dopamine-release-at-individual-presynaptic-terminals-visualized-with

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. To observe neurotransmitter uptake and ...

Columbia University

eMolecules, Inc.

Columbia College

&#x8FD9;&#x9879;&#x7814;&#x7A76;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x654F;&#x611F;&#x3001; &#x6709;&#x9009;&#x62E9;&#x6027;&#x7684;&#x548C;&#x5355;&#x80FA;&#x6C27;&#x5316;&#x9176; (MAO&#xFF09; &#x9176;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x8BB0;&#x8005;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x88AB;&#x901A;&#x8FC7;&#x8FED;&#x4EE3;&#x7684;&#x52AA;&#x529B;&#xFF0C;&#x6307;&#x5BFC;&#x4E0B;&#x5BA0;&#x7269;&#x548C; TICT &#x7684;&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x6982;&#x5FF5;&#xFF0C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x8FD8;&#x539F;&#x4EA4;&#x6362;&#x673A;&#x662F;&#x57FA;&#x4E8E;&#x4E00;&#x79CD;&#x7B80;&#x6613;&#x7684;&#x6C27;&#x5316;&#x73AF;&#x5316;&#x62A5;&#x544A;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x800C;&#x8A00;&#xFF0C;&#x63A2;&#x5934; 9 &#x4E2D;&#x7684; ethylamino &#x7EC4;&#x7684;&#x9176;&#x50AC;&#x5316;&#x6C27;&#x5316;&#x63A5;&#x7740;&#x901A;&#x8FC7;&#x5047;&#x5B9A;&#x919B;&#x4E2D;&#x95F4;&#xFF0C;&#x968F;&#x540E;&#x672F;&#x81EA;&#x53D1;&#x6027;&#x548C;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x7F29;&#x5408;&#x4E0E;&#x82EF;&#x80FA;&#x6C28;&#x57FA;&#x5432;&#x54DA;&#x4EA7;&#x54C1;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x8F6C;&#x7684;&#x65B9;&#x5F0F;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x6574;&#x4F53;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x6392;&#x653E;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x53D1;&#x751F;&#x91CD;&#x5927;&#x7684;&#x6539;&#x53D8;&#x3002;&#x65F6;&#x8868;&#x793A;&#x4EAE;&#x5EA6;&#xFF0C;&#x5219;&#x6B64;&#x6392;&#x653E;&#x5F00;&#x5173;&#x7684;&#x8D77;&#x6E90;&#x53EF;&#x80FD;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x91CF;&#x5B50;&#x4EA7;&#x91CF;&#x548C;&#x5438;&#x6536;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;&#x8367;&#x5149;&#x8BFB;&#x6570;&#x76F4;&#x63A5;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x7814;&#x7A76;&#x6C27;&#x5316;&#x4E00;&#x6B65; &#xFF08;&#x5373;&#x62A5;&#x544A;&#x673A;&#x5236;&#x5FEB;&#x901F;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x95F4;&#x7684;&#x919B;&#x672A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#xFF09;&#x3002;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668; 9 &#x662F;&#x6BDB;&#x6CFD;&#x4E1C; b &#x597D;&#x7684;&#x57FA;&#x6750; (&#x516C;&#x91CC; = 510 + /-40 &#x5988;&#x5988;&#xFF0C;kcat = 21 min-1) &#x4E0E;&#x751F;&#x7406;&#x57FA;&#x677F;&#x76F8;&#x5AB2;&#x7F8E;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x53C2;&#x6570;&#x3002;&#x6B64;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x5141;&#x8BB8;&#x76F4;&#x63A5;&#x548C;&#x8FDE;&#x7EED;&#x6D4B;&#x91CF;&#x7684;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x53CA;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x6BDB;&#x6CFD;&#x4E1C;&#x6D3B;&#x52A8;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5300;&#x6D46;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E14;&#x66F4;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x662F;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x4E3A;&#x4ECA;&#x540E;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x9636;&#x6BB5;&#x4E2D;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5668;&#x5B98;&#x3002;

&#x5149;&#x5B66;&#x5F00;&#x5173;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x4EE3;&#x8C22;&#x6307;&#x6807;&#x8BBE;&#x8BA1;&#xFF1A; &#x65B0;&#x8367;&#x5149;&#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x5355;&#x80FA;&#x6C27;&#x5316;&#x9176; (&#x6BDB;&#x6CFD;&#x4E1C; A &#x548C; B&#xFF09;&#x3002;

This study describes the design of sensitive, selective, and fluorogenic reporter substrates for monoamine oxidase (MAO) enzymes. This was achieved by an iterative effort, guided by PET and TICT photophysical concepts, which led to the development of irreversible redox switches based on a facile oxidation-cyclization reporting mechanism. Specifically, enzymatic oxidation of the ethylamino group in probe 9 proceeded via a putative aldehyde intermediate, which subsequently underwent spontaneous and intramolecular condensation with the aniline amino group furnishing an indole product in an irreversible fashion. This overall change resulted in a significant change in the emission intensity. When expressed in terms of brightness, the origins of this emission switch may be rationalized by the changes in quantum yield and absorbance strength. The fluorescence readout directly correlated with the kinetics of the oxidative step (i.e., reporting mechanism was fast, the intermediate aldehyde was not detected). Probe 9 is a good substrate for MAO B (Km = 510 +/- 40 muM, kcat = 21 min-1) with the kinetic parameters comparable to physiological substrates. This probe not only allows for direct and continuous measurement of MAO activity in mitochondria and tissue homogenates, but more importantly sets the stage for future studies in intact cells and organs.

Design of optical switches as metabolic indicators: new fluorogenic probes for monoamine oxidases (MAO A and B).

