轻度创伤性脑损伤小鼠模型中血脑屏障破坏的评价

我们试图了解因暴露于爆炸引起的冲击波而导致的轻度创伤性脑损伤的复杂机制。我们还在研究缓解这些症状的方法。它全面描述了由于低强度爆炸引起的冲击波导致血脑屏障崩溃的初始阶段。

具体来说，分解在暴露后约 3 小时突然开始，受影响的病变在发作后大约一天内进行重塑。这种方法使我们能够更详细地检查 BBB 的细分，从而提供一个额外的指标来评估在爆炸情况下可以采用的各种处理的有效性。首先，准备一根电击管，让动物暴露在爆炸引起的冲击波中。

将麻醉的鼠标放置在距离电击管出口端 5 厘米的地方，确保其身体轴线平行但不与电击管的轴线对齐。然后向动物的头部发送一个峰值超压为 25 kpaks 的冲击波。对于埃文思蓝注射液，在盐水中制备 4% 重量的埃文思蓝溶液。

涡旋溶液并将其避光储存直至使用。以每克 2.5 微升的剂量将埃文思蓝溶液注射到尾静脉中。用 FITC-葡聚糖染料和多聚甲醛灌注麻醉的小鼠后，使用手术剪刀和镊子小心地去除大脑。

将大脑在 4 摄氏度的相同固定剂中固定过夜。第二天，用 PBS 替换固定剂。首先，从注射有埃文思蓝和 FITC-葡聚糖染料的爆炸冲击波处理的小鼠中获得固定的大脑。

准备一个 24 孔板，其中含有 500 微升 20% 甘油的磷酸盐缓冲液，每个孔中将 pH 值调节至 7.4。使用脑切片机，将大脑冠状切成 12 片，每片 1 毫米厚。将每个切片转移到 24 孔板的相应孔中，并将板在 4 摄氏度下存放至少两个小时。

然后用 50% 磷酸甘油缓冲液替换溶液，并在 4 摄氏度下再次储存至少两个小时。最后，用 100% 甘油替换溶液。为了立即进行显微镜观察，让切片在室温下静置至少两个小时。

将 500 微升甘油添加到 35 毫米玻璃底培养皿的底部。将脑切片转移到甘油溶液中，并用盖玻片覆盖表面。从盖玻片边缘去除多余的甘油。

在荧光显微镜下测量切片的荧光强度。显微镜测量后，将切片放回板的孔中。向每个孔中加入 500 微升磷酸盐缓冲液，并将 24 孔板在 4 摄氏度下储存过夜。

用 30% 磷酸甘油缓冲液替换溶液，并在 4 摄氏度下孵育板至少两小时，然后再进行免疫组织化学伊文思蓝标记表明，血脑屏障或 BBB 分解在爆炸冲击波暴露后 6 小时内开始，持续长达 7 天。荧光热点的大小和强度各不相同，仅 Evans 蓝色热点表明 FITC-葡聚糖注射后 Evans 蓝注射和修复期间 BBB 崩溃。反应性星形胶质细胞簇与免疫组化证实的 BBB 分解位点密切相关。

在爆炸冲击波暴露 3 天后，观察到活化的小胶质细胞和阿米巴样小胶质细胞与反应性星形胶质细胞一起。