Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

Neutrophil granulocytes are the most abundant group of leukocytes in the peripheral blood. As professional phagocytes, they engulf bacteria and kill them ...

Max Planck Institute for Infection Biology

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Primary hepatocytes represent a well-accepted in vitro cell culture system for studies of drug metabolism, enzyme induction, transplantation, viral hepatitis, and hepatocyte regeneration. Recently, a multicentric research program has been initiated to optimize and standardize new in vitro systems with hepatocytes. In this article, we discuss five of these in vitro systems: hepatocytes in suspension, perifusion culture systems, liver slices, co-culture systems of hepatocytes with intestinal bacteria, and 96-well plate bioreactors. From a technical point of view, freshly isolated or cryopreserved hepatocytes in suspension represent a readily available and easy-to-handle in vitro system that can be used to characterize the metabolism of test substances. Hepatocytes in suspension correctly predict interspecies differences in drug metabolism, which is demonstrated with pantoprazole and propafenone. A limitation of the hepatocyte suspensions is the length of the incubation period, which should not exceed 4hr. This incubation period is sufficiently long to determine the metabolic stability and to allow identification of the main metabolites of a test substance, but may be too short to allow generation of some minor, particularly phase II metabolites, that contribute less than 3% to total metabolism. To achieve longer incubation periods, hepatocyte culture systems or bioreactors are used. In this research program, two bioreactor systems have been optimized: the perifusion culture system and 96-well plate bioreactors. The perifusion culture system consists of collagen-coated slides allowing the continuous superfusion of a hepatocyte monolayer with culture medium as well as establishment of a constant atmosphere of 13% oxygen, 82% nitrogen, and 5% CO2. This system is stable for at least 2 weeks and guarantees a remarkable sensitivity to enzyme induction, even if weak inducers are tested. A particular advantage of this systemis that the same bioreactor can be perfused with different concentrations of a test substance in a sequential manner. The 96-well plate bioreactor runs 96 modules in parallel for pharmacokinetic testing under aerobic culture conditions. This system combines the advantages of a three-dimensional culture system in collagen gel, controlled oxygen supply, and constant culture medium conditions, with the possibility of high throughput and automatization. A newly developed co-culture system of hepatocytes with intestinal bacteria offers the possibility to study the metabolic interaction between liver and intestinal microflora. It consists of two chambers separated by a permeable polycarbonate membrane, where hepatocytes are cultured under aerobic and intestinal bacteria in anaerobic conditions. Test substances are added to the aerobic side to allow their initial metabolism by the hepatocytes, followed by the metabolism by intestinal bacteria at the anaerobic side. Precision-cut slices represent an alternative to isolated hepatocytes and have been used fo the investigation of hepatic metabolism, hepatotoxicity, and enzyme induction. A specific advantage of liver slices is the possibility to study toxic effects on hepatocytes that are mediated or modified by nonparenchymal cells (e.g., by cytokine release from Kupffer cells) because the physiological liver microarchitecture is maintained in cultured slices. For all these in vitro systems, a prevalidation has been performed using standard assays for phase I and II enzymes. Representative results with test substances and recommendations for application of these in vitro systems, as well as standard operation procedures are given.

New hepatocyte in vitro systems for drug metabolism: metabolic capacity and recommendations for application in basic research and drug development, standard operation procedures.

Les h&eacute;patocytes primaires repr&eacute;sentent un syst&egrave;me de culture cellulaire in vitro reconnus pour les &eacute;tudes de m&eacute;tabolisme des m&eacute;dicaments, l&#39;induction enzymatique, transplantation, h&eacute;patite virale et la r&eacute;g&eacute;n&eacute;ration h&eacute;patocytaire. R&eacute;cemment, on a entrepris un programme de recherche multicentrique afin d&#39;optimiser et de normaliser les nouveaux syst&egrave;mes in vitro avec des h&eacute;patocytes. Dans cet article, nous discutons de cinq de ces syst&egrave;mes in vitro : h&eacute;patocytes en suspension, les syst&egrave;mes de culture p&eacute;rifusion, tranches de foie, des syst&egrave;mes de co-culture d&#39;h&eacute;patocytes avec des bact&eacute;ries intestinales et bior&eacute;acteurs plaque &agrave; 96 puits. D&#39;un point de vue technique, les h&eacute;patocytes fra&icirc;chement isol&eacute;es ou cryoconserv&eacute;s en suspension repr&eacute;sentent un syst&egrave;me in vitro ais&eacute;ment accessible et facile &agrave; manipuler qui peut &ecirc;tre utilis&eacute; pour caract&eacute;riser le m&eacute;tabolisme des substances d&#39;essai. Les h&eacute;patocytes en suspension de pr&eacute;dire correctement les diff&eacute;rences intersp&eacute;cifiques dans le m&eacute;tabolisme des m&eacute;dicaments, qui est d&eacute;montr&eacute;e avec le pantoprazole et propaf&eacute;none. Une limitation des suspensions h&eacute;patocytaire est la longueur de la p&eacute;riode d&#39;incubation, qui ne doit pas d&eacute;passer 4 heures. Cette p&eacute;riode d&#39;incubation est assez longue pour d&eacute;terminer la stabilit&eacute; m&eacute;tabolique et &agrave; permettre d&#39;identifier les principaux m&eacute;tabolites de la substance d&#39;essai, mais peut &ecirc;tre trop courte pour permettre la g&eacute;n&eacute;ration de quelques l&eacute;g&egrave;res, particuli&egrave;rement les m&eacute;tabolites II, qui repr&eacute;sentent moins de 3 % au total m&eacute;tabolisme de phase. Pour obtenir de plus longues p&eacute;riodes d&#39;incubation, syst&egrave;mes de cultures d&#39;h&eacute;patocytes ou bior&eacute;acteurs sont utilis&eacute;s. Dans ce programme de recherche, les deux syst&egrave;mes de bior&eacute;acteur ont &eacute;t&eacute; optimis&eacute;s : le syst&egrave;me de culture de perfusion et des bior&eacute;acteurs de plaque &agrave; 96 puits. Le syst&egrave;me de culture de perfusion se compose de diapositives enduit de collag&egrave;ne permettant la superfusion continue d&#39;une monocouche d&#39;h&eacute;patocytes avec milieu de culture ainsi que la mise en place d&#39;une atmosph&egrave;re constante de 13 % d&#39;oxyg&egrave;ne, l&#39;azote de 82 % et 5 % de CO2. Ce syst&egrave;me est stable pendant au moins 2 semaines et garantit une sensibilit&eacute; remarquable &agrave; l&#39;induction enzymatique, m&ecirc;me si les inducteurs faibles sont mis &agrave; l&#39;essai. Un avantage particulier de cette systemis que le bior&eacute;acteur m&ecirc;me peut &ecirc;tre perfus&eacute; avec diff&eacute;rentes concentrations d&#39;une substance &agrave; tester de mani&egrave;re s&eacute;quentielle. Le bior&eacute;acteur de plaque &agrave; 96 puits fonctionne 96 modules en parall&egrave;le pour les essais pharmacocin&eacute;tiques dans des conditions de culture a&eacute;robie. Ce syst&egrave;me combine les avantages d&#39;un syst&egrave;me de culture en trois dimensions dans le gel de collag&egrave;ne, d&#39;oxyg&egrave;ne contr&ocirc;l&eacute; et des conditions de milieu de culture constante, avec la possibilit&eacute; de haut d&eacute;bit et d&#39;automatisation. Un syst&egrave;me de co-culture nouvellement mis au point des h&eacute;patocytes avec des bact&eacute;ries intestinales offre la possibilit&eacute; d&#39;&eacute;tudier l&#39;interaction m&eacute;tabolique entre le foie et la microflore intestinale. Il se compose de deux chambres s&eacute;par&eacute;es par une membrane perm&eacute;able en polycarbonate, o&ugrave; les h&eacute;patocytes sont cultiv&eacute;es dans des bact&eacute;ries a&eacute;robies et intestinales dans des conditions ana&eacute;robies. Les substances d&#39;essai sont ajout&eacute;s &agrave; la partie a&eacute;robie pour permettre leur m&eacute;tabolisme initial par les h&eacute;patocytes, suivis par le m&eacute;tabolisme par les bact&eacute;ries intestinales ana&eacute;robies ci-contre. Pr&eacute;cision de coupe tranches repr&eacute;sentent une alternative aux h&eacute;patocytes isol&eacute;s et ont &eacute;t&eacute; utilis&eacute;s fo l&#39;enqu&ecirc;te de l&#39;induction enzymatique, h&eacute;patotoxicit&eacute; et m&eacute;tabolisme h&eacute;patique. Un int&eacute;r&ecirc;t particulier des tranches de foie est la possibilit&eacute; d&#39;&eacute;tudier les effets toxiques sur les h&eacute;patocytes m&eacute;diation ou modifi&eacute;s par des cellules parenchymateuses (p. ex., par la lib&eacute;ration de cytokines par les cellules de Kupffer) car la microarchitecture h&eacute;patique physiologique est conserv&eacute;e dans des tranches. Pour tous ces syst&egrave;mes in vitro, une pr&eacute;validation a &eacute;t&eacute; r&eacute;alis&eacute;e en utilisant la norme pour la phase I et II enzymes. Sont donn&eacute;s les r&eacute;sultats repr&eacute;sentatifs des substances d&#39;essai et des recommandations pour l&#39;application de ces syst&egrave;mes in vitro, ainsi que des proc&eacute;dures de fonctionnement standard.

H&eacute;patocyte nouveaux syst&egrave;mes in vitro pour le m&eacute;tabolisme des m&eacute;dicaments : capacit&eacute; m&eacute;tabolique et conseils pour la pose en d&eacute;veloppement recherche et m&eacute;dicaments de base, des proc&eacute;dures de fonctionnement standard.

New Hepatozyten in vitro-Systeme f&#xFC;r Arzneimittel-Metabolismus: metabolische Kapazit&#xE4;t und Empfehlungen f&#xFC;r die Anwendung in Grundlagenforschung und Entwicklung von Medikamenten, Standard Operation Procedures.