Cette &#xE9;tude d&#xE9;crit la conception de substrats sensibles, journaliste s&#xE9;lectifs, et fluorog&#xE8;nes pour la monoamine oxydase (MAO) enzymes. Ceci a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9; par un processus it&#xE9;ratif effort, guid&#xE9; par le PET et le TICE concepts photophysiques, qui a conduit au d&#xE9;veloppement de la irr&#xE9;versibles interrupteurs redox bas&#xE9; sur un m&#xE9;canisme de rapport d&#x26;#39;oxydo-cyclisation facile. Sp&#xE9;cifiquement, l&#x26;#39;oxydation enzymatique du groupe &#xE9;thylamino dans sonde 9 proc&#xE9;d&#xE9; par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire d&#x26;#39;un ald&#xE9;hyde putatif interm&#xE9;diaire, qui a ensuite subi de condensation intramol&#xE9;culaire spontan&#xE9;e et &#xE0; la fourniture d&#x26;#39;aniline groupe amino d&#x26;#39;un produit d&#x26;#39;indole dans un mode irr&#xE9;versible. Cette &#xE9;volution globale traduit par un changement significatif dans l&#x26;#39;intensit&#xE9; des &#xE9;missions. Lorsqu&#x26;#39;elle est exprim&#xE9;e en termes de luminosit&#xE9;, les origines de ce commutateur d&#x26;#39;&#xE9;mission peut &#xEA;tre rationalis&#xE9;e par les changements dans le rendement quantique et de la force d&#x26;#39;absorption. La lecture de fluorescence en corr&#xE9;lation directe avec la cin&#xE9;tique de l&#x26;#39;&#xE9;tape d&#x26;#39;oxydation (c.-&#xE0;-communication de l&#x26;#39;information a &#xE9;t&#xE9; rapide, l&#x26;#39;ald&#xE9;hyde interm&#xE9;diaire n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;). Sonde 9 est un bon substrat pour la MAO B (km = 510 + / - 40 muM, kcat = 21 mn-1) avec les param&#xE8;tres cin&#xE9;tiques comparables &#xE0; des substrats physiologiques. Cette sonde permet non seulement pour la mesure directe et continue d&#x26;#39;activit&#xE9; de la MAO dans les homog&#xE9;nats des mitochondries et des tissus, mais surtout ouvre la voie &#xE0; de futures &#xE9;tudes dans les cellules intactes et les organes.

Conception de commutateurs optiques en tant qu&#x26;#39;indicateurs m&#xE9;taboliques: Les nouvelles sondes fluorog&#xE8;nes pour la monoamine-oxydase (MAO A et B)

Design der optischen Schalter als metabolische Indikatoren: neue fluorogenen Sonden f&#xFC;r Monoaminoxidasen (MAO A und B).

Questo studio descrive il disegno del sensibile, selettiva e fluorogenic substrati reporter per gli enzimi della monoamino ossidasi (MAO). Questo &egrave; stato ottenuto da uno sforzo iterativo, guidato da concetti PET e TICT photophysical, che ha portato allo sviluppo di redox irreversibile switch basato su un meccanismo di segnalazione facile ossidazione-ciclizzazione. In particolare, ossidazione enzimatica del gruppo etilammino sonda 9 procedette tramite un&#39;aldeide putativo intermedio, che successivamente sub&igrave; la condensazione spontanea e intramolecolare con il gruppo amminico dell&#39;anilina, fornendo un prodotto di indolo in maniera irreversibile. Questo cambiamento globale ha portato un significativo cambiamento dell&#39;intensit&agrave; di emissione. Quando espressi in termini di luminosit&agrave;, le origini di questo interruttore di emissione possono essere razionalizzate dai cambiamenti nella forza di rendimento e capacit&agrave; di assorbimento di quantum. La lettura della fluorescenza direttamente correlata con la cinetica del passo ossidativo (cio&egrave;, segnalazione meccanismo era veloce, l&#39;aldeide intermedio non &egrave; stato rilevato). Sonda 9 &egrave; un buon substrato per MAO B (Km = 510 + 40 mamma, kcat = 21 min-1) con i parametri cinetici paragonabili a substrati fisiologici. Questa sonda non solo consente la misura diretta e continua dell&#39;attivit&agrave; MAO in mitocondri e tessuto omogeneati, ma soprattutto pone le basi per gli studi futuri di organi e cellule intatte.

Progettazione di interruttori ottici come indicatori metabolici: fluorogenic nuove sonde per ossidasi di monoamine (MAO A e B).

&#x672C;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#xFF08;MAO&#xFF09;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x9AD8;&#x611F;&#x5EA6;&#x3001;&#x9078;&#x629E;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x86CD;&#x5149;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x5BB9;&#x6613;&#x306A;&#x9178;&#x5316;&#x74B0;&#x5316;&#xB7;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#xB7;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x9178;&#x5316;&#x9084;&#x5143;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;PET&#x3068;TICT&#x5149;&#x7269;&#x7406;&#x7684;&#x306A;&#x6982;&#x5FF5;&#x306B;&#x5C0E;&#x304B;&#x308C;&#x308B;&#x53CD;&#x5FA9;&#x52AA;&#x529B;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x5177;&#x4F53;&#x7684;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;9&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x57FA;&#x306E;&#x9175;&#x7D20;&#x7684;&#x9178;&#x5316;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x5F8C;&#x30A2;&#x30CB;&#x30EA;&#x30F3;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x57FA;&#x306E;&#x5BB6;&#x5177;&#x4E0D;&#x53EF;&#x9006;&#x7684;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3067;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x30FC;&#x30EB;&#x88FD;&#x54C1;&#x3067;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5185;&#x7E2E;&#x5408;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x63A8;&#x5B9A;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x4E2D;&#x9593;&#x4F53;&#x3092;&#x7D4C;&#x7531;&#x3057;&#x3066;&#x9032;&#x884C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x5168;&#x4F53;&#x7684;&#x306A;&#x5909;&#x66F4;&#x306F;&#x3001;&#x767A;&#x5149;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306B;&#x5927;&#x304D;&#x306A;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x660E;&#x308B;&#x3055;&#x3067;&#x8868;&#x73FE;&#x3059;&#x308B;&#x5834;&#x5408;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x6392;&#x51FA;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x8D77;&#x6E90;&#x306F;&#x91CF;&#x5B50;&#x53CE;&#x7387;&#x3068;&#x5438;&#x5149;&#x5EA6;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5408;&#x7406;&#x5316;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x86CD;&#x5149;&#x8AAD;&#x307F;&#x51FA;&#x3057;&#x306F;&#x3001;&#x76F4;&#x63A5;&#x9178;&#x5316;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x6A5F;&#x69CB;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x901F;&#x3001;&#x4E2D;&#x9593;&#x306E;&#x30A2;&#x30EB;&#x30C7;&#x30D2;&#x30C9;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x5831;&#x544A;&#xFF09;&#x306E;&#x52D5;&#x614B;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;9&#x306F;MAO B&#x306E;&#x826F;&#x3044;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#xFF08;&#x30AD;&#x30ED;= 510 + /  -  40&#x304A;&#x6BCD;&#x3055;&#x3093;&#x3001;KCAT = 21 min-1&#xFF09;&#x306E;&#x751F;&#x7406;&#x5B66;&#x7684;&#x57FA;&#x8CEA;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3059;&#x308B;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x30D1;&#x30E9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x3001;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3084;&#x7D44;&#x7E54;&#x30DB;&#x30E2;&#x30B8;&#x30CD;&#x30FC;&#x30C8;&#x4E2D;&#x306E;MAO&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x76F4;&#x63A5;&#x9023;&#x7D9A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x3082;&#x3063;&#x3068;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x306E;&#x7121;&#x50B7;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3084;&#x81D3;&#x5668;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x4ECA;&#x5F8C;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x6BB5;&#x968E;&#x3092;&#x8A2D;&#x5B9A;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3060;&#x3051;&#x3002;

