明，BAT 质量和/或其代谢活性与人类肥胖、高血糖和心脏代谢健康呈负相关 9,10,11。
最近，BAT被提议作为负责维持NST的代谢汇，因为它需要大量的循环营养物质作为产热燃料6,7。此外，BAT可以产生和释放生物活性因子，称为棕色脂肪因子或BATokines，其充当内分泌和/或旁分泌信号，表明其积极参与系统水平的代谢稳态12,13,14,15。因此，了解BAT的营养代谢应该增强我们对它在人类中的病理生理学意义的理解，超越其作为体温调节器官的传统作用。
使用稳定同位素示踪剂的代谢组学研究，结合使用非代谢放射性示踪剂的经典营养素摄取研究，显著提高了我们对哪些营养素优先被 BAT 吸收以及如何利用的理解 16,17,18,19,20,21,22,23,24,25，26,27.例如，放射性示踪剂研究表明，冷活化的 BAT 会吸收葡萄糖、脂蛋白结合的脂肪酸和支链氨基酸16、17、18、19、20、21、22、23、27.最近的同位素示踪与代谢组学研究相结合，使我们能够测量这些营养物质在组织和培养细胞内的代谢命运和通量24,25,26,28,29,30。然而，这些分析主要集中在营养物质的个体利用上，使我们对BAT在器官代谢物交换中的系统级作用的了解有限。关于英美烟草消耗的特定循环营养物质系列及其在碳和氮方面的定量贡献的问题仍然难以捉摸。此外，对 BAT 是否可以使用营养物质产生和释放代谢物衍生的 BATokines（例如脂因子）的探索才刚刚开始 12,13,14,15,31,32。
动静脉血液分析是一种经典的生理学方法，用于评估器官/组织中循环分子的特异性摄取或释放。该技术以前已应用于大鼠的肩胛间 BAT 以测量氧气和几种代谢物，从而将 BAT 确立为适应性产热的主要位点，具有分解代谢潜力33、34、35、36、37。最近，一项使用大鼠肩胛间 BAT 的动静脉研究与跨组学方法相结合，从而鉴定了由生热刺激的 BAT38 释放的未发现的 BATokines。
基于高灵敏度气相色谱和液相色谱质谱（GC-MS 和 LC-MS）的代谢组学的最新进展重新点燃了人们对动静脉研究的兴趣，该研究用于器官特异性代谢物交换的定量分析 39,40,41。这些技术具有高分辨能力和质量精度，能够使用少量样品对各种代谢物进行全面分析。
与这些进展相一致，最近的一项研究成功地将动静脉代谢组学应用于小鼠水平的 BAT 研究，从而能够定量分析不同条件下 BAT 中的代谢物交换活动42。本文介绍了在 C57BL/6J 小鼠模型中使用 GC-MS 的 BAT 靶向动静脉代谢组学方案。