Epatociti primari rappresentano un sistema di cultura cellulare in vitro ben accettato per gli studi di metabolismo del farmaco, induzione enzimatica, trapianto, epatite virale e rigenerazione degli epatociti. Recentemente, ha avviato un programma di ricerca multicentrica per ottimizzare e standardizzare i nuovi sistemi in vitro con epatociti. In questo articolo, parleremo di cinque di questi sistemi in vitro: epatociti in sospensione, sistemi di coltura di fluorescenza, fette di fegato, sistemi di co-culture di epatociti con batteri intestinali e bioreattori piastra 96 pozzetti. Da un punto di vista tecnico, appena isolati o crioconservati epatociti in sospensione rappresentano un sistema in vitro prontamente disponibile e facile da gestire che pu&ograve; essere utilizzato per caratterizzare il metabolismo delle sostanze da testare. Epatociti in sospensione predicono correttamente interspecie differenze nel metabolismo del farmaco, che &egrave; dimostrato con pantoprazolo e propafenone. Una limitazione delle sospensioni degli epatociti &egrave; la lunghezza del periodo di incubazione, che non deve superare 4 ore. Questo periodo di incubazione &egrave; sufficientemente lungo per determinare la stabilit&agrave; metabolica e per consentire l&#39;identificazione dei principali metaboliti della sostanza in esame, ma potrebbe essere troppo breve per consentire la generazione di alcuni minori, specialmente fase metaboliti II, che contribuiscono meno del 3% al metabolismo totale. Per ottenere lunghi periodi di incubazione, vengono utilizzati sistemi di coltura degli epatociti o bioreattori. In questo programma di ricerca, sono stati ottimizzati i due sistemi di bioreattore: il sistema di coltura di fluorescenza e bioreattori piastra 96 pozzetti. Il sistema cultura fluorescenza &egrave; costituito da collagene rivestito diapositive permettendo cos&igrave; il continuo superfusion di monostrato degli epatociti con terreno di coltura come istituzione di una costante atmosfera di ossigeno del 13%, 82% di azoto e 5% CO2. Questo sistema &egrave; stabile per almeno 2 settimane e garantisce una notevole sensibilit&agrave; per induzione enzimatica, anche se deboli induttori sono testati. Un particolare vantaggio di questo sistema che il bioreattore stesso pu&ograve; essere perfuso con diverse concentrazioni di una sostanza in esame in modo sequenziale. Il bioreattore piastra 96 pozzetti corre 96 moduli in parallelo per test di farmacocinetica in condizioni aerobiche cultura. Questo sistema unisce i vantaggi di un sistema di coltura tridimensionale in gel di collagene, l&#39;apporto di ossigeno controllato e costante mezzo di coltura condizioni, con la possibilit&agrave; di high throughput e automatizzazione. Un sistema di nuova concezione co-culture di epatociti con batteri intestinali offre la possibilit&agrave; di studiare l&#39;interazione metabolica tra fegato e microflora intestinale. Si compone di due camere separate da una membrana permeabile in policarbonato, dove gli epatociti sono coltivati sotto i batteri aerobi e intestinali in condizioni anaerobiche. Sostanze in esame vengono aggiunti al lato aerobico per consentire loro metabolismo iniziale dagli epatociti, seguiti dal metabolismo da batteri intestinali al lato anaerobico. Taglio di precisione fette rappresentano un&#39;alternativa di epatociti isolati e sono stati utilizzati fo l&#39;inchiesta di induzione enzimatica, epatotossicit&agrave; e metabolismo epatico. Un vantaggio specifico di fette di fegato &egrave; la possibilit&agrave; di studiare gli effetti tossici su epatociti che sono mediati o modificati da nonparenchymal cellule (per esempio, dal rilascio di citochine dalle cellule di Kupffer) perch&eacute; la microarchitettura fegata fisiologica &egrave; mantenuta in fette colte. Per tutti questi sistemi in vitro, un prevalidation &egrave; stata eseguita utilizzando dosaggi standard per la fase I e II enzimi. Sono dato risultati rappresentativi con sostanze da testare e raccomandazioni per l&#39;applicazione di questi sistemi in vitro, cos&igrave; come le procedure standard di funzionamento.

Nuovo degli epatociti in vitro sistemi per il metabolismo del farmaco: capacit&agrave; metabolica e raccomandazioni per l&#39;applicazione in droga e ricerca sviluppo di base, procedure operative standard.

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in vitro &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3092; prevalidation &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x6A19;&#x6E96;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x76F8;&#x7528;&#x3057;&#x3001;II &#x9175;&#x7D20;&#x5B9F;&#x884C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A19;&#x6E96;&#x64CD;&#x4F5C;&#x624B;&#x9806;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E; in vitro &#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x63A8;&#x5968;&#x4E8B;&#x9805;&#x3068;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x7269;&#x8CEA;&#x306E;&#x4EE3;&#x8868;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x304C;&#x4E0E;&#x3048;&#x3089;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x7CFB;&#x85AC;&#x7269;&#x4EE3;&#x8B1D;: &#x4EE3;&#x8B1D;&#x80FD;&#x529B;&#x3068;&#x57FA;&#x790E;&#x7814;&#x7A76;&#x3084;&#x6CBB;&#x7642;&#x85AC;&#x958B;&#x767A;&#x3001;&#x6A19;&#x6E96;&#x64CD;&#x4F5C;&#x624B;&#x9806;&#x3067;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528;&#x306E;&#x63A8;&#x5968;&#x4E8B;&#x9805;&#x3002;

&#xAE30;&#xBCF8; hepatocytes &#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0AC;, &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;, &#xC774;&#xC2DD;, &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC04;&#xC5FC; &#xBC0F; hepatocyte &#xC911;&#xC0DD;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD1B5;&#xC0C1;&#xC801;&#xC778;&#xB41C; &#xCCB4; &#xC678; &#xC138;&#xD3EC; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC;, multicentric &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xBC0F; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; hepatocytes &#xD45C;&#xC900;&#xD654; &#xC2DC;&#xC791; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; 5 &#xC124;&#xBA85;: hepatocytes&#xC5D0; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;, perifusion &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;, &#xAC04; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4;, &#xCC3D; &#xC790; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; bioreactors hepatocytes&#xC758; co-culture &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;. &#xAE30;&#xC220;&#xC801;&#xC778; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;&#xC5D0; &#xAC13; &#xC808;&#xC5F0; &#xB610;&#xB294; cryopreserved hepatocytes &#xC2DC;&#xD5D8; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xB300;&#xC0AC; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC27D;&#xAC8C; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC73C;&#xBA70; &#xC26C;&#xC6B4; &#xD578;&#xB4E4; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC11C; &#xC2A4; &#xD39C; &#xC158;&#xC5D0; hepatocytes &#xC62C;&#xBC14;&#xB974;&#xAC8C; &#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0AC;, pantoprazole &#xBC0F; propafenone&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xC2DC;&#xC5F0; interspecies &#xCC28;&#xC774; &#xC608;&#xCE21;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB2E4;. Hepatocyte &#xC815;&#xC9C0;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;&#xB294; 4 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC744; &#xCD08;&#xACFC; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC544;&#xC57C; &#xD558;&#xB294; &#xC778;&#xD050;&#xBCA0;&#xC774;&#xC158; &#xAE30;&#xAC04;. &#xC774; &#xC7A0;&#xBCF5;&#xAE30; &#xB300;&#xC0AC; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC778; &#xD558; &#xACE0; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC758; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xCDA9;&#xBD84;&#xD788; &#xAE34; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xC77C;&#xBD80; &#xBBF8;&#xC131;&#xB144;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xC131;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D;, &#xD2B9;&#xD788; &#xC0C1; &#xCD1D; &#xB300;&#xC0AC;&#xB97C; 3%&#xAC00; &#xD558; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558;&#xB294; 2 &#xCC28; &#xB300;&#xC0AC; &#xC0B0;&#xBB3C;&#xC744; &#xB108;&#xBB34; &#xC9E7;&#xC740; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB354; &#xC774;&#xC0C1; &#xBD80; &#xD654; &#xAE30;&#xAC04;&#xC744; &#xB2EC;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; hepatocyte &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC774; &#xB098; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xBC18;&#xC751; &#xAE30; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; mbr &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;: perifusion &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xACFC; 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; bioreactors. &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4; hepatocyte &#xB2E8;&#xCE35;&#xC758; &#xC5F0;&#xC18D; superfusion &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; 13% &#xC0B0;&#xC18C;, 82% &#xC9C8;&#xC18C; 5 %c o 2&#xC758; &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBD84;&#xC704;&#xAE30;&#xC758; &#xC124;&#xB9BD;&#xC744; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xCF54;&#xD305; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xB4DC; perifusion &#xBB38;&#xD654; &#xCCB4;&#xACC4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD558;&#xC5EC; &#xC774;&#xB8E8;&#xC5B4;&#xC838; &#xC788;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C; 2 &#xC8FC; &#xB3D9;&#xC548; &#xC548;&#xC815; &#xC774;&#xBA70; &#xC57D;&#xD55C; inducers&#xB97C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xD558;&#xB294; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xC5D0; &#xB180;&#xB77C;&#xC6B4; &#xAC10;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xC815; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC774;&#xC774; systemis &#xAC19;&#xC740; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xC21C;&#xCC28;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xBB3C;&#xC9C8;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xB18D;&#xB3C4; &#xD568;&#xAED8; &#xB07C;&#xC5B9;&#xB294;&#xB2E4; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. 96-&#xC798; &#xD50C;&#xB808;&#xC774;&#xD2B8; bioreactor pharmacokinetic &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xBB38;&#xD654; &#xC870;&#xAC74; &#xD558;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xB97C; &#xC704;&#xD574; &#xBCD1;&#xB82C;&#xB85C; 96 &#xBAA8;&#xB4C8;&#xC744; &#xC2E4;&#xD589; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC98;&#xB9AC;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xC790;&#xB3D9;&#xD654; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;, &#xC81C;&#xC5B4; &#xC0B0;&#xC18C; &#xACF5;&#xAE09;, &#xC9C0;&#xC18D;&#xC801;&#xC778; &#xBC30;&#xC591; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0; 3 &#xCC28;&#xC6D0; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xACB0;&#xD569;. &#xC7A5; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC640; hepatocytes&#xC758; &#xC0C8;&#xB86D;&#xAC8C; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xB41C; &#xB41C; co-culture &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xAC04; &#xC7A5;&#xC758; microflora &#xB300;&#xC0AC; &#xC0C1;&#xD638;&#xC791;&#xC6A9; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xCC54;&#xBC84; hepatocytes &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45;&#xACFC; &#xC7A5;&#xB0B4; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAD50;&#xC591;&#xC740; &#xD22C;&#xACFC;&#xC131; &#xD3F4; &#xB9AC;&#xCE74; &#xBCF4; &#xB124;&#xC774;&#xD2B8; &#xB9C9;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD6C;&#xBD84; &#xAD6C;&#xC131; &#xB418;&#xC5B4;&#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB4A4;&#xC5D0; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC7A5;&#xB0B4; &#xC138;&#xADE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB300;&#xC0AC; hepatocytes&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xCD08;&#xAE30; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xB300;&#xC0AC; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xC5D0;&#xC5B4;&#xB85C;&#xBE45; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0; &#xCD94;&#xAC00; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC815;&#xBC00; &#xCEF7; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4; &#xACA9;&#xB9AC; hepatocytes &#xB300;&#xC2E0; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4; fo &#xAC04;&#xC7A5; &#xB300;&#xC0AC;, &#xC99D;&#xC0C1;, &#xBC0F; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xC758; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC04; &#xC2AC;&#xB77C;&#xC774;&#xC2A4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC7A5;&#xC810;&#xC740; hepatocytes &#xC911;&#xC7AC; &#xB418;&#xAC70;&#xB098; &#xC0DD;&#xB9AC; &#xC801; &#xAC04; &#xB9C8;&#xC774;&#xD06C;&#xB85C;&#xC544;&#xD0A4;&#xD14D;&#xCC98; &#xAD50;&#xC591;&#xB41C; &#xBD84;&#xD560; &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &#xB418;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; (&#xC608;&#xB97C; &#xB4E4;&#xC5B4;, Kupffer &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0AC;&#xC774;&#xD1A0;&#xCE74;&#xC778; &#xC790;&#xB8CC;)&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; nonparenchymal &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC218;&#xC815;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB3C5;&#xC131; &#xD6A8;&#xACFC; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xCCB4; &#xC678; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; prevalidation I &#xBC0F; II &#xD6A8;&#xC18C; &#xC704;&#xC0C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD45C;&#xC900; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xC218;&#xD589; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB300;&#xD45C;&#xC801;&#xC778; &#xACB0;&#xACFC; &#xC2DC;&#xD5D8; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xD45C;&#xC900; &#xC791;&#xC5C5; &#xC808;&#xCC28; &#xBFD0; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC758; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD8C;&#xC7A5; &#xC0AC;&#xD56D;&#xC73C;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC57D;&#xBB3C; &#xB300;&#xC0AC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xAD00; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; hepatocyte: &#xB300;&#xC0AC; &#xC6A9;&#xB7C9; &#xBC0F; &#xAE30;&#xBCF8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xC758;&#xC57D;&#xD488; &#xAC1C;&#xBC1C;, &#xD45C;&#xC900; &#xC791;&#xC5C5; &#xC808;&#xCC28;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xAD8C;&#xC7A5; &#xC0AC;&#xD56D;.