&#x30E1;&#x30BF;&#x30DC;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x6307;&#x6A19;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5149;&#x30B9;&#x30A4;&#x30C3;&#x30C1;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#xFF1A;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#xFF08;MAO A&#x304A;&#x3088;&#x3073;B&#xFF09;

&#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAD6C;&#xBD84;, &#xC120;&#xD0DD;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xBAA8;&#xB178; &#xC0B0;&#xD654; &#xD6A8;&#xC18C; (MAO) &#xD6A8;&#xC18C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; fluorogenic &#xAE30;&#xC790; &#xAE30;&#xD310;&#xC758; &#xC124;&#xACC4;&#xB97C; &#xC124;&#xBA85;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC0B0;&#xD654; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xC190;&#xC26C;&#xC6B4; &#xC0B0;&#xD654; cyclization &#xBCF4;&#xACE0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC744; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xD558;&#xB294; &#xC560;&#xC644; &#xB3D9;&#xBB3C; &#xBC0F; TICT photophysical &#xAC1C;&#xB150;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC720;&#xB3C4; &#xBC18;&#xBCF5;&#xC801;&#xC778; &#xB178;&#xB825;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2EC;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; 9 ethylamino &#xADF8;&#xB8F9;&#xC758; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC0B0;&#xD654; &#xC774;&#xD6C4; &#xB3CC;&#xC774;&#xD0AC; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xD328;&#xC158; indole &#xC81C;&#xD488; &#xAC00;&#xAD6C; &#xC544;&#xB2D0;&#xB9B0; &#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xADF8;&#xB8F9;&#xACFC; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; intramolecular &#xC751;&#xCD95;&#xC744; &#xC218;&#xC220; &#xD558;&#xB294; &#xC0C1; &#xC54C;&#xB370;&#xD558;&#xC774;&#xB4DC; &#xC911;&#xAC04;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; &#xC9C4;&#xD589; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC804;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBCC0;&#xACBD; &#xBC29;&#xCD9C; &#xAC15;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xC0C1;&#xB2F9;&#xD55C; &#xBCC0;&#xD654;&#xB97C; &#xACB0;&#xACFC;. &#xBC1D;&#xAE30;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xB54C;&#xC774; &#xBC29;&#xCD9C; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xAE30;&#xC6D0; &#xC591;&#xC790; &#xC218;&#xC728; &#xBC0F; &#xD761; &#xAD11;&#xB3C4;&#xC758; &#xBCC0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD569;&#xB9AC;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD615;&#xAD11; &#xD310;&#xB3C5; &#xC9C1;&#xC811; &#xC0B0;&#xD654; &#xB2E8;&#xACC4; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860; &#xC5F0;&#xAD00; (&#xC989;, &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC740; &#xBE68;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xC911;&#xAC04; &#xC54C;&#xB370;&#xD558;&#xC774;&#xB4DC; &#xAC80;&#xC0C9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;). &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; 9&#xB294; &#xB9C8;&#xC624; B&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC88B;&#xC740; &#xAE30;&#xD310; (Km 40 &#xC5C4;&#xB9C8;, &#xB3C4;&#xC2EC; &#xACF5;&#xD56D; + 510 = = 21 &#xBD84; 1) &#xC0DD;&#xB9AC; &#xAE30;&#xD310;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xB9E4;&#xAC1C; &#xBCC0;&#xC218;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xBC0F; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB9C8;&#xC624; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xC704;&#xD55C; homogenates, &#xC218; &#xC218; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xB354; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xAC83;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC640; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xB798; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xBB34;&#xB300;&#xB97C; &#xC124;&#xC815; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC2E0;&#xC9C4; &#xB300;&#xC0AC; &#xC9C0;&#xD45C;&#xB85C; &#xAD11;&#xD559; &#xC2A4;&#xC704;&#xCE58;&#xC758; &#xC124;&#xACC4;: &#xBAA8;&#xB178; oxidases (&#xB9C8;&#xC624; A&#xC640; B)&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; fluorogenic &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;.

Este estudio describe el dise&#xF1;o de sustratos sensibles, reportero selectivos, y fluorog&#xE9;nicos para la monoamino oxidasa (MAO), enzimas. Esto se logr&#xF3; mediante un proceso iterativo de esfuerzo, guiado por PET y TICT fotof&#xED;sicas conceptos, lo que llev&#xF3; al desarrollo de interruptores redox irreversibles sobre la base de un mecanismo de informaci&#xF3;n f&#xE1;cil de oxidaci&#xF3;n-ciclaci&#xF3;n. Espec&#xED;ficamente, la oxidaci&#xF3;n enzim&#xE1;tica del grupo etilamino en la sonda 9 procedi&#xF3; a trav&#xE9;s de un aldeh&#xED;do intermedio putativo, que posteriormente se sometieron a la condensaci&#xF3;n intramolecular espont&#xE1;nea y con el suministro grupo amino anilina un producto indol en una manera irreversible. Este cambio global result&#xF3; en un cambio significativo en la intensidad de emisi&#xF3;n. Cuando se expresa en t&#xE9;rminos de luminosidad, los or&#xED;genes de este interruptor de emisiones puede ser racionalizado por los cambios en el rendimiento cu&#xE1;ntico y la fuerza de absorci&#xF3;n. La lectura de fluorescencia directamente correlacionada con la cin&#xE9;tica de la etapa de oxidaci&#xF3;n (es decir, informando mecanismo fue r&#xE1;pida, el aldeh&#xED;do intermedio no se detect&#xF3;). Sonda 9 es un buen sustrato para MAO-B (Km = 510 + / - 40 madre, Kcat = 21 min-1) con los par&#xE1;metros cin&#xE9;ticos comparables a los sustratos fisiol&#xF3;gicos. Esta sonda no s&#xF3;lo permite la medici&#xF3;n directa y continua de la actividad de la MAO en homogeneizado de las mitocondrias y el tejido, pero lo m&#xE1;s importante sienta las bases para futuros estudios en c&#xE9;lulas intactas y los &#xF3;rganos.