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>0.5-20 &#181;L Filter Tips</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>AX.TF-20-R-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>1 mL Syringe with attached needle - 26 G 5/8&#34;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>309597</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 5977B GC/MSD (mass selective detector)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G7077B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 7693A Autosampler</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G4513A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent 8890 GC System</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G3542A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent J&#38;W GC column (Capilary column) HP-5MS UI</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>19091S-433UI</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Agilent MassHunter Workstation software_MS Quantitative analysis(Quant-My-way)</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>G3335-90240</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>C57BL/6J mouse</td>
			<td>DBL</td>
			<td>C57BL/6JBomTac</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CentriVap -50 &#176;C Cold Trap (with Stainless steel Lid)</td>
			<td>LABCONCO&#160;</td>
			<td>7811041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DL-Norvaline</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>N7502-25G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf centrifuge 5430R</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>5428000210</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Eppendorf Safe-Lock Tubes 1.5 mL</td>
			<td>Eppendorf</td>
			<td>30120086</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Glass insert 250 &#956;L&#160;</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5181-1270</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methanol (LC-MS grade)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>Q34966-1L</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Methoxyamine hydrochloride</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>226904-5G</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microvette&#160;200 Serum, 200 &#181;L, cap red, flat base</td>
			<td>Sarstedt</td>
			<td>20.1290.100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>MTBSTFA</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>394882-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pyridine(anhydrous, 99.8%)</td>
			<td>Sigma-Aldrich</td>
			<td>270970-100ML</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Refrigerated CentriVap Complete Vaccum Concentrators</td>
			<td>LABCONCO&#160;</td>
			<td>7310041</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent diet</td>
			<td>SAFE</td>
			<td>SAFE R+40-10</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Rodent incubator</td>
			<td>Power scientific</td>
			<td>RIT33SD</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ultra-Fine Pen Needles - 29 G 1/2&#34;</td>
			<td>BD Biosciences</td>
			<td>328203</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial Cap 9 mm</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5190-9067</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, ambr scrw wrtn 2 mL</td>
			<td>Agilent</td>
			<td>5190-9063</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vial, ambr scrw wrtn 2 mL+A2:C40</td>
			<td>Axygen</td>
			<td>PCR-02-C</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

arteriovenous metabolomics to measure in vivo metabolite exchange in brown adipose tissue

棕色脂肪组织 （BAT） 通过一种称为非颤抖产热的独特能量消耗过程在调节代谢稳态中起着至关重要的作用。为了实现这一目标，英美烟草利用多样化的循环营养素菜单来支持其高代谢需求。此外，BAT 分泌代谢物衍生的生物活性因子，可作为代谢燃料或信号分子，促进 BAT 介导的组织内和/或组织间通讯。这表明BAT积极参与全身代谢物交换，这是一个有趣的特征，正在开始探索。在这里，我们介绍了一种 体内小鼠水平 优化的BAT动静脉代谢组学的方案。该方案侧重于产热刺激的相关方法和使用苏尔寿静脉的动静脉采血技术，该技术选择性地引流肩胛间 BAT 来源的静脉血和全身动脉血。接下来，演示了使用这些血液样本的基于气相色谱的代谢组学方案。该技术的使用应通过测量 BAT 对代谢物的净摄取和释放，在器官间水平上扩展对 BAT 调节的代谢物交换的理解。