Hepatocitos primarios representan un sistema de cultivo de c&eacute;lulas in vitro bien aceptado para estudios de metabolismo de la droga, la inducci&oacute;n enzim&aacute;tica, trasplante, hepatitis viral y regeneraci&oacute;n del hepatocito. Recientemente, se ha iniciado un programa de investigaci&oacute;n multic&eacute;ntrica para optimizar y estandarizar los nuevos sistemas in vitro con hepatocitos. En este art&iacute;culo, discutimos cinco de estos sistemas in vitro: hepatocitos en suspensi&oacute;n, sistemas de cultura cultivadas, rebanadas de h&iacute;gado, cocultivo de hepatocitos con bacterias intestinales y placa de 96 pocillos Biorreactores. Desde un punto de vista t&eacute;cnico, hepatocitos reci&eacute;n aislados o criopreservados en suspensi&oacute;n representan un sistema in vitro f&aacute;cilmente disponible y f&aacute;cil de manejar que puede utilizarse para caracterizar el metabolismo de las sustancias de ensayo. Hepatocitos en suspensi&oacute;n predicen correctamente las diferencias entre las especies en el metabolismo de la droga, que se demuestra con pantoprazol y propafenona. Una limitaci&oacute;n de las suspensiones del hepatocito es la duraci&oacute;n de la incubaci&oacute;n, que no debe exceder de 4 horas. Este per&iacute;odo de incubaci&oacute;n es suficientemente largo para determinar la estabilidad metab&oacute;lica y para permitir la identificaci&oacute;n de los metabolitos principales de una sustancia, pero puede ser tambi&eacute;n permite la generaci&oacute;n de algunos menores, particularmente la fase metabolitos II, que contribuyen menos del 3% a metabolismo total. Para lograr m&aacute;s largos per&iacute;odos de incubaci&oacute;n, se utilizan sistemas de cultivo de hepatocitos o Biorreactores. En este programa de investigaci&oacute;n, se han optimizado los dos sistemas de biorreactor: el sistema de cultivo cultivadas y Biorreactores de placa de 96 pocillos. El sistema de cultivo cultivadas consiste en portaobjetos recubiertos con col&aacute;geno permitiendo la continua superfusion de una monocapa de hepatocitos con medio de cultivo, as&iacute; como establecimiento de un ambiente constante de 13% de ox&iacute;geno, nitr&oacute;geno de 82% y 5% de CO2. Este sistema es estable durante al menos 2 semanas y garantiza una notable sensibilidad a la inducci&oacute;n enzim&aacute;tica, incluso si se prueban los inductores d&eacute;biles. Una ventaja particular de este systemis del que el mismo biorreactor puede ser inundado con diferentes concentraciones de una sustancia en forma secuencial. El biorreactor de placa de 96 pocillos funciona 96 m&oacute;dulos en paralelo para pruebas farmacocin&eacute;ticas bajo condiciones de cultivo aer&oacute;bico. Este sistema combina las ventajas de un sistema de cultivo tridimensional en gel de col&aacute;geno, suministro de ox&iacute;geno controlados y las condiciones del medio de cultivo constante, con la posibilidad de alto rendimiento y automatizaci&oacute;n. Un sistema desarrollado recientemente cocultivo de hepatocitos con bacterias intestinales ofrece la posibilidad de estudiar la interacci&oacute;n metab&oacute;lica entre el h&iacute;gado y la microflora intestinal. Consta de dos c&aacute;maras separadas por una membrana permeable de policarbonato, donde se cultivan los hepatocitos en bacterias aerobias e intestinales en condiciones anaer&oacute;bicas. Las sustancias de ensayo se a&ntilde;aden al lado aer&oacute;bico para permitir su metabolismo inicial por los hepatocitos, seguidos por el metabolismo por las bacterias intestinales en el lado anaerobio. Precisi&oacute;n de corte rebanadas representan una alternativa a los hepatocitos aislados y han utilizado la fo la investigaci&oacute;n de inducci&oacute;n enzim&aacute;tica, hepatotoxicidad y metabolismo hep&aacute;tica. Una ventaja espec&iacute;fica de rebanadas de h&iacute;gado es la posibilidad de estudiar los efectos t&oacute;xicos en hepatocitos mediados o modificados por nonparenchymal las c&eacute;lulas (por ejemplo, por la liberaci&oacute;n de citoquinas de las c&eacute;lulas de Kupffer) porque la microarquitectura fisiol&oacute;gica del h&iacute;gado se mantiene en rebanadas cultivadas. Para todos estos sistemas in vitro, se ha realizado un prevalidation usando an&aacute;lisis est&aacute;ndar para la fase I y II enzimas. Se dan resultados representativos con sustancias de ensayo y recomendaciones para el uso de estos sistemas in vitro, as&iacute; como los procedimientos de operaci&oacute;n est&aacute;ndar.

Nuevos hepatocitos en sistemas in vitro para el metabolismo de la droga: capacidad metab&oacute;lica y recomendaciones para su aplicaci&oacute;n en el desarrollo b&aacute;sico de la investigaci&oacute;n y drogas, procedimientos de operaci&oacute;n est&aacute;ndar.

&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#x3001; kappa &#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;&#x662F;&#x90FD;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8868;&#x793A;&#x5728;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x810F;&#x548C;&#x53C2;&#x52A0;&#x5E74;&#x9F84;&#x548C;&#x5E94;&#x6FC0;&#x76F8;&#x5173;&#x6539;&#x52A8;&#x7684;&#x5FC3;&#x810F;&#x529F;&#x80FD;&#x3002;&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x6FC0;&#x52A8;&#x5242;&#x8FDB;&#x884C;&#x8C03;&#x89E3;&#x5FC3;&#x810F;&#x7F3A;&#x8840;&#x9884;&#x5904;&#x7406;&#x901A;&#x8FC7;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5185; Ca(2) (+) &#x6C34;&#x5E73;&#x3001; &#x5F00;&#x653E;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; K(ATP) &#x901A;&#x9053;&#x548C; PKC &#x6FC0;&#x6D3B;&#x54CD;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7814;&#x7A76;&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B; kappa &#x548C;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x5176;&#x914D;&#x4F53;&#x524D;&#x4F53;&#xFF0C;&#x8C03; (POMC) &#x548C;&#x5561;&#x80BD;&#x539F; A &#x5F6D; (&#x5361;) &#x60A3;&#x8005;&#x7AA6;&#x6027;&#x5FC3;&#x5F8B; (SR) &#x6216;&#x6301;&#x7EED;&#x6027;&#x5FC3;&#x623F;&#x98A4;&#x52A8; (&#x623F;&#x98A4;) &#x4E2D;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5FC3;&#x623F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x4E2D;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x4E5F;&#x88AB;&#x6BD4;&#x8F83;&#x4E24;&#x7EC4;&#x4E4B;&#x95F4;&#x3002;&#x5FC3;&#x623F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x56DB;&#x540D;&#x75C5;&#x4EBA;&#x4E2D;&#x81EA;&#x52A8;&#x5BF9;&#x7126;&#x548C;&#x56DB;&#x540D;&#x75C5;&#x4EBA;&#x5728;&#x9AD8;&#x7EA7;&#x7535;&#x955C;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x5FC3;&#x623F;&#x7684; mRNA &#x524D;&#x4F53;&#x963F;&#x7247;&#x80BD;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x7ADE;&#x4E89;&#x548C;&#x5B9E;&#x65F6; RT-PCR AF 16 &#x60A3;&#x8005;&#x548C; 16 &#x4F8B;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53; sr&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x5F6D;&#x5361; (SR&#xFF1A; + /-33%vs AF 100&#xFF1A; 33 + /-21%&#xFF1B;P &lt; 0.05) &#x548C; kappa &#x53D7;&#x4F53; mRNA &#x91D1;&#x989D; (AF&#xFF1A; + /-20%vs SR 78: 100 + /-11%&#xFF1B;P &lt; 0.05&#xFF09; &#x5747;&#x88AB;&#x4E0B;&#x8DCC;&#x4E2D;&#x81EA;&#x52A8;&#x5BF9;&#x7126;&#x6BD4; sr&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x5728; AF &#x51CF;&#x5C11; POMC &#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x6C34;&#x5E73; (SR&#xFF1A; + /-54%vs AF 100&#xFF1A; 37 + /-26%&#xFF1B;P &lt; 0.05&#xFF09;&#xFF0C;&#x800C;&#x76F8;&#x5E94;&#x7684;&#x4E09;&#x89D2;&#x6D32;-&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x662F;&#x4E0D;&#x53D8; (AF&#xFF1A; 102 + /-34%vs 100 + /-44%&#xFF09;&#x3002;&#x5728;&#x6301;&#x7EED;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x88AB;&#x63D0;&#x9AD8;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x7684;&#x5927;&#x5C0F;&#x3002;&#x6301;&#x7EED;&#x6027;&#x623F;&#x98A4;&#x662F;&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;/&#x914D;&#x4F53;&#x8868;&#x8FBE;&#x4E0B;&#x8C03;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x8FD9;&#x8868;&#x660E;&#x5728; fibrillating &#x5FC3;&#x623F;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5185;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x5BFC;&#x81F4;&#x5FC3;&#x623F;&#x808C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x5FAE;&#x7ED3;&#x6784;&#x91CD;&#x5851;&#x7684;&#x9632;&#x62A4;&#x80FD;&#x529B;&#x7684;&#x4E27;&#x5931;&#x3002;

&#x963F;&#x7247;&#x53D7;&#x4F53;&#x4E9A;&#x578B;&#x548C;&#x5176;&#x914D;&#x4F53;&#x5728;&#x6210;&#x7EA4;&#x4EBA;&#x5FC3;&#x623F;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x5F0F;&#x3002;

The delta- and kappa-receptor subtypes are both abundantly expressed in the human heart and participate in age- and stress-related alterations of cardiac function. Opioid receptor agonists mediate cardioprotection in response to ischemic preconditioning via increased intracellular Ca(2) (+) levels, opening mitochondrial K(ATP) channels, and PKC activation. We studied the expression of opioid receptor subtypes kappa and delta, and of their ligand precursors, proopiomelanocortin (POMC) and preproenkephalin A (PENKA), in human atrial tissue of patients in sinus rhythm (SR), or persistent atrial fibrillation (AF). The mitochondrial size was also compared between the two groups. The atrial mRNA expression of opioid peptide precursors and receptors was assessed by competitive and real-time RT-PCR in 16 patients in AF and 16 patients in SR. Mitochondria were analyzed in the atrial tissue by electron microscopy in four patients in AF and four patients in SR. Both PENKA (SR: 100 +/- 33% vs AF: 33 +/- 21%; P < 0.05) and kappa-receptor mRNA amounts (AF: 78 +/- 20% vs SR: 100 +/- 11%; P < 0.05) were both decreased in AF in comparison to SR. In addition, POMC mRNA levels were decreased in AF (SR: 100 +/- 54% vs AF: 37 +/- 26%; P < 0.05), whereas the expression of the corresponding delta-opioid receptor was unchanged (AF: 102 +/- 34% vs 100 +/- 44%). Mitochondrial size was increased during persistent AF. Persistent AF is associated with the down-regulation of the opioid receptor/ligand expression. This suggests a loss of protective capacity in the fibrillating atrial tissue, resulting in an ultrastructural remodeling of atrial myocytes.