Dise&#xF1;o de los interruptores &#xF3;pticos como indicadores metab&#xF3;licos: Nuevas sondas fluorog&#xE9;nicos para monoamina oxidasas (MAO A y B)

&#x4E2D;&#x67A2;&#x795E;&#x7ECF;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4F20;&#x8F93;&#x4FE1;&#x53F7;&#x901A;&#x8FC7;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x878D;&#x5408;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x91CA;&#x653E;&#x7684;&#x795E;&#x7ECF;&#x5143;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x89C2;&#x5BDF;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x5438;&#x6536;&#x548C;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x76F4;&#x63A5;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E3A;&#x57FA;&#x677F;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5355;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x7EB9;&#x72B6;&#x4F53;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x56FE;&#x50CF;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#xFF0C;&#x53D6;&#x5F97;&#x82E5;&#x5E72;&#x610F;&#x89C1;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x91CA;&#x653E;&#x6BCF;&#x523A;&#x6FC0;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7A81;&#x89E6;&#x5C0F;&#x6CE1;&#x7684;&#x5206;&#x6570;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x523A;&#x6FC0;&#x9891;&#x7387;&#x3002;&#x52A8;&#x529B;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x72EC;&#x7279;&#x7684;&quot;&#x4FDD;&#x7559;&quot;&#x7A81;&#x89E6;&#x56CA;&#x6CE1;&#x4EBA;&#x53E3;&#x662F;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x7684;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x4E0D;&#x5230;&#x3002;&#x4F9D;&#x8D56;&#x4E8E;&#x9891;&#x7387;&#x7684;&#x975E;&#x5747;&#x8D28;&#x6027;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7801;&#x5934;&#x900F;&#x9732;&#x8FD9;&#x662F;&#x90E8;&#x5206;&#x53D6;&#x51B3;&#x4E8E; D2 &#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x53D7;&#x4F53;&#xFF0C;&#x6307;&#x793A;&#x9891;&#x7387;&#x4F9D;&#x8D56;&#x7684;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x9009;&#x62E9;&#x7F16;&#x7801;&#x7684;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x591A;&#x5DF4;&#x80FA;&#x91CA;&#x653E;&#x4ECE;&#x5355;&#x4E2A;&#x7A81;&#x89E6;&#x524D;&#x7EC8;&#x7AEF;&#x3002;

The nervous system transmits signals between neurons via neurotransmitter release during synaptic vesicle fusion. In order to observe neurotransmitter uptake and release from individual presynaptic terminals directly, we designed fluorescent false neurotransmitters as substrates for the synaptic vesicle monoamine transporter. Using these probes to image dopamine release in the striatum, we made several observations pertinent to synaptic plasticity. We found that the fraction of synaptic vesicles releasing neurotransmitter per stimulus was dependent on the stimulus frequency. A kinetically distinct "reserve" synaptic vesicle population was not observed under these experimental conditions. A frequency-dependent heterogeneity of presynaptic terminals was revealed that was dependent in part on D2 dopamine receptors, indicating a mechanism for frequency-dependent coding of presynaptic selection.

Fluorescent false neurotransmitters visualize dopamine release from individual presynaptic terminals.

Le syst&#xE8;me nerveux transmet des signaux entre les neurones via la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs lors de la fusion des v&#xE9;sicules synaptiques. Afin d&#x26;#39;observer l&#x26;#39;absorption et la lib&#xE9;ration de neurotransmetteurs individuels terminaisons pr&#xE9;synaptiques directement, nous avons con&#xE7;u fluorescentes faux neurotransmetteurs comme substrats pour le transporteur de la v&#xE9;sicule synaptique monoamine. L&#x26;#39;utilisation de ces sondes pour la lib&#xE9;ration de dopamine dans le striatum l&#x26;#39;image, nous avons fait plusieurs observations pertinentes &#xE0; la plasticit&#xE9; synaptique. Nous avons constat&#xE9; que la fraction de v&#xE9;sicules synaptiques lib&#xE9;rant des neurotransmetteurs par stimulus &#xE9;tait d&#xE9;pendante de la fr&#xE9;quence du stimulus. Un cin&#xE9;tiquement distinctes &#xAB;r&#xE9;serve&#xBB; de la population des v&#xE9;sicules synaptiques n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; observ&#xE9; dans ces conditions exp&#xE9;rimentales. Une h&#xE9;t&#xE9;rog&#xE9;n&#xE9;it&#xE9; d&#xE9;pend de la fr&#xE9;quence des terminaisons pr&#xE9;synaptiques a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;v&#xE9;l&#xE9; que d&#xE9;pendait en partie sur les r&#xE9;cepteurs dopaminergiques D2, indiquant un m&#xE9;canisme de codage d&#xE9;pendant de la fr&#xE9;quence de s&#xE9;lection pr&#xE9;synaptique.

Fluorescentes faux neurotransmetteurs Visualisez la lib&#xE9;ration de dopamine &#xE0; partir individuels terminaisons pr&#xE9;synaptiques

Das Nervensystem &uuml;bertr&auml;gt Signale zwischen Neuronen &uuml;ber Neurotransmitter-Freisetzung w&auml;hrend synaptische Vesikel Verschmelzung. Um Neurotransmitter Aufnahme zu beobachten und Pressemitteilung vom einzelnen pr&auml;synaptischen Klemmen direkt, gestalteten wir fluoreszierende falsche Neurotransmitter als Substrate f&uuml;r die synaptische Vesikel Monoamin-Transporter. Verwenden diese Pr&uuml;fpunkte auf Bild-Dopamin-Release im Striatum, haben wir mehrere Beobachtungen, die synaptische Plastizit&auml;t. Wir fanden, dass der Anteil der synaptische Vesikel, die Freigabe Neurotransmitter pro Impuls die Impuls-Frequenz abh&auml;ngig war. Kinetisch unterschiedliche &quot;Reservieren&quot; synaptische Vesikel Einwohner wurde unter diesen Versuchsbedingungen nicht beobachtet. Eine frequenzabh&auml;ngige Heterogenit&auml;t der pr&auml;synaptischen Terminals wurde aufgedeckt, dass D2-Dopamin-Rezeptoren, angibt, einen Mechanismus f&uuml;r die frequenzabh&auml;ngige Kodierung der pr&auml;synaptischen Auswahl teilweise abh&auml;ngig war.

Fluoreszierende falsche Neurotransmitter Dopamin-Freisetzung aus einzelnen pr&auml;synaptischen Klemmen zu visualisieren.

Il sistema nervoso trasmette segnali tra neuroni tramite rilascio di neurotrasmettitore durante la fusione della vescicola sinaptica. Al fine di osservare assorbimento del neurotrasmettitore e rilasciare direttamente dai singoli terminali presinaptiche, abbiamo progettato fluorescenti falsi neurotrasmettitori come substrati per il trasportatore di monoamine Vescicola sinaptica. Usando queste sonde a immagine rilascio di dopamina nello striato, abbiamo fatto diverse osservazioni pertinenti a sinaptico plasticit&agrave;. Abbiamo trovato che la frazione di vescicole sinaptiche rilasciando il neurotrasmettitore per stimolo era dipende la frequenza di stimolo. Una popolazione di Vescicola sinaptica cineticamente distinti &quot;riserva&quot; non &egrave; stata osservata in queste condizioni sperimentali. Un&#39;eterogeneit&agrave; dipendente dalla frequenza dei terminali presinaptiche &egrave; stata rivelata che era dipendente in parte su ricevitori della dopamina D2, che indica un meccanismo per la codifica di frequenza-dipendente della selezione presinaptica.