Brown adipose tissue (BAT) possesses a unique energy expenditure property known as non-shivering thermogenesis (NST), which involves both mitochondrial uncoupling protein 1 (UCP1)-dependent and UCP1-independent mechanisms1,2,3,4,5. These distinctive characteristics implicate BAT in the regulation of systemic metabolism and the pathogenesis of metabolic diseases, including obesity, type 2 diabetes, cardiovascular disease, and cancer cachexia6,7,8. Recent retrospective studies have shown an inverse association between BAT mass and/or its metabolic activity with obesity, hyperglycemia, and cardiometabolic health in humans9,10,11.
Recently, BAT has been proposed as a metabolic sink responsible for maintaining NST, as it requires substantial amounts of circulating nutrients as thermogenic fuel6,7. Furthermore, BAT can generate and release bioactive factors, referred to as brown adipokines or BATokines, which act as endocrine and/or paracrine signals, indicating its active involvement in systems-level metabolic homeostasis12,13,14,15. Therefore, understanding BAT&#39;s nutrient metabolism should enhance our understanding of its pathophysiological significance in humans, beyond its conventional role as a thermoregulatory organ.
Metabolomic studies employing stable isotope tracers, in combination with classic nutrient uptake studies using non-metabolizable radiotracers, have significantly improved our understanding of which nutrients are preferentially taken up by BAT and how they are utilized16,17,18,19,20,21,22,23,24,25,26,27. For instance, radioactive tracer studies have demonstrated that cold-activated BAT takes up glucose, lipoprotein-bound fatty acids, and branched-chain amino acids16,17,18,19,20,21,22,23,27. Recent isotope tracing combined with metabolomic studies has allowed us to measure the metabolic fate and flux of these nutrients within tissues and cultured cells24,25,26,28,29,30. However, these analyses primarily focus on the individual utilization of nutrients, leaving us with limited knowledge of BAT&#39;s systems-level roles in organ metabolite exchange. Questions regarding the specific series of circulating nutrients consumed by BAT and their quantitative contributions in terms of carbon and nitrogen remain elusive. Additionally, the exploration of whether BAT can generate and release metabolite-derived BATokines (e.g., lipokines) using nutrients is just beginning12,13,14,15,31,32.
Arteriovenous blood analysis is a classic physiological approach used to assess the specific uptake or release of circulating molecules in organs/tissues. This technique has previously been applied to the interscapular BAT of rats to measure oxygen and several metabolites, thereby establishing BAT as the major site of adaptive thermogenesis with its catabolic potential33,34,35,36,37. Recently, an arteriovenous study using rat interscapular BAT was coupled with a trans-omics approach, leading to the identification of undiscovered BATokines released by thermogenically stimulated BAT38.
Recent advances in high-sensitivity gas chromatography- and liquid chromatography-mass spectrometry (GC-MS and LC-MS)-based metabolomics have reignited interest in arteriovenous studies for the quantitative analysis of organ-specific metabolite exchange39,40,41. These techniques, with their high resolving power and mass accuracy, enable the comprehensive analysis of a wide range of metabolites using small sample quantities.
In alignment with these advancements, a recent study successfully adapted arteriovenous metabolomics for studying BAT at the mouse level, enabling the quantitative analysis of metabolite exchange activities in BAT under different conditions42. This article presents a BAT-targeted arteriovenous metabolomics protocol using GC-MS in a C57BL/6J mouse model.

作者聚焦：阐明脂肪组织代谢和疾病预防的新途径 

动静脉代谢组学测量棕色脂肪组织 中的体内 代谢物交换

Our lab is interested in identifying mechanisms by which signaling pathways and metabolic pathways collaborate to regulate adipose tissue metabolism and physiology. And through that approach, we aim to find a way to prevent or target metabolic diseases caused by energy imbalances such as obesity and diabetes. The major advantage of our protocol is we have shifted from the conventional rat model to using a mouse model for arterial venous blood sampling and metabolomic analysis.We believe that this transition will allow us to validate our findings using the gold standard genetic models more rapidly for brown fat research.

图 1 显示了 BAT 优化房室代谢组学的实验方案。如协议部分所述，为了获得差异刺激的棕色脂肪组织，小鼠使用啮齿动物培养箱进行温度驯化或接受药理学给药，例如β-肾上腺素能受体激动剂。随后，麻醉小鼠，并收集血液样本进行代谢组学分析（图1A）。对于血液采样， 通过 苏尔寿静脉收集从肩胛间 BAT 特异性引流的静脉血，而直接从心脏左?...

Watch this Scientific Journal Video about Illuminating New Avenues for Adipose Tissue Metabolism and Disease Prevention at JoVE.com

在该方案中，概述了与在小鼠模型中使用GC-MS进行BAT优化的动静脉代谢组学相关的方法。这些方法允许在生物体水平上获得对BAT介导的代谢物交换的宝贵见解。

Brown adipose tissue (BAT) plays a crucial role in regulating metabolic homeostasis through a unique energy expenditure process known as non-shivering ...