Expression of opioid receptor subtypes and their ligands in fibrillating human atria.

Les sous-types de r&eacute;cepteurs kappa et delta sont toutes deux abondamment exprim&eacute; dans l&#39;homme de coeur et participent &agrave; des alt&eacute;rations de la fonction cardiaque - et contraintes li&eacute;es &agrave; l&#39;&acirc;ge. Agonistes des r&eacute;cepteurs opio&iuml;des m&eacute;dient cardioprotection en r&eacute;ponse &agrave; un pr&eacute;conditionnement isch&eacute;mique via une augmentation intracellulaire de Ca(2) (+), ouverture mitochondrial K(ATP) canaux et activation de la PKC. Nous avons &eacute;tudi&eacute; l&#39;expression de delta et kappa de sous-types de r&eacute;cepteurs opio&iuml;des et de leurs pr&eacute;curseurs de ligand, proopiom&eacute;lanocortine (POMC) et pr&eacute;proenk&eacute;phaline A (Manon), dans le tissu auriculaire humain des patients en rythme sinusal (SR) ou persistante fibrillation auriculaire (FA). La taille mitochondriale a &eacute;t&eacute; &eacute;galement compar&eacute;e entre les deux groupes. L&#39;ARNm auriculaire expression des r&eacute;cepteurs et des pr&eacute;curseurs de peptide opio&iuml;de a &eacute;t&eacute; &eacute;valu&eacute;e par comp&eacute;titive et en temps r&eacute;el RT-PCR dans 16 patients AF et 16 patients dans les mitochondries SR. ont &eacute;t&eacute; analys&eacute;s dans le tissu auriculaire par microscopie &eacute;lectronique de quatre patients en AF et quatre patients en SR. Les deux PENKA (SR: 100 +/-33 % vs AF: 33 &plusmn; 21 % ; P &lt; 0,05) et les montants des ARNm des r&eacute;cepteurs kappa (AF: 78 +/-20 % vs SR: 100 +/-11 % ; P &lt; 0,05) ont tous deux diminu&eacute;es chez AF en comparaison de la SR. En outre, les niveaux d&#39;ARNm de la POMC ont diminu&eacute; chez AF (SR: 100 +/-54 % vs AF: 37 &plusmn; 26 % ; P &lt; 0.05), alors que l&#39;expression du r&eacute;cepteur opio&iuml;de delta correspondant n&#39;a pas chang&eacute;e (AF: 102 +/-34 % vs 100 +/-44 %). Taille mitochondriale a &eacute;t&eacute; augment&eacute; au cours de l&#39;AF persistant. AF persistant est associ&eacute; &agrave; la r&eacute;gulation de l&#39;expression des r&eacute;cepteurs opio&iuml;des/ligand. Ceci sugg&egrave;re une perte de capacit&eacute; de protection dans le tissu atrial fibrillation, ce qui entra&icirc;ne un remodelage ultrastructurale des myocytes auriculaires.

Expression des sous-types de r&eacute;cepteurs opio&iuml;des et leurs ligands dans fibrillating oreillettes humaines.

Die Expression von Opioid-Rezeptor-Subtypen und ihre Liganden in Fibrillieren menschlichen Vorh&#xF6;fen.

I sottotipi di delta e kappa recettori sono entrambi abbondantemente espresso nell&#39;essere umano il cuore e partecipare alle alterazioni senili e lo stress della funzione cardiaca. Agonisti dei recettori oppioidi mediano cardioprotezione in risposta al precondizionamento ischemico via aumentati livelli di Ca(2) (+) intracellulari, apertura mitocondriale K(ATP) canali e attivazione PKC. Abbiamo studiato l&#39;espressione di delta e kappa sottotipi dei recettori oppioidi e dei loro precursori del ligando, Proopiomelanocortina (POMC) e preproenkephalin A (PENKA), in tessuto atriale umano dei pazienti in ritmo sinusale (SR), o fibrillazione atriale persistente (AF). La dimensione mitocondriale &egrave; stato anche confrontata tra i due gruppi. il mRNA atriale espressione di precursori di peptidi oppioidi e di recettori &egrave; stata valutata mediante RT-PCR in tempo reale e competitivo in 16 pazienti in AF e 16 pazienti nei mitocondri Sr. sono stati analizzati nel tessuto atriale di microscopia elettronica in quattro pazienti in AF e quattro pazienti in SR. Entrambi PENKA (SR: 100 + 33% vs AF: 33 + 21%; P &lt; 0,05) e quantit&agrave; di mRNA del recettore kappa (AF: 78 + /-20% vs SR: 100 + 11%; P &lt; 0.05) sono stati entrambi diminuiti in AF rispetto a Sr. Inoltre, livelli di mRNA POMC sono diminuiti in AF (SR: 100 + 54% vs AF: 37 + 26%; P &lt; 0.05), mentre l&#39;espressione del recettore delta-oppioidi corrispondente era invariato (AF: 102 + /-34% vs 100 + 44%). Dimensione mitocondriale &egrave; stato aumentato durante AF persistente. AF persistente &egrave; associato con la down-regulation dell&#39;espressione dei recettori oppioidi/ligando. Questo suggerisce una perdita di capacit&agrave; protettiva del tessuto atriale fibrillating, risultante in un rimodellamento ultrastrutturale dei miociti atriali.

Espressione dei sottotipi dei recettori oppioidi e loro ligandi in fibrillating atri umane.

&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x3068;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x4E21;&#x65B9;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x3067;&#x4EBA;&#x9593;&#x3092;&#x8868;&#x73FE;&#x5FC3;&#x3057;&#x3001;&#x5FDC;&#x529B;&#x52A0;&#x5FC3;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5909;&#x5316;&#x3092;&#x53C2;&#x52A0;&#x306B;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30A2;&#x30B4;&#x30CB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185; Ca(2) (+) &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x5897;&#x52A0;&#x3001;&#x30AA;&#x30FC;&#x30D7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0; &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30D9;&#x30FC;&#x30BF;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30CD;&#x30EB;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073; PKC &#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x865A;&#x8840;&#x30D7;&#x30EC;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30B7;&#x30E7;&#x30CB;&#x30F3;&#x30B0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x4EF2;&#x4ECB;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7; &#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;&#x3068;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x30D7;&#x30ED;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30E1;&#x30E9;&#x30CE;&#x30B3;&#x30EB;&#x30C1;&#x30F3; POMC &#x304A;&#x3088;&#x3073; preproenkephalin A (PENKA) &#x6D1E;&#x8ABF;&#x5F8B; (SR) &#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D30;&#x52D5; (AF) &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x30D2;&#x30C8;&#x5FC3;&#x623F;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x3092;&#x691C;&#x8A0E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;2 &#x3064;&#x306E;&#x30B0;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x9593;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x30DA;&#x30D7;&#x30C1;&#x30C9;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x7269;&#x8CEA;&#x3068;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x304C;&#x7AF6;&#x4E89;&#x529B;&#x3068;&#x30EA;&#x30A2;&#x30EB;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0; rt-pcr AF &#x3067; 16 &#x4F8B;&#x3068; 16 &#x60A3;&#x8005;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2; &#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x3067;&#x67FB;&#x5B9A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5FC3;&#x623F; mRNA &#x5FC3;&#x623F;&#x7D44;&#x7E54;&#x3067; 4 &#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x3067; AF &#x3068;&#x30B7;&#x30CB;&#x30A2;&#x306E;&#x56DB;&#x4EBA;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E; PENKA &#xFF08;SR: 100 + 33 &#xFF05; &#x5BFE; AF/&#xFF1A; 33 &plusmn; 21%;P &lt; 0.05) &#x3068;&#x30AB;&#x30C3;&#x30D1;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53; mRNA &#x91CF; &#xFF08;AF: &plusmn; 20 &#xFF05; &#x5BFE; SR 78:100 &plusmn; 11%;P &lt; 0.05) &#x4E21;&#x65B9; af &#x30B7;&#x30CB;&#x30A2;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x4F4E;&#x4E0B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;POMC mRNA &#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x306F; AF &#x3067;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3057;&#x305F; (SR: 54 &#xFF05; &#x5BFE; AF &#x306E; +/-100:37 +/-26%;P &lt; 0.05) &#x5BFE;&#x5FDC;&#x3059;&#x308B;&#x30C7;&#x30EB;&#x30BF;-&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x5909;&#x5316;&#x304C;&#x306A;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057; &#xFF08;AF: 102 34 &#xFF05; &#x5BFE; 100 +/-44% &#x306E; +/-)&#x3002;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x306F;&#x3001;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A; AF &#x4E2D;&#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6C38;&#x7D9A;&#x7684;&#x306A; AF&#x3001;&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;/&#x30EA;&#x30AC;&#x30F3;&#x30C9;&#x767A;&#x73FE;&#x306E;&#x30C0;&#x30A6;&#x30F3;&#x30EC;&#x30AE;&#x30E5;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x4ED8;&#x3051;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x306F;&#x3001;&#x9632;&#x8B77;&#x80FD;&#x529B;&#x306F;&#x5FC3;&#x623F;&#x7B4B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x96FB;&#x9855;&#x7684;&#x6539;&#x9020;&#x306B;&#x8D77;&#x56E0;&#x9001;&#x308C;&#x305A;&#x5FC3;&#x623F;&#x306E;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30AA;&#x30D4;&#x30AA;&#x30A4;&#x30C9;&#x53D7;&#x5BB9;&#x4F53;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x3068;&#x30D2;&#x30C8;&#x5FC3;&#x623F;&#x5FC3;&#x529B;&#x306E; ligands &#x306E;&#x5F0F;&#x3002;