Fluorescenti falsi neurotrasmettitori visualizzare rilascio di dopamina dai singoli terminali presinaptiche.

&#x795E;&#x7D4C;&#x7CFB;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x878D;&#x5408;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x30CB;&#x30E5;&#x30FC;&#x30ED;&#x30F3;&#x9593;&#x306E;&#x4FE1;&#x53F7;&#x3092;&#x9001;&#x4FE1;&#x3059;&#x308B;&#x3002;&#x76F4;&#x63A5;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x3068;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x306E;&#x57FA;&#x8CEA;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x306E;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x8A2D;&#x8A08;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7DDA;&#x6761;&#x4F53;&#x306E;&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x53EF;&#x5851;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3059;&#x308B;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x89B3;&#x6E2C;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x3092;&#x653E;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x306F;&#x523A;&#x6FC0;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x52D5;&#x529B;&#x5B66;&#x7684;&#x306B;&#x7570;&#x306A;&#x308B; &#x26;quot;&#x4E88;&#x7D04;&#x26;quot;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6761;&#x4EF6;&#x4E0B;&#x3067;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3055;&#x308C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x4F9D;&#x5B58;&#x6027;&#x306E;&#x4E0D;&#x5747;&#x4E00;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3059;&#x308B;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3001;D2&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306B;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x305F;&#x3002;

&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306F;&#x3001;&#x500B;&#x3005;&#x306E;&#x30B7;&#x30CA;&#x30D7;&#x30B9;&#x524D;&#x7D42;&#x672B;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x30C9;&#x30FC;&#x30D1;&#x30DF;&#x30F3;&#x653E;&#x51FA;&#x3092;&#x53EF;&#x8996;&#x5316;

&#xC2E0; &#xACBD;&#xACC4; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xD4E8;&#xC804; &#xC911; &#xC2E0;&#xACBD; &#xBD84;&#xB9AC;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774;&#xC758; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC804;&#xC1A1;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xD1B5;&#xD48D; &#xAD00;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD558; &#xACE0; &#xC9C1;&#xC811; &#xAC1C;&#xBCC4; presynaptic &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD9C;&#xC2DC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xBAA8;&#xB178; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAE30;&#xD310;&#xC73C;&#xB85C; &#xD615;&#xAD11; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xC124;&#xACC4; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAD00;&#xCE21; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4;&#xAC00; &#xC18C;&#xC131;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4; &#xC774;&#xBBF8;&#xC9C0; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC5D0;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC5EC;&#xAC00;&#xC5D0;&#xC11C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9; &#xB2F9; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC29;&#xCD9C;&#xC758; &#xBD84;&#xC218;&#xB294; &#xC790;&#xADF9; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;&#xC5D0; &#xB530;&#xB77C; &#xB2EC;&#xB77C; &#xC9D1;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1C;&#xACAC;. &#xC9C0; &#xBCC4;&#xAC1C; &quot;&#xC608;&#xC57D;&quot; &#xC2DC; &#xB0C5; &#xC2A4; &#xC18C;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD00;&#xCC30; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. Presynaptic &#xB2E8;&#xB9D0;&#xAE30;&#xC758; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC885;&#xC18D; &#xC774;&#xC885; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xC885;&#xC18D; presynaptic &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xCF54;&#xB529;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; D2 &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC5D0; &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC758;&#xC874; &#xD588;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD600;&#xC84C;&#xB2E4;.

&#xD615;&#xAD11; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB3C4;&#xD30C;&#xBBFC; &#xBC29;&#xCD9C; &#xAC1C;&#xBCC4; presynaptic &#xD130;&#xBBF8;&#xB110;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654;.

El sistema nervioso transmite se&#xF1;ales entre las neuronas a trav&#xE9;s de la liberaci&#xF3;n de neurotransmisores durante la fusi&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas. Con el fin de observar la captaci&#xF3;n de neurotransmisores y liberaci&#xF3;n de terminales presin&#xE1;pticas individuales directamente, hemos dise&#xF1;ado fluorescentes falsos neurotransmisores como sustratos para el transportador de la ves&#xED;cula sin&#xE1;ptica monoamina. El uso de estas sondas a la liberaci&#xF3;n de la imagen de la dopamina en el estriado, que hizo varias observaciones pertinentes a la plasticidad sin&#xE1;ptica. Hemos encontrado que la fracci&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas liberaci&#xF3;n de neurotransmisores por est&#xED;mulo era dependiente de la frecuencia del est&#xED;mulo. Una cin&#xE9;tica distinta &#x26;quot;reserva&#x26;quot; de la poblaci&#xF3;n de ves&#xED;culas sin&#xE1;pticas no se observ&#xF3; en estas condiciones experimentales. Una heterogeneidad dependiente de la frecuencia de los terminales presin&#xE1;pticos se revel&#xF3; que era dependiente en parte de los receptores de dopamina D2, lo que indica un mecanismo para dependientes de la frecuencia de codificaci&#xF3;n de selecci&#xF3;n presin&#xE1;ptica.

Fluorescentes falsos neurotransmisores Visualice liberaci&#xF3;n de dopamina desde individuales terminales presin&#xE1;pticos