我们的实验室有兴趣确定信号通路和代谢通路协同调节脂肪组织代谢和生理学的机制。通过这种方法，我们的目标是找到一种方法来预防或针对由能量失衡引起的代谢疾病，如肥胖和糖尿病。我们方案的主要优点是我们已经从传统的大鼠模型转向使用小鼠模型进行动脉静脉血液采样和代谢组学分析。我们相信，这种转变将使我们能够更快地使用金标准遗传模型来验证我们的发现，以进行棕色脂肪研究。

arteriovenous-metabolomics-to-measure-vivo-metabolite-exchange-brown

Research

JoVE Journal

Biochemistry

Arteriovenous Metabolomics to Measure In Vivo Metabolite Exchange in Brown Adipose Tissue

1.0K 次观看.  Sungkyunkwan University (SKKU). 我们的实验室有兴趣确定信号通路和代谢通路协同调节脂肪组织代谢和生理学的机制。通过这种方法，我们的目标是找到一种方法来预防或针对由能量失衡引起的代谢疾病，如肥胖和糖尿病。我们方案的主要优点是我们已经从传统的大鼠模型转向使用小鼠模型进行动脉静脉血液采样和代谢组学分析。我们相信，这种转变将使我们能够更快地使用金标准遗传模型来验证我?...

视频: 作者聚焦：阐明脂肪组织代谢和疾病预防的新途径 

Brown adipose tissue (BAT) plays a crucial role in regulating metabolic homeostasis through a unique energy expenditure process known as non-shivering thermogenesis. To achieve this, BAT utilizes a diverse menu of circulating nutrients to support its high metabolic demand. Additionally, BAT secretes metabolite-derived bioactive factors that can serve as either metabolic fuels or signaling molecules, facilitating BAT-mediated intratissue and/or intertissue communication. This suggests that BAT actively participates in systemic metabolite exchange, an interesting feature that is beginning to be explored. Here, we introduce a protocol for in vivo mouse-level optimized BAT arteriovenous metabolomics. The protocol focuses on relevant methods for thermogenic stimulations and an arteriovenous blood sampling technique using Sulzer's vein, which selectively drains interscapular BAT-derived venous blood and systemic arterial blood. Next, a gas chromatography-based metabolomics protocol using those blood samples is demonstrated. The use of this technique should expand the understanding of BAT-regulated metabolite exchange at the inter-organ level by measuring the net uptake and release of metabolites by BAT.

In this protocol, methods relevant for BAT-optimized arteriovenous metabolomics using GC-MS in a mouse model are outlined. These methods allow for the acquisition of valuable insights into BAT-mediated metabolite exchange at the organismal level.

科研

生物化学

Arteriovenous Blood Sampling Technique in Mice Using Sulzer's Vein and Left Ventricle for Metabolomic Analysis

Arteriovenous Blood Sampling Technique in Mice Using Sulzer&#039;s Vein and Left Ventricle for Metabolomic Analysis  

To begin, position the mouse on a dissection tray equipped with a nose cone for anesthesia delivery. Verify the animal's reflexes, such as paw retraction, to confirm that the anesthesia has reached an appropriate depth. Then, position the mouse to expose the dorsal skin.Dampen the skin with ample 70%ethanol to prevent hair detachment. Make an incision along the back, starting from the lower part of the thorax and extend it up to the neck. Using bent tip forceps, gently lift the interscapular brown adipose tissue and carefully cut the attached tissue.Lift the fat pad toward the head and continue cutting the attached tissues to carefully open the region until the Sulzer's vein is exposed. Now, carefully cut the Sulzer's vein. Using bottom cut 200 microliter pipette tip and a P100 pipette, collect approximately 40 microliters of blood and store the collected blood in a blood collection tube.Keep the tube on ice until the serum collection process. Dampen the ventral skin generously with 70%ethanol to prevent hair detachment. Using scissors, carefully open the thoracic cavity to expose the heart.Using a one milliliter syringe equipped with a 29-gauge half inch needle, precisely puncture the apex area of the left ventricle. Insert two-thirds of the needle approximately three to five millimeters to the right horizontal of the heart apex, and pull the syringe back to collect blood from the left ventricle. Then, centrifuge the blood samples at 10, 000G for 10 minutes at four degrees Celsius.Using a pipette, collect the supernatant and proceed with metabolite extraction and analysis.