&#xB378;&#xD0C0; &#xC218;&#xC6A9; &#xD558; &#xACE0; &#xCE74;&#xD30C; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704; &#xC885;&#xB958;&#xB294; &#xBAA8;&#xB450; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xD45C;&#xD604; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xB9C8;&#xC74C;&#xACFC; &#xC2EC;&#xC7A5; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758;&#xC758; &#xB098;&#xC774; &#xBC0F; &#xC2A4;&#xD2B8;&#xB808;&#xC2A4; &#xAD00;&#xB828; &#xBCC0;&#xACBD;&#xC5D0; &#xCC38;&#xC5EC;. Opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; agonists &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; Ca(2) (+) &#xB808;&#xBCA8;&#xC744; &#xC99D;&#xAC00;, &#xC624;&#xD504;&#xB2DD; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; K(ATP) &#xCC44;&#xB110; &#xBC0F; PKC &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xD5C8; &#xD608; &#xC131; &#xAC70;&#xCE58;&#xAE30;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5; cardioprotection &#xC911;&#xC7AC;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xACF5;&#xBD80; opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704; &#xCE74;&#xD30C;&#xC640; &#xB378;&#xD0C0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xB2E8;&#xACC4;&#xC778; proopiomelanocortin (POMC) &#xBC0F; &#xBD80; &#xBE44; &#xB3D9; &#xB9AC;&#xB4EC; (SR), &#xB610;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C; &#xC2EC; &#xBC29; &#xC138; &#xB3D9; (AF) &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC2EC; &#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; A (PENKA) preproenkephalin&#xC758; &#xC2DD;&#xC744; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xD06C;&#xAE30; &#xB610;&#xD55C; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9; &#xAC04;&#xC758; &#xBE44;&#xAD50; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC2DD; &#xC774;&#xB4DC; &#xD3A9;&#xD0C0;&#xC774;&#xB4DC; &#xC720;&#xB3C4;&#xCCB4; &#xBC0F; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xACBD;&#xC7C1;&#xC801;&#xC774; &#xACE0; &#xC2E4;&#xC2DC;&#xAC04; RT-PCR &#xC5B4; 16 &#xD658;&#xC790;&#xC640; &#xBBF8;&#xC2A4;&#xD130; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544;&#xC5D0;&#xC11C; 16 &#xD658;&#xC790;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xC2EC; mRNA &#xC2EC; &#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; AF 4 &#xD658;&#xC790;&#xC640; &#xC2DC; &#xB2C8; &#xC5B4; 4 &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xBD84;&#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xB450; PENKA (SR: 33% vs AF + 100: &plusmn; 21%; 33 P &lt; 0.05)&#xC640; &#xCE74;&#xD30C;-&#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; mRNA &#xAE08;&#xC561; (AF: 20% vs SR + 78: &plusmn; 11%; 100 P &lt; 0.05) &#xB458; &#xB2E4; &#xC5B4; &#xBBF8;&#xC2A4;&#xD130;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; &#xB610;&#xD55C;, POMC mRNA &#xC218;&#xC900;&#xC758; AF&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC18C; &#xD588;&#xB2E4; (SR: 54% vs AF + 100: 37 &plusmn; 26%; P &lt; 0.05), &#xD574;&#xB2F9; &#xB378;&#xD0C0; opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;&#xC758; &#xD45C;&#xD604; &#xD588;&#xB2E4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; (AF: 34% &#xB300; 44% + 100 + 102). &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC; &#xB9AC;&#xC544; &#xD06C;&#xAE30;&#xB294; &#xC601;&#xAD6C; &#xC5B4; &#xB3D9;&#xC548; &#xC99D;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC601;&#xAD6C; &#xC5B4; opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4;/&#xB9AC;&#xAC04;&#xB4DC; &#xC2DD; &#xB2E4;&#xC6B4; &#xADDC;&#xC81C;&#xC640; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774;&#xAC83;&#xC740; &#xC2EC; myocytes&#xC758; ultrastructural &#xAC1C;&#xC7A5;&#xC5D0; &#xB530;&#xB978; fibrillating &#xC2EC; &#xBC29; &#xC870;&#xC9C1;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF4;&#xD638; &#xB2A5;&#xB825;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;.

Opioid &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xD558;&#xC704;&#xACFC; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; atria fibrillating&#xC5D0; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; ligands&#xC758; &#xD45C;&#xD604;.

Los subtipos de receptores delta y kappa son ambos abundantemente expresado en el ser humano del coraz&oacute;n y participan en alteraciones relacionadas con la edad y el estr&eacute;s de la funci&oacute;n cardiaca. Agonistas de los receptores opioides median cardioprotecci&oacute;n en respuesta a precondicionamiento isqu&eacute;mico v&iacute;a aumento de los niveles intracelular de Ca(2) (+), la apertura mitocondriales K(ATP) canales y la activaci&oacute;n de PKC. Estudiamos la expresi&oacute;n de delta y kappa de subtipos de receptores opioides y de sus precursores del ligando, proopiomelanocortina (POMC) y preproenkephalin A (PENKA), en tejido humano atrial de pacientes en ritmo sinusal (SR), o persistente fibrilaci&oacute;n auricular (FA). Tambi&eacute;n se compar&oacute; el tama&ntilde;o mitocondrial entre los dos grupos. El mRNA atrial se evalu&oacute; la expresi&oacute;n de precursores de los p&eacute;ptidos opioides y receptores por RT-PCR en tiempo real y competitiva en 16 pacientes en AF y 16 pacientes en mitocondrias de SR. se analizaron en el tejido auricular por microscopia electr&oacute;nica en cuatro pacientes en AF y cuatro pacientes en SR. Ambos PENKA (SR: 100 +/-33% contra AF: 33 +-21%; P &lt; 0.05) y cantidades de ARNm del receptor kappa (AF: 78 +/-20% contra SR: 100 +/-11%; P &lt; 0.05) ambos disminuyeron en AF en comparaci&oacute;n con el SR. Adem&aacute;s, los niveles de mRNA POMC disminuyeron en AF (SR: 100 +/-54% contra AF: 37 +/-26%; P &lt; 0.05), mientras que la expresi&oacute;n de los receptores opioides delta correspondiente era sin cambios (AF: 102 +/-34% contra 100 +-44%). Tama&ntilde;o mitocondrial se increment&oacute; durante la FA persistente. FA persistente se asocia con la abajo-regulaci&oacute;n de la expresi&oacute;n del ligand/del receptor opi&aacute;ceo. Esto sugiere una p&eacute;rdida de la capacidad protectora del tejido auricular fibrillating, dando por resultado una remodelaci&oacute;n ultraestructural de miocitos atriales.

Expresi&oacute;n de subtipos de receptores opioides y sus ligandos en fibrillating aur&iacute;culas humanas.

&#x65B0;&#x9C9C;&#x5206;&#x79BB;&#x4EBA;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x8BA4;&#x4E3A;&#x662F;&#x4F53;&#x5916;&#x8BD5;&#x9A8C;&#x836F;&#x7269;&#x5019;&#x9009;&#x4EBA;&#x7684;&#x9EC4;&#x91D1;&#x6807;&#x51C6;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#x8FD8;&#x6DF1;&#x4F4E;&#x6E29;&#x4FDD;&#x5B58;&#x4EBA;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x60AC;&#x6D6E;&#x6DB2;&#x90FD;&#x53EF;&#x7528;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x7F3A;&#x70B9;&#x662F;&#x9644;&#x4EF6;&#x5230;&#x57F9;&#x517B;&#x76BF;&#x7684; incalculability&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5EFA;&#x7ACB;&#x4E86;&#x51BB;&#x7ED3;&#x5BF9;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x4F53;&#x5916;&#x57F9;&#x517B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x6280;&#x672F;&#x3002;&#x89E3;&#x51BB;&#x635F;&#x574F;&#x540E;&#x4E00;&#x5B9A;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x4E0A;&#x7531;&#x8F7B;&#x67D4;&#x6D17;&#x4E0E;&#x57F9;&#x517B;&#x57FA;&#x6DFB;&#x52A0;&#x4E0A;&#x51DD;&#x80F6;&#x5C42;&#x4E4B;&#x524D;&#x5220;&#x9664;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x9020;&#x6210;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6587;&#x5316;&#x7684;&#x5F62;&#x6001;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x5F00;&#x6765;&#xFF0C;&#x975E;&#x51BB;&#x7ED3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8272;&#x7D20; p450 &#x6C27;&#x5316;&#x4E9A;&#x578B;&#x7684;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52A8;&#x51CF;&#x5F31;&#x51B7;&#x51BB;&#x76F8;&#x6BD4;&#x975E;&#x51B7;&#x51BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x777E;&#x916E;&#x7F9F; &#xFF08;&#x6295;&#x5F71;&#xFF09; &#x5728;&#x804C;&#x4F4D; 6beta&#x3001; 16alpha&#x3001; 2beta &#x548C; 6alpha &#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x53EF;&#x4EE5;&#x770B;&#x51FA;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7531; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x5B75;&#x5316;&#x4E0E; 50 microM &#x5229;&#x798F;&#x5E73;&#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x56E0;&#x7D20;&#x662F;&#x51B7;&#x51BB;&#x53CA;&#x975E;&#x51BB;&#x7ED3;&#x7684;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x76F8;&#x4F3C;&#x3002;&#x5728;&#x51B7;&#x51BB;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5229;&#x798F;&#x5E73;&#x5E73;&#x5747;&#x503C; 6beta &#x6295;&#x5F71;&#x9020;&#x6210;&#x589E;&#x52A0; 57.2 &#x4ECE;&#x5F62;&#x6210;&#x5230; 157.7 &#x6700;&#x5C0F; pmol/&#x4E95; (2.8-fold)&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4;&#x589E;&#x52A0; 115.8 269.1 &#x6700;&#x5C0F; pmol/&#x4E95;&#x5230;&#x4ECE; (2.3-fold) &#x5728;&#x975E;&#x51BB;&#x7ED3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x540C;&#x6837;&#xFF0C;16alpha-&#x548C; 2beta-&#x6295;&#x5F71;&#x5206;&#x522B;&#x663E;&#x793A;&#x5728;&#x51B7;&#x51BB;&#x5230; 1.6-&#x548C; 2.4 &#x500D;&#x4E2D;&#x76F8;&#x6BD4;&#x975E;&#x51B7;&#x51BB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684; 2.4-&#x548C; 2.3 &#x500D;&#x3002;&#x6700;&#x540E;&#xFF0C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80F6;&#x539F;&#x51DD;&#x80F6;&#x4E0A;&#x6DF1;&#x4F4E;&#x6E29;&#x4FDD;&#x5B58;&#x663E;&#x793A;&#x660E;&#x786E; CYP3A4 &#x8BF1;&#x5BFC;&#x5229;&#x798F;&#x5E73;&#xFF0C;&#x867D;&#x7136;&#x57FA;&#x5E95;&#x7684;&#x6D3B;&#x52A8;&#x5C06;&#x51CF;&#x5C11;&#x76F8;&#x6BD4;&#x975E;&#x51BB;&#x7ED3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;

&#x6587;&#x5316;&#x6DF1;&#x4F4E;&#x6E29;&#x4FDD;&#x5B58;&#x4EBA;&#x809D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E2D;&#x7684;&#x9176;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x3002;

Freshly isolated human hepatocytes are considered as the gold standard for in vitro testing of drug candidates. Meanwhile also cryopreserved human hepatocyte suspensions are available. However, a drawback of these cells is the incalculability of attachment to the culture dish. Therefore, we established a technique freezing hepatocytes cultured on a collagen gel. After thawing damaged cells were removed to a certain extent by gentle washing with culture medium prior to adding an upper gel layer. The morphology of the resulting hepatocyte cultures could not be distinguished from that of non-frozen cells. However, basal activities of cytochrome P450 isoforms decreased in cryopreserved compared to non-frozen hepatocytes, as evidenced by analysis of testosterone hydroxylation (OHT) in positions 6beta, 16alpha, 2beta and 6alpha. Nevertheless, enzyme induction factors caused by 24 h incubation with 50 microM rifampicin were similar in cryopreserved and non-frozen hepatocytes. In cryopreserved hepatocytes rifampicin caused an increase in mean values of 6beta-OHT formation from 57.2 to 157.7 pmol/well/min (2.8-fold), compared to an increase from 115.8 to 269.1 pmol/well/min (2.3-fold) in non-frozen cells. Similarly, 16alpha- and 2beta-OHT showed induction factors of 2.4- and 2.3-fold in cryopreserved compared to 1.6- and 2.4-fold in non-frozen hepatocytes, respectively. In conclusion, human hepatocytes cryopreserved on collagen gels show a clear induction of CYP3A4 by rifampicin, although the basal activities are reduced compared to non-frozen cells.