&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x8FDB; pH &#x54CD;&#x5E94;&#x6027;&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28; (pH &#x54CD;&#x5E94;&#x6027; FFNs) &#x4F5C;&#x4E3A;&#x5C0F;&#x8BF4;&#x56CA;&#x6CE1;&#x5355;&#x80FA;&#x8F6C;&#x8FD0;&#x4F53; (VMAT) &#x57FA;&#x677F;&#x548C;&#x8BA1;&#x91CF;&#x8367;&#x5149; ph &#x503C;&#x4F20;&#x611F;&#x5668;&#x63A2;&#x6D4B;&#x8FD9;&#x4E00;&#x884C;&#x4E3A;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x4EE3;&#x7406;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x53D6;&#x5F97;&#x4E86;&#x7EFC;&#x5408;&#x51E0;&#x79CD;&#x7ED3;&#x6784;&#x5143;&#x7D20;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x4E59;&#x57FA;&#x96C6;&#x56E2; (VMAT &#x8BC6;&#x522B;&#xFF09;&#x3001; &#x5364;&#x4EE3;&#x7F9F;&#x57FA;&#x9999;&#x8C46;&#x7D20;&#x6838;&#x5FC3; (&#x8BA1;&#x91CF;&#x5149;&#x5B66; pH &#x9065;&#x611F;&#x6240;&#x9700;&#x7684; ph &#x503C;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;) &#x548C; N-&#x6216; C-&#x70F7;&#x57FA;&#x5316; &#xFF08;&#x8C03;&#x5236;&#x7684;&#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#xFF09; &#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x5316;&#x5206;&#x5B50;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;14 &#x5408;&#x6210;&#x7684;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;Mini202 &#x88AB;&#x9009;&#x7684;&#x63A2;&#x8BA8;&#x57FA;&#x4E8E;&#x7684; VMAT2 &#x8F6C;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x53EF;&#x53D6;&#x7684;&#x5149;&#x5B66;&#x6027;&#x80FD;&#x7684;&#x6700;&#x9AD8;&#x5438;&#x6536;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x4F7F;&#x7528; Mini202&#xFF0C;&#x6D4B;&#x91CF; ph &#x503C;&#x7684;&#x513F;&#x8336;&#x915A;&#x80FA;&#x5206;&#x6CCC;&#x56CA;&#x6CE1; PC 12 &#x7EC6;&#x80DE; (pH &#x7EA6; 5.9) &#x901A;&#x8FC7;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x8367;&#x5149;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E2D;&#x3002;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E;&#x7532;&#x57FA;&#x82EF;&#x4E19;&#x80FA;&#x5BFC;&#x81F4;&#x6C34;&#x6CE1; ph &#x503C; &#xFF08;pH &#x7EA6; 6.4&#xFF09;&#xFF0C;&#x589E;&#x52A0;&#x4E0E;&#x884C;&#x52A8;&#x7684;&#x8FD9;&#x79CD;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x5E76;&#x6700;&#x7EC8;&#x5BFC;&#x81F4;&#x91CD;&#x65B0;&#x5206;&#x914D;&#x7684;&#x6C34;&#x75B1;&#x5185;&#x5BB9; &#xFF08;&#x5305;&#x62EC; Mini202&#xFF09; &#x4ECE;&#x6CE1;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x62DF;&#x8BAE;&#x673A;&#x5236;&#x76F8;&#x4E00;&#x81F4;&#x3002;Mini202 &#x662F;&#x8DB3;&#x591F;&#x660E;&#x4EAE;&#xFF0C;photostable&#xFF0C;&#x548C;&#x9002;&#x5408;&#x53CC;&#x5149;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x3002;&#x8BE5;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x5C06;&#x542F;&#x7528;&#x57FA;&#x672C;&#x795E;&#x7ECF;&#x79D1;&#x5B66;&#x548C;&#x795E;&#x7ECF;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7814;&#x7A76;&#x4EE5;&#x53CA;&#x836F;&#x7269;&#x7B5B;&#x9009;&#x7684;&#x52AA;&#x529B;&#x3002;

PH &#x54CD;&#x5E94;&#x6027;&#x8367;&#x5149;&#x5047;&#x795E;&#x7ECF;&#x9012;&#x8D28;&#x7684;&#x53D1;&#x5C55;&#x3002;

We introduce pH-responsive fluorescent false neurotransmitters (pH-responsive FFNs) as novel probes that act as vesicular monoamine transporter (VMAT) substrates and ratiometric fluorescent pH sensors. The development of these agents was achieved by systematic molecular design that integrated several structural elements, including the aminoethyl group (VMAT recognition), halogenated hydroxy-coumarin core (ratiometric optical pH sensing in the desired pH range), and N- or C-alkylation (modulation of lipophilicity). Of 14 compounds that were synthesized, the probe Mini202 was selected based on the highest uptake in VMAT2-transfected HEK cells and desirable optical properties. Using Mini202, we measured the pH of catecholamine secretory vesicles in PC-12 cells (pH approximately 5.9) via two-photon fluorescence microscopy. Incubation with methamphetamine led to an increase in vesicular pH (pH approximately 6.4), consistent with a proposed mechanism of action of this psychostimulant, and eventually to redistribution of vesicular content (including Mini202) from vesicles to cytoplasm. Mini202 is sufficiently bright, photostable, and suitable for two-photon microscopy. This probe will enable fundamental neuroscience and neuroendocrine research as well as drug screening efforts.

Development of pH-responsive fluorescent false neurotransmitters.

Nous introduisons pH-sensibles fluorescents faux neurotransmetteurs (pH-sensibles FFNs) en tant que sondes de nouveaux qui agissent en tant que transporteur de monoamine v&#xE9;siculaire (VMAT) substrats et ratiom&#xE9;triques capteurs de pH fluorescents. Le d&#xE9;veloppement de ces agents a &#xE9;t&#xE9; r&#xE9;alis&#xE9;e par la conception mol&#xE9;culaire syst&#xE9;matique int&#xE9;gr&#xE9;s plusieurs &#xE9;l&#xE9;ments structurels, y compris le groupe amino&#xE9;thyl (VMAT reconnaissance), halog&#xE9;n&#xE9;s hydroxy-coumarine de base (ratiom&#xE9;trique pH de d&#xE9;tection optique dans la gamme de pH souhait&#xE9;e), et N-ou C-alkylation (modulation de lipophilie). Sur les 14 compos&#xE9;s qui ont &#xE9;t&#xE9; synth&#xE9;tis&#xE9;s, la sonde a &#xE9;t&#xE9; Mini202 choisis en fonction de la plus haute absorption dans les cellules HEK transfect&#xE9;es VMAT2 et souhaitables propri&#xE9;t&#xE9;s optiques. Utilisation Mini202, nous avons mesur&#xE9; le pH des v&#xE9;sicules de s&#xE9;cr&#xE9;tion de cat&#xE9;cholamines dans PC-12 cellules (pH d&#x26;#39;environ 5,9) par l&#x26;#39;interm&#xE9;diaire microscopie &#xE0; deux photons de fluorescence. L&#x26;#39;incubation avec de la m&#xE9;thamph&#xE9;tamine a conduit &#xE0; une augmentation du pH v&#xE9;siculaire (pH d&#x26;#39;environ 6,4), compatible avec un m&#xE9;canisme d&#x26;#39;action propos&#xE9; de ce psychostimulant, et finalement &#xE0; la redistribution du contenu v&#xE9;siculaire (y compris Mini202) &#xE0; partir de v&#xE9;sicules au cytoplasme. Mini202 est suffisamment clair, photostable, et adapt&#xE9; pour microscopie &#xE0; deux photons. Cette sonde permettra la recherche fondamentale en neurosciences et neuro-endocriniens ainsi que les efforts de d&#xE9;pistage de drogues.

D&#xE9;veloppement de PH-sensibles fluorescentes faux neurotransmetteurs

Stellen wir pH-Wert-responsive Leuchtstofflampe falsche Neurotransmitter (pH-Wert-responsive FFNs) als Roman-Sonden diese Handlung als vesikul&auml;ren Monoamin-Transporter (VMAT)-Substrate und ratiometrisch fluoreszierende pH-Elektroden. Die Entwicklung dieser Mittel wurde durch systematische MOLEKULARDESIGN erzielt, die mehrere strukturelle Elemente, einschlie&szlig;lich der Amino-Gruppe (VMAT Anerkennung), halogenierte hydroxy-Cumarin Core (ratiometrisch optische pH-Wert im gew&uuml;nschten pH-Bereich Sensorik) und N - oder C-Alkylierung (Modulation der Lipophilie) integriert. Der 14-Mischungen synthetisiert wurden, anhand die Sonde, die Mini202 ausgew&auml;hlt wurde die h&ouml;chste Akzeptanz in HEK VMAT2-transfected Zellen und w&uuml;nschenswert optischen Eigenschaften. Mit Mini202, messen wir den pH-Wert des Katecholamin sekretorischen Vesikeln in PC-12 Zellen (pH-Wert ca. 5,9) &uuml;ber zwei-Photonen-Mikroskopie. Inkubation mit Methamphetamin f&uuml;hrte zu einem Anstieg der vesikul&auml;ren pH-Wert (pH ca. 6,4), mit einer vorgeschlagenen Wirkmechanismus von diesem Psychostimulans und schlie&szlig;lich zu Umverteilung der vesikul&auml;ren Inhalte (einschlie&szlig;lich Mini202) von Vesikeln zu Zytoplasma. Mini202 ist ausreichend hell, lichtbest&auml;ndig, geeignet f&uuml;r zwei-Photonen-Mikroskopie. Diese Sonde wird grundlegende Neurologie und neuroendokrine Forschung sowie Drogen screening Bem&uuml;hungen erm&ouml;glichen.

Entwicklung der pH-Wert-responsive fluoreszierende falsche Neurotransmitter.

Introduciamo fluorescente pH-sensibile falsi neurotrasmettitori (FFNs pH-sensibile) come romanzo sonde che agiscono come substrati (VMAT) trasportatore vescicolare di monoamine e sensori di pH fluorescenti raziometrici. Lo sviluppo di questi agenti &egrave; stato realizzato da sistematica progettazione molecolare che hanno integrato i diversi elementi strutturali, compreso il gruppo amminoetil (riconoscimento VMAT), alogenati idrossi-cumarina core (raziometrici pH optical sensing nell&#39;intervallo di pH desiderato) e N - o C-alchilazione (modulazione della lipofilia). 14 Composti che sono stati sintetizzati, la sonda che mini202 &egrave; stato selezionato basato sull&#39;assorbimento massimo in cellule HEK transfected VMAT2 e desiderabile propriet&agrave; ottiche. Utilizzando Mini202, abbiamo misurato il pH delle vescicole secretorie delle catecolamine in PC-12 celle (pH circa 5,9) tramite microscopia di fluorescenza del due-fotone. Incubazione con metanfetamina ha portato a un aumento di malattie vescicolari pH (pH circa 6,4), coerente con un meccanismo proposto di azione di questo psicostimolante e infine alla ridistribuzione del contenuto vescicolare (compresi Mini202) da vescicole al citoplasma. Mini202 &egrave; sufficientemente luminoso, fotostabile e adatto per la microscopia del due-fotone. Questa sonda consentir&agrave; neuroscienza fondamentale e neuroendocrino ricerca cos&igrave; come gli sforzi di screening di stupefacenti.

Sviluppo di pH-reattivi fluorescenti falsi neurotrasmettitori.

&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x30E2;&#x30CE;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30DD;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#xFF08;VMAT&#xFF09;&#x57FA;&#x677F;&#x3068;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x86CD;&#x5149;pH&#x30BB;&#x30F3;&#x30B5;&#x30FC;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3059;&#x308B;&#x65B0;&#x305F;&#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;pH&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#xFF08;pH&#x5FDC;&#x7B54;FFNS&#xFF09;&#x3092;&#x3054;&#x7D39;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x85AC;&#x5264;&#x306E;&#x958B;&#x767A;&#x304C;&#x4F53;&#x7CFB;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x57FA;&#xFF08;VMAT&#x8A8D;&#x8B58;&#xFF09;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x3001;&#x7D71;&#x5408;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x8981;&#x7D20;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;&#x30EC;&#x30B7;&#x30AA;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x5149;&#x5B66;pH&#x304C;&#x6240;&#x671B;&#x306E;pH&#x7BC4;&#x56F2;&#x3067;&#x611F;&#x77E5;&#xFF09;&#x30D2;&#x30C9;&#x30ED;&#x30AD;&#x30B7;&#x30AF;&#x30DE;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B3;&#x30A2;&#x3092;&#x30CF;&#x30ED;&#x30B2;&#x30F3;&#x5316;&#x3057;&#x305F;&#x30C7;&#x30B6;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;N-&#x307E;&#x305F;&#x306F;C-&#x30A2;&#x30EB;&#x30AD;&#x30EB;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x9054;&#x6210;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#xFF08;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#xFF09;&#x3002;&#x5408;&#x6210;&#x3057;&#x305F;14&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;Mini202&#x306F;VMAT2&#x30C8;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;HEK&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x671B;&#x307E;&#x3057;&#x3044;&#x5149;&#x5B66;&#x7684;&#x7279;&#x6027;&#x3067;&#x6700;&#x9AD8;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x8FBC;&#x307F;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x3066;&#x9078;&#x629E;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002; Mini202&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x86CD;&#x5149;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;PC-12&#x7D30;&#x80DE;&#x6DB2;&#xFF08;pH&#x7D04;5.9&#xFF09;&#x306E;&#x30AB;&#x30C6;&#x30B3;&#x30FC;&#x30EB;&#x30A2;&#x30DF;&#x30F3;&#x5206;&#x6CCC;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;pH&#x3092;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30E1;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A7;&#x30BF;&#x30DF;&#x30F3;&#x3068;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30AD;&#x30E5;&#x30D9;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x7CBE;&#x795E;&#x523A;&#x6FC0;&#x85AC;&#x306E;&#x4F5C;&#x7528;&#x306E;&#x63D0;&#x6848;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x4E00;&#x81F4;&#x3057;&#x3001;&#x6700;&#x7D42;&#x7684;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306B;&#x5C0F;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306E;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C6;&#x30F3;&#x30C4;&#x306E;&#x518D;&#x5206;&#x914D;&#xFF08;Mini202&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#xFF09;&#x3001;&#x5C0F;&#x80DE;&#x306E;pH&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#xFF08;&#x7D04;6.4&#x306E;pH&#xFF09;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x3063;&#x305F;&#x3002; Mini202&#x306F;&#x5341;&#x5206;&#x306B;&#x660E;&#x308B;&#x304F;&#x3001;&#x5149;&#x5B89;&#x5B9A;&#x3001;&#x4E8C;&#x5149;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x795E;&#x7D4C;&#x79D1;&#x5B66;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x795E;&#x7D4C;&#x5185;&#x5206;&#x6CCC;&#x7814;&#x7A76;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x5275;&#x85AC;&#x30B9;&#x30AF;&#x30EA;&#x30FC;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x3078;&#x306E;&#x53D6;&#x308A;&#x7D44;&#x307F;&#x304C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

pH&#x5FDC;&#x7B54;&#x6027;&#x86CD;&#x5149;&#x507D;&#x795E;&#x7D4C;&#x4F1D;&#x9054;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x958B;&#x767A;