Enzyme induction in cryopreserved human hepatocyte cultures.

Les h&eacute;patocytes humains fra&icirc;chement isol&eacute;es sont consid&eacute;r&eacute;es comme l&#39;&eacute;talon-or pour les tests in vitro des candidats-m&eacute;dicaments. Pendant ce temps des suspensions d&#39;h&eacute;patocytes humains cryoconserv&eacute;s sont &eacute;galement disponibles. Cependant, l&#39;inconv&eacute;nient de ces cellules est la GastroSuisse d&#39;attachement &agrave; la bo&icirc;te de Petri. Par cons&eacute;quent, nous avons &eacute;tabli une technique de cong&eacute;lation des h&eacute;patocytes cultiv&eacute;es sur un gel de collag&egrave;ne. Apr&egrave;s que d&eacute;gel des cellules endommag&eacute;es ont &eacute;t&eacute; enlev&eacute;es dans une certaine mesure par lavage doux avec milieu de culture avant d&#39;ajouter une couche de gel sup&eacute;rieur. La morphologie des r&eacute;sultante des cultures d&#39;h&eacute;patocytes ne pouvait distinguer de celle des cellules non congel&eacute;s. Cependant, les activit&eacute;s basales du cytochrome P450 isoformes ont diminu&eacute; dans les h&eacute;patocytes par rapport aux non congel&eacute;s cryoconserv&eacute;s, comme en t&eacute;moigne l&#39;analyse de l&#39;hydroxylation de testost&eacute;rone (OHT) dans des positions 6b&ecirc;ta, 16alpha, 2b&ecirc;ta et 6alpha. N&eacute;anmoins, des facteurs d&#39;induction enzymatique caus&eacute;es par 24 h d&#39;incubation avec 50 microM rifampicine ont &eacute;t&eacute; similaires dans les h&eacute;patocytes cryoconserv&eacute;s et non congel&eacute;s. Dans les h&eacute;patocytes cryoconserv&eacute;s rifampicine provoqu&eacute;e une augmentation des valeurs moyennes de 6b&ecirc;ta-OHT formation de 57,2 &agrave; 157,7 pmol/puits/min (2), compar&eacute;e &agrave; une hausse de 115,8 269,1 pmol/puits/min (2.3) dans les cellules non congel&eacute;s. De m&ecirc;me, 16alpha - et 2beta-OHT ont montr&eacute; des facteurs d&#39;induction de 2,4 et 2.3 fois cryoconserv&eacute;s comparativement &agrave; 1,6 et 2,4 fois dans h&eacute;patocytes non congel&eacute;, respectivement. En conclusion, les h&eacute;patocytes humains cryopr&eacute;serv&eacute;s sur gel de collag&egrave;ne montrent une claire induction du CYP3A4 par la rifampicine, bien que les activit&eacute;s basales sont r&eacute;duites par rapport aux cellules non congel&eacute;s.

Induction enzymatique dans les cultures d&#39;h&eacute;patocytes humains cryopr&eacute;serv&eacute;s.

Frisch isolierte menschliche Hepatozyten gelten als der Goldstandard f&uuml;r in-vitro-Tests von Arzneimittelkandidaten. Inzwischen stehen auch kryokonservierten menschlichen Hepatozyten Suspensionen. Ein Nachteil dieser Zellen ist jedoch die Unberechenbarkeit der Anlage auf die Kultur-Sch&uuml;ssel. Daher haben wir eine Technik, die Hepatozyten kultivierten auf einem Kollagengel fixieren. Nach dem Auftauen besch&auml;digt wurden Zellen durch sanftes waschen mit Kulturmedium vor dem Hinzuf&uuml;gen einer oberen Gel-Schicht zu einem gewissen Grad entfernt. Die Morphologie der resultierenden Hepatozyten Kulturen k&ouml;nnte nicht von der nicht fixiert Zellen unterschieden werden. Jedoch sank um basale T&auml;tigkeiten des Cytochrom P450-Isoformen kryokonservierten im Vergleich zu nicht fixiert Hepatozyten, wie Analyse der Testosteron-Hydroxylierung (OHT) in Positionen 6beta, 16alpha, 2beta und 6alpha belegt. Dennoch waren Enzym Induktion Faktoren verursacht durch 24 h Inkubation mit 50 MicroM Rifampicin in Hepatozyten kryokonservierten und nicht fixiert. In kryokonservierten Hepatozyten Rifampicin verursacht eine Erh&ouml;hung in Mittelwerte der 6beta-OHT gegen&uuml;ber Bildung von 57,2 157,7 Pmol/gut/min (2.8-fold), eine Steigerung von 115.8 269.1 Pmol/gut/min (2.3-fold) in Zellen nicht fixiert. Ebenso 16alpha - und 2beta-OHT Induktion Faktoren des 2.4 - und 2.3 - 8-fach kryokonservierten im Vergleich zu 1,6 und 2.4 - 8-fach in nicht fixiert Hepatozyten, bzw. zeigte. Abschlie&szlig;end zeigen menschliche Hepatozyten kryokonserviert auf Kollagen-Gel eine klare Induktion von CYP3A4 durch Rifampicin, obwohl die basalen Aktivit&auml;ten im Vergleich zu nicht fixiert Zellen reduziert werden.

Enzym-Induktion in kryokonservierten menschlichen Hepatozyten Kulturen.

Appena isolati epatociti umani sono considerati come il gold standard per i test in vitro di candidati farmaci. Nel frattempo anche sospensioni degli epatociti umani crioconservati sono disponibili. Tuttavia, uno svantaggio di queste cellule &egrave; l&#39;imprevedibilit&agrave; dell&#39;attacco alla piastra di coltura. Pertanto, abbiamo stabilito una tecnica di congelamento epatociti coltivati su un gel di collagene. Dopo scongelamento cellule danneggiate sono state rimosse in una certa misura di lavaggio delicato con terreno di coltura prima dell&#39;aggiunta di uno strato di gel superiore. La morfologia delle culture degli epatociti risultante potrebbe non essere distinto da quello delle cellule non congelate. Tuttavia, attivit&agrave; basale del citocromo P450 isoforme sono diminuiti in epatociti rispetto ai non-frozen crioconservati, come evidenziato dall&#39;analisi di idrossilazione di testosterone (OHT) in posizioni 6beta, 16alfa, 2beta e 6alpha. Tuttavia, fattori di induzione enzimatica causate da incubazione di 24 ore con 50 microM rifampicina sono stati simili in epatociti crioconservati e non bloccato. In epatociti crioconservati rifampicina ha causata un aumento nei valori medi di 6beta-OHT formazione da 57,2 a 157.7 pmol/pozzo/min (2.8-fold), rispetto ad un aumento da 115,8 a 269.1 pmol/pozzo/min (2.3-fold) nelle cellule non congelate. Analogamente, 16alfa - e 2beta-OHT ha mostrato fattori induzione di 2,4 - e 2.3 volte in crioconservati rispetto alla 1.6 - e 2.4 volte in epatociti non congelati, rispettivamente. In conclusione, epatociti umani criopreservati su gel di collagene mostrano una chiara induzione del CYP3A4 di rifampicina, anche se le attivit&agrave; basali sono ridotti rispetto alle cellule non congelate.

Induzione enzimatica nelle culture degli epatociti umani crioconservati.

&#x65B0;&#x9BAE;&#x5358;&#x96E2;&#x3072;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F; in vitro &#x85AC;&#x7269;&#x5019;&#x88DC;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30B4;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C9; &#x30B9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x30C9;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3068;&#x898B;&#x306A;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E00;&#x65B9;&#x307E;&#x305F;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3072;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x61F8;&#x6FC1;&#x6DB2;&#x304C;&#x3054;&#x5229;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x3060;&#x3051;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6B20;&#x70B9;&#x306F;&#x57F9;&#x990A;&#x76BF;&#x3078;&#x306E;&#x611B;&#x7740;&#x306E; incalculability &#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B2;&#x30EB;&#x57F9;&#x990A;&#x51CD;&#x7D50;&#x6280;&#x6CD5;&#x3092;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x878D;&#x89E3;&#x306E;&#x640D;&#x50B7;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3042;&#x308B;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x57F9;&#x4E0A;&#x90E8;&#x30B2;&#x30EB;&#x5C64;&#x3092;&#x8FFD;&#x52A0;&#x3059;&#x308B;&#x524D;&#x306E;&#x7A4F;&#x3084;&#x304B;&#x306A;&#x6D17;&#x6D44;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x524A;&#x9664;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x5F8C;&#x3002;&#x7D50;&#x679C;&#x306E;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306E;&#x5F62;&#x614B;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x304B;&#x3089;&#x533A;&#x5225;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;&#x6D3B;&#x52D5;&#x30B7;&#x30C8;&#x30AF;&#x30ED;&#x30E0; P450 &#x30A2;&#x30A4;&#x30BD; &#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8;&#x30B9;&#x30C6;&#x30ED;&#x30F3;&#x306E;&#x4F4D;&#x7F6E; 6 &beta;&#x3001;16alpha&#x3001;-2 &beta; 6alpha (&#x30A8;&#x30A4;&#x30C1;) &#x6C34;&#x9178;&#x5316;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;50 microM &#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3068;&#x306E; 24 h &#x306E;&#x5B75;&#x5316;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x8A98;&#x5C0E;&#x8981;&#x56E0;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3068;&#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;-6 &Beta;-OHT &#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5E73;&#x5747;&#x5024;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3057;&#x305F;&#x51CD;&#x7D50;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E; 57.2 &#x304B;&#x3089;&#x5F62;&#x6210; 157.7 pmol/&#x307E;&#x3042;/&#x5206; (2.8-fold) &#x306B;&#x5897;&#x52A0;&#x304B;&#x3089; 115.8 269.1 pmol/&#x307E;&#x3042;/&#x5206; &#xFF08;2.3 &#x500D;&#xFF09; &#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3002;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;16alpha- &#x3068;-2 &beta; - &#x51CD;&#x7D50; &#x301C; 1.6- &#x3068; 2.4 &#x500D;&#x3067;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x809D;&#x3067;&#x3001;&#x8A98;&#x5C0E;&#x56E0;&#x5B50;&#x306E; 2.4 &#x301C; &#x3068; 2.3 &#x500D;&#x3092;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x793A;&#x3057;&#x305F; OHT&#x3002;&#x7D50;&#x8AD6;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x57FA;&#x5E95;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3068;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x3066;&#x975E;&#x51CD;&#x7D50;&#x7D30;&#x80DE;&#x6E1B;&#x5C11;&#x304C;&#x3072;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B3;&#x30E9;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30FB; &#x30B2;&#x30EB;&#x306E;&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A1;&#x30F3;&#x30D4;&#x30B7;&#x30F3;&#x3001;&#x306B;&#x3088;&#x308B; CYP3A4 &#x306E;&#x660E;&#x78BA;&#x306A;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x51CD;&#x7D50;&#x4FDD;&#x5B58;&#x3072;&#x3068;&#x809D;&#x7D30;&#x80DE;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x9175;&#x7D20;&#x306E;&#x8A98;&#x5C0E;&#x3002;