PH &#xC751;&#xB2F5;&#xC131;&#xC774; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xD615;&#xAD11; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; (pH &#xBC18;&#xC751; FFNs) &#xC18C;&#xC124;&#xC73C;&#xB85C; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xBAA8;&#xB178; &#xC804;&#xC1A1; (VMAT) &#xAE30;&#xD310; &#xBC0F; pH &#xD615;&#xAD11; &#xC13C;&#xC11C;&#xB85C; &#xC11C; &#xADF8; &#xD589;&#xC704; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5D0;&#xC774;&#xC804;&#xD2B8;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C; aminoethyl &#xADF8;&#xB8F9; (VMAT &#xC778;&#xC2DD;), &#xD560;&#xB85C;&#xAC90;&#xD654; hydroxy coumarin &#xCF54;&#xC5B4; (&#xC6D0;&#xD558;&#xB294; pH &#xBC94;&#xC704;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC9C0; &#xBE44;&#xC728; &#xAE30;&#xC900; &#xAD11; pH), N &#xB610;&#xB294; C &#xC54C;&#xD0AC;&#xD654;&#xC81C; (lipophilicity&#xC758; &#xBCC0;&#xC870;) &#xB4F1; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAD6C;&#xC870;&#xC801; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC790; &#xC124;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC2E4;&#xD604; &#xB410;&#xB2E4;. 14 &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xD569;&#xC131; &#xD588;&#xB2E4;, Mini202 &#xC120;&#xD0DD;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xAD11;&#xD559; &#xC18D;&#xC131;&#xACFC; &#xBC14;&#xB78C;&#xC9C1;&#xD55C; VMAT2 &#xD398; HEK &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC00;&#xC7A5; &#xB192;&#xC740; &#xD638;&#xC751;&#xC744; &#xAE30;&#xBC18;&#xC73C;&#xB85C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mini202&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE74; &#xD14C; &#xCF5C; &#xC544;&#xBBFC; &#xBD84; &#xC18C;&#xD3EC; 2 &#xAD11;&#xC790; &#xD615;&#xAD11; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC744; &#xD1B5;&#xD574; PC-12 &#xC140; (pH &#xC57D; 5.9)&#xC5D0;&#xC11C; Ph&#xB97C; &#xCE21;&#xC815; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xBA54; &#xB2F4; &#xD398;&#xD0C0; &#xBBFC;&#xACFC; &#xC778;&#xD050;&#xBCA0;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; pH (pH &#xC57D; 6.4)&#xC758; &#xC99D;&#xAC00;&#xB97C; &#xC8FC;&#xB3C4; &#xC81C;&#xC548; &#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC758;&#xC774; psychostimulant&#xC758; &#xD589;&#xB3D9;&#xACFC; &#xACB0;&#xAD6D; &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xC18C;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAE30;&#xACF5;&#xC744; &#xCF58;&#xD150;&#xCE20; (Mini202 &#xD3EC;&#xD568;)&#xC758; &#xC7AC;&#xBD84;&#xBC30;&#xC640; &#xC77C;&#xCE58; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. Mini202&#xB294; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xBC1D;&#xC740;, photostable, &#xB450; &#xAD11;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD; &#xAC80;&#xC0AC; &#xBC95;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xD558;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC870;&#xC0AC;&#xC5D0;&#xB294; &#xADFC;&#xBCF8;&#xC801;&#xC778; &#xC2E0;&#xACBD; &#xACFC;&#xD559; neuroendocrine &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xB178;&#xB825;&#xC744; &#xC2EC;&#xC0AC; &#xD558;&#xB294; &#xB9C8;&#xC57D; &#xC218; &#xC788;&#xAC8C; &#xB41C;&#xB2E4;.

PH &#xC751;&#xB2F5;&#xC131;&#xC774; &#xB6F0;&#xC5B4;&#xB09C; &#xD615;&#xAD11; &#xC798;&#xBABB; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xC804;&#xB2EC; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Se introduce sensibles al pH neurotransmisores falsos fluorescentes (sensible al pH FFNS) como sondas nuevos que act&#xFA;an como transportador vesicular de monoaminas (VMAT) sustratos y ratiometric sensores de pH fluorescentes. El desarrollo de estos agentes se logr&#xF3; mediante un dise&#xF1;o sistem&#xE1;tico molecular que integrados varios elementos estructurales, incluyendo el grupo aminoetilo (VMAT reconocimiento), halogenados hidroxi-cumarina b&#xE1;sico (pH radiom&#xE9;trico de detecci&#xF3;n &#xF3;ptica en el intervalo de pH deseado), y N o C-alquilaci&#xF3;n (modulaci&#xF3;n de lipofilia). De los 14 compuestos que se sintetizan, el Mini202 sonda se seleccionan en base a la mayor absorci&#xF3;n de VMAT2 transfecci&#xF3;n de c&#xE9;lulas HEK y deseables propiedades &#xF3;pticas. Usando Mini202, que mide el pH de ves&#xED;culas secretoras de catecolaminas en c&#xE9;lulas PC-12 (pH de aproximadamente 5,9) a trav&#xE9;s de dos fotones microscop&#xED;a de fluorescencia. La incubaci&#xF3;n con metanfetaminas condujo a un aumento en el pH vesicular (pH alrededor de 6,4), en consonancia con una propuesta de mecanismo de acci&#xF3;n de este psicoestimulante, y, finalmente, a la redistribuci&#xF3;n del contenido vesicular (incluyendo Mini202) de las ves&#xED;culas de citoplasma. Mini202 es lo suficientemente brillante, fotoestable, y adecuado para la microscopia de dos fotones. Este sondeo permitir&#xE1; que la investigaci&#xF3;n fundamental de la neurociencia y neuroendocrino, as&#xED; como los esfuerzos de detecci&#xF3;n de drogas.

Niko G. Gubernator

Department of Chemistry

Columbia University

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Niko G. Gubernator

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Chemistry

Columbia University

Dopamine Release at Individual Presynaptic Terminals Visualized with FFNs

Department of Chemistry