&#xC2E0;&#xC120; &#xD558; &#xAC8C; &#xACE0;&#xB9BD; &#xB41C; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hepatocytes &#xB9C8;&#xC57D; &#xD6C4;&#xBCF4;&#xC790;&#xC758; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xD5D8;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD669;&#xAE08; &#xD45C;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xAC04;&#xC8FC; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD55C;&#xD3B8; &#xB610;&#xD55C; cryopreserved &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hepatocyte &#xC815;&#xC9C0; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xC810;&#xC740; &#xBB38;&#xD654; &#xC811;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xCCA8;&#xBD80; &#xD30C;&#xC77C;&#xC758; incalculability&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; hepatocytes &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC5D0; &#xAD50;&#xC591; &#xB0C9;&#xB3D9; &#xAE30;&#xC220; &#xC124;&#xB9BD;. &#xC190;&#xC0C1; &#xB179;&#xACE0; &#xD6C4; &#xC140; &#xC704; &#xC824; &#xB808;&#xC774;&#xC5B4;&#xB97C; &#xCD94;&#xAC00; &#xD558;&#xAE30; &#xC804;&#xC5D0; &#xBB38;&#xD654; &#xB9E4;&#xCCB4;&#xC640; &#xBD80;&#xB4DC;&#xB7EC;&#xC6B4; &#xC138;&#xD0C1;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC5B4;&#xB290; &#xC815;&#xB3C4; &#xC81C;&#xAC70; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. -&#xB0C9;&#xB3D9; &#xC140;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; hepatocyte &#xBB38;&#xD654;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB97C; &#xAD6C;&#xBD84;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098;, &#xC2DC; &#xD1A0; &#xD06C;&#xB86C; P450 isoforms&#xC758; &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9; &#xC704;&#xCE58; 6beta, 16alpha, 2beta &#xBC0F; 6alpha&#xC5D0; &#xC2A4;&#xD1A0; hydroxylation (OHT)&#xC758; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC785;&#xC99D;&#xC73C;&#xB85C; cryopreserved-&#xB0C9;&#xB3D9;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; hepatocytes&#xC5D0; &#xAC10;&#xC18C;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, 24 h 50 microM &#xB9AC; &#xD31C; &#xD53C;&#xC2E0;&#xACFC; &#xBD80; &#xD654;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4; &#xC694;&#xC778; cryopreserved &#xBC0F; &#xBE44; &#xB0C9;&#xB3D9; hepatocytes&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. 6Beta OHT &#xD3C9;&#xADE0;&#xAC12;&#xC5D0; &#xC99D;&#xAC00; &#xD55C; cryopreserved hepatocytes &#xB9AC; &#xD31C; &#xD53C;&#xC2E0;&#xC5D0; 157.7 pmol/&#xC798;/&#xBD84; 57.2&#xC5D0;&#xC11C; &#xD615;&#xC131; (2.8-fold)&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xC99D;&#xAC00; 269.1 pmol/&#xC798;/min&#xC5D0; 115.8&#xC5D0;&#xC11C; (2.3-fold)-&#xB0C9;&#xB3D9; &#xC140;&#xC5D0;. &#xB9C8;&#xCC2C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xB85C;, 16alpha-&#xBC0F; 2beta-OHT cryopreserved &#xBE44;&#xAD50;&#xB97C; 1.6-&#xC640; 2.4 &#xBC30;&#xC5D0; &#xBE44; &#xB0C9;&#xB3D9; hepatocytes&#xC5D0; &#xC720;&#xB3C4; &#xC694;&#xC778;&#xC758; 2.4-&#xACE0; 2.3 &#xBC30;&#xB97C; &#xAC01;&#xAC01; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. &#xB05D;&#xC73C;&#xB85C;, &#xC778;&#xAC04;&#xC758; hepatocytes &#xCF5C;&#xB77C;&#xAC90; &#xC824;&#xC5D0; cryopreserved &#xAE30;&#xC800; &#xD65C;&#xB3D9; &#xBE44; &#xC5BC; &#xC140;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; &#xAC10;&#xC18C;&#xB294; &#xB9AC; &#xD31C; &#xD53C;&#xC2E0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xBA85;&#xD655;&#xD55C; CYP3A4 &#xC720;&#xB3C4; &#xBCF4;&#xC5EC;.

Cryopreserved &#xC778;&#xAC04; hepatocyte &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC720;&#xB3C4;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Hepatocitos humanos reci&eacute;n aislados son considerados como el est&aacute;ndar de oro para pruebas in vitro de f&aacute;rmacos candidatos. Mientras tanto tambi&eacute;n suspensiones de hepatocitos humanos criopreservados est&aacute;n disponibles. Sin embargo, una desventaja de estas c&eacute;lulas es la inconmensurabilidad de apego a la placa de cultivo. Por lo tanto, establecimos una t&eacute;cnica de congelaci&oacute;n hepatocitos cultivados en un gel de col&aacute;geno. Despu&eacute;s de descongelaci&oacute;n de las c&eacute;lulas da&ntilde;adas se eliminaron hasta cierto punto por lavado suave con medio de cultivo antes de a&ntilde;adir una capa de gel superior. La morfolog&iacute;a de las culturas resultante del hepatocito no pod&iacute;a distinguirse de la de las c&eacute;lulas sin congelar. Sin embargo, actividades basales del citocromo P450 isoformas disminuyeron en hepatocitos en comparaci&oacute;n con no congelados criopreservados, evidenciada por el an&aacute;lisis de la hidroxilaci&oacute;n de la testosterona (HTO) en posiciones 6beta, 16alpha, 2beta y 6alpha. Sin embargo, factores de inducci&oacute;n enzim&aacute;tica causadas por 24 h de incubaci&oacute;n con 50 microM rifampicina fueron similares en los hepatocitos criopreservados y no congelados. En hepatocitos criopreservados rifampicina causada un aumento en los valores medios de 6beta-HTO formaci&oacute;n de 57,2 a 157.7 pmol/pozo/min (2.8-fold), frente a un aumento de 115,8 a 269.1 pmol/pozo/min (2.3-fold) en c&eacute;lulas no congelados. Asimismo, 16alpha - y 2beta-HTO presentaron factores de inducci&oacute;n de 2.4 y 2.3 veces en criopreservados comparado a 1.6 - y 2.4 veces en hepatocitos sin congelar, respectivamente. En conclusi&oacute;n, los hepatocitos humanos criopreservados en geles de col&aacute;geno muestran una clara inducci&oacute;n de CYP3A4 por rifampicina, aunque las actividades basales se reducen en comparaci&oacute;n con las c&eacute;lulas sin congelar.

Inducci&oacute;n de la enzima en cultivos de hepatocitos humanos criopreservados.

&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631; (&#x7F51;) &#x5728;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x5230;&#x5148;&#x5929;&#x514D;&#x75AB;&#x4E2D;&#x53D1;&#x6325;&#x91CD;&#x8981;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;&#x868A;&#x5E10;&#x8FF0;&#x51E0;&#x4E2A;&#x7269;&#x79CD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x5206;&#x5B50;&#x673A;&#x5236;&#x7684;&#x7EC6;&#x8282;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5728;&#x611F;&#x67D3;&#x4E2D;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x672A;&#x5F97;&#x5230;&#x89E3;&#x51B3;&#xFF0C;&#x90E8;&#x5206;&#x662F;&#x56E0;&#x4E3A;&#x6211;&#x4EEC;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x4F18;&#x5316;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6A21;&#x578B;&#x3002;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x7684;&#x5DE5;&#x5177;&#x6765;&#x8C03;&#x67E5;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x79BB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x3002;&#x540E;&#x79EF;&#x6781;&#x5FC3;&#x6001;&#x4E0E;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4F53;&#x5916;&#x523A;&#x6FC0;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5206;&#x6790;&#x4E86;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x6B65;&#x9AA4;&#xFF1A; &#x4EA7;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27; (ROS)&#x3001; &#x51C0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x548C;&#x51C0;&#x91CA;&#x653E;&#x3002;&#x4E0D;&#x51FA;&#x6240;&#x6599;&#xFF0C;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE; NADPH &#x6C27;&#x5316;&#x9176;&#x7F3A;&#x9677;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4ECE;&#x672A;&#x80FD;&#x4EA7;&#x751F;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x548C;&#x505A;&#x4E0D;&#x6B7B;&#xFF0C;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x91CA;&#x653E;&#x7F51;&#x540E;&#x523A;&#x6FC0;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x4ECE;&#x4E0D;&#x540C;&#x54C1;&#x7CFB;&#x5C0F;&#x9F20;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x751F;&#x4EA7;&#x868A;&#x5E10;&#x4EE5;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x6548;&#x7387;&#x548C;&#x51C0;&#x5F62;&#x6210;&#x76F8;&#x5173;&#x4E0E;&#x6D3B;&#x6027;&#x6C27;&#x7684;&#x91CF;&#x4EA7;&#x3002;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x4E0E;&#x767D;&#x8272;&#x5FF5;&#x73E0;&#x83CC;&#x4E5F;&#x5BFC;&#x81F4; ROS &#x751F;&#x4EA7;&#x548C;&#x51C0;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x3002;&#x8FD9;&#x79CD;&#x771F;&#x83CC;&#x7684;&#x83CC;&#x4E1D;&#x5F62;&#x5F0F;&#x6BD4;&#x9175;&#x6BCD;&#x5F62;&#x5F0F;&#x66F4;&#x6709;&#x6548;&#x5730;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x868A;&#x5E10;&#x3002;&#x8FD9;&#x9879;&#x5DE5;&#x4F5C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5DE5;&#x5177;&#xFF0C;&#x5728;&#x9F20;&#x6807;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x7814;&#x7A76;&#x4F53;&#x5916;&#x51C0;&#x5927;&#x4F1A;&#x3002;

&#x9F20;&#x6807;&#x5728;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631;&#x3002;

Neutrophil extracellular traps (NETs) play an important role in innate immunity to microbial infections. NETs have been described in several species, but the molecular details of NET formation and their role in infection has not been addressed, partly because we lack optimal experimental models. Here we describe tools to investigate NET formation in neutrophils isolated from mice. Upon in vitro stimulation of wild-type mouse neutrophils with PMA, we analyzed 3 important steps in the process of NET formation: reactive oxygen species (ROS) production, NET cell death and NET release. As expected, neutrophils from NADPH oxidase-deficient mice failed to produce ROS and did not die nor release NETs upon stimulation. We found that neutrophils from several mouse strains produced NETs with different efficiency and that NET formation correlated with the amount of ROS produced. Activation with Candida albicans also resulted in ROS production and NET cell death. The hyphal form of this fungus induced NETs more effectively than the yeast form. With this work, we provide tools to study in vitro NET assembly in the mouse system.

Mouse neutrophil extracellular traps in microbial infections.

Neutrophiles pi&#xE8;ges extracellulaires (filets) jouent un r&#xF4;le important dans l&#x26;#39;immunit&#xE9; inn&#xE9;e aux infections microbiennes. NET ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;crites dans plusieurs esp&#xE8;ces, mais les d&#xE9;tails mol&#xE9;culaires de la formation NET et leur r&#xF4;le dans l&#x26;#39;infection n&#x26;#39;a pas &#xE9;t&#xE9; abord&#xE9;e, en partie parce que nous manquons optimales des mod&#xE8;les exp&#xE9;rimentaux. Nous d&#xE9;crivons ici les outils pour &#xE9;tudier la formation NET dans les neutrophiles isol&#xE9;s &#xE0; partir de souris. Sur la stimulation in vitro des neutrophiles de souris de type sauvage avec PMA, nous avons analys&#xE9; 3 &#xE9;tapes importantes dans le processus de formation NET: les esp&#xE8;ces r&#xE9;actives de l&#x26;#39;oxyg&#xE8;ne (ROS), la mort cellulaire et la lib&#xE9;ration NET NET. Comme pr&#xE9;vu, les neutrophiles de NADPH oxydase-souris d&#xE9;ficientes pas r&#xE9;ussi &#xE0; produire des ROS et ne pas mourir, ni lib&#xE9;rer NET lors de la stimulation. Nous avons constat&#xE9; que les neutrophiles des souches de souris plusieurs produits avec une efficacit&#xE9; diff&#xE9;rente NET et que la formation NET en corr&#xE9;lation avec la quantit&#xE9; de ROS produites. Activation avec Candida albicans a &#xE9;galement entra&#xEE;n&#xE9; la production de ROS et la mort cellulaire NET. La forme des hyphes de ce champignon induit NET plus efficacement que la forme levure. Avec ce travail, nous fournissons des outils pour &#xE9;tudier in vitro NET dans le syst&#xE8;me de la souris.

Souris pi&#xE8;ges neutrophiles extracellulaires dans les infections microbiennes

Neutrophil extrazellul&auml;re Traps (NETs) spielen eine wichtige Rolle in der angeborenen Immunit&auml;t gegen&uuml;ber mikrobiellen Infektionen. Netze wurden in mehrere Arten, aber die molekularen Details NET-Formation beschrieben und ihre Rolle bei der Infektion nicht gerichtet wurde, teils, weil wir optimale experimentelle Modelle fehlen. Hier beschreiben wir Tools zur NET-Formation in Neutrophilen, die isoliert von den M&auml;usen zu untersuchen. Bei in-vitro-Stimulation der Wildtyp Maus Neutrophilen mit PMA, analysierten wir 3 wichtige Schritte NET verschmelzen: reaktive Sauerstoff-Spezies (ROS), NET Zelltod und NET Release. Wie erwartet, neutrophile von NADPH Oxydase-defizienten M&auml;usen konnte ROS zu produzieren und haben nicht sterben noch Version Netze auf Anregung. Wir fanden, dass neutrophile aus mehrere Maus-St&auml;mmen Netze mit unterschiedlichen Effizienz hergestellten und, dass NET Bildung mit der Menge der ROS korreliert. Aktivierung mit Candida Albicans ergab auch ROS Produktion und NET Zelltod. Geflochtenen Form dieser Pilz induzierte Netze effektiver als die Hefe-Form. Mit dieser Arbeit bieten wir Tools f&uuml;r in-vitro-NET-Assembly in das Maus-System zu studieren.

Neutrophil extrazellul&auml;re Mausefallen mikrobiellen Infektionen.

Trappole extracellulari del neutrofilo (reti) giocano un ruolo importante nell&#39;immunit&agrave; innata alle infezioni microbiche. Le reti sono state descritte in diverse specie, ma i dettagli molecolari di formazione NET e loro ruolo nell&#39;infezione non &egrave; stata affrontata, in parte perch&eacute; ci mancano modelli sperimentali ottimali. Qui descriviamo gli strumenti per indagare NET formazione in neutrofili isolati da topi. Dopo stimolazione in vitro dei neutrofili selvaggio-tipo mouse con PMA, abbiamo analizzato 3 passi importanti nel processo di formazione di NET: produzione di ossigeno reattivo (ROS) specie, morte cellulare NET e NET release. Come previsto, neutrofili dal mouse di NADPH ossidasi-carenti non &egrave; riuscito a produrre ROS e fatto le reti non morire n&eacute; comunicato dopo stimolazione. Abbiamo scoperto che i neutrofili da diversi ceppi di topo prodotto reti con diversa efficienza e che NET formazione correlata con la quantit&agrave; di ROS prodotte. Attivazione con Candida albicans ha portato anche nella produzione di ROS e morte cellulare NET. La forma ifale di questo fungo indotta da reti pi&ugrave; efficacemente che la forma di lievito. Con questo lavoro, forniamo gli strumenti per lo studio in vitro NET assembly nel sistema del mouse.

Trappole extracellulari del neutrofilo mouse in infezioni microbiche.

&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#xFF08;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF09;&#x306F;&#x3001;&#x5FAE;&#x751F;&#x7269;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x81EA;&#x7136;&#x514D;&#x75AB;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7A2E;&#x306B;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x6700;&#x9069;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x3092;&#x6B20;&#x3044;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x7406;&#x7531;&#x306E;&#x611F;&#x67D3;NET&#x306E;&#x5F62;&#x6210;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x5F79;&#x5272;&#x306E;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306F;&#x3001;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x5358;&#x96E2;&#x3057;&#x305F;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;NET&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x8ABF;&#x67FB;&#x3059;&#x308B;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6D3B;&#x6027;&#x9178;&#x7D20;&#x7A2E;&#xFF08;ROS&#xFF09;&#x7523;&#x751F;&#x3001;NET&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3068;NET&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#xFF1A;PMA&#x3068;&#x91CE;&#x751F;&#x578B;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;in vitro&#x3067;&#x306E;&#x523A;&#x6FC0;&#x306E;&#x969B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;NET&#x5F62;&#x6210;&#x904E;&#x7A0B;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;3&#x3064;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x30B9;&#x30C6;&#x30C3;&#x30D7;&#x3092;&#x5206;&#x6790;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x4E88;&#x60F3;&#x901A;&#x308A;&#x3001;NADPH&#x30AA;&#x30AD;&#x30B7;&#x30C0;&#x30FC;&#x30BC;&#x6B20;&#x640D;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;ROS&#x3092;&#x751F;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5931;&#x6557;&#x3057;&#x3001;&#x523A;&#x6FC0;&#x306B;NET&#x3092;&#x6B7B;&#x306C;&#x3082;&#x89E3;&#x653E;&#x3057;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3067;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7CFB;&#x7D71;&#x304B;&#x3089;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x304C;&#x5225;&#x306E;&#x52B9;&#x7387;&#x6027;&#x3068;&#x751F;&#x7523;ROS&#x91CF;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;NET&#x5F62;&#x6210;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x751F;&#x7523;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B8;&#x30C0;&#xB7;&#x30A2;&#x30EB;&#x30D3;&#x30AB;&#x30F3;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;ROS&#x7523;&#x751F;&#x3068;NET&#x7D30;&#x80DE;&#x6B7B;&#x3092;&#x3082;&#x305F;&#x3089;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x83CC;&#x306E;&#x83CC;&#x7CF8;&#x5F62;&#x614B;&#x304C;&#x3088;&#x308A;&#x52B9;&#x679C;&#x7684;&#x306B;&#x9175;&#x6BCD;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x3088;&#x308A;NET&#x3092;&#x8A98;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4F5C;&#x54C1;&#x3067;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x7CFB;&#x306E;in vitro NET&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3067;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30C4;&#x30FC;&#x30EB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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&#xBBF8;&#xC0DD;&#xBB3C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD2B8;&#xB7A9;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Neutr&#xF3;filos trampas extracelulares (TNE) juegan un papel importante en la inmunidad innata a las infecciones microbianas. NET se han descrito en varias especies, pero los detalles moleculares de la formaci&#xF3;n de NET y su papel en la infecci&#xF3;n no se ha abordado, en parte porque carecemos de modelos experimentales &#xF3;ptimas. A continuaci&#xF3;n se describen las herramientas para investigar la formaci&#xF3;n NET en los neutr&#xF3;filos aislados de los ratones. Despu&#xE9;s de la estimulaci&#xF3;n in vitro de los neutr&#xF3;filos de ratones de tipo salvaje con PMA, se analizaron 3 pasos importantes en el proceso de formaci&#xF3;n NET: especies reactivas del ox&#xED;geno (ROS), la muerte celular y la liberaci&#xF3;n de NET Framework. Como era de esperar, los neutr&#xF3;filos de la NADPH oxidasa de los ratones deficientes no producen ROS y no morir ni liberar NET a la estimulaci&#xF3;n. Se encontr&#xF3; que los neutr&#xF3;filos de varias cepas de rat&#xF3;n producidos TNE con eficacia diferente y que la formaci&#xF3;n NET correlacionada con la cantidad de ROS producido. La activaci&#xF3;n por Candida albicans tambi&#xE9;n dio lugar a la producci&#xF3;n de ROS y la muerte celular NET. La forma de las hifas del hongo inducida de redes m&#xE1;s eficaz que la forma de levadura. Con este trabajo, se proporcionan herramientas para el estudio in vitro en el montaje NET en el sistema de rat&#xF3;n.

Rat&#xF3;n de neutr&#xF3;filos extracelular trampas en infecciones microbianas

&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE; (SLE) &#x662F;&#x81EA;&#x8EAB;&#x514D;&#x75AB;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x60A3;&#x8005;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x5F00;&#x53D1; dna&#xFF0C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x548C;&#x7ECF;&#x5E38;&#x5230;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7684;&#x6297;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7A97;&#x4F53;&#x514D;&#x75AB;&#x590D;&#x5408;&#x7269;&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#xFF0C;&#x53EF;&#x80FD;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x72FC;&#x75AE;&#x6027;&#x80BE;&#x708E;&#x3002;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE;&#x60A3;&#x8005;&#x611F;&#x67D3;&#x53EF;&#x4EE5;&#x542F;&#x52A8;&#x53D1;&#x5C04;&#x7167;&#x660E;&#x5F39;&#xFF0C;&#x9020;&#x6210;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x611F;&#x67D3;&#x4F5C;&#x51FA;&#x56DE;&#x5E94;&#xFF0C;&#x5E76;&#x91CA;&#x653E;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631; &#xFF08;&#x82F1;&#x8BED;&#x6559;&#x5E08;&#xFF09;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x6709;&#x6297;&#x83CC;&#x548C;&#x7531; DNA &#x548C;&#x7EC4;&#x86CB;&#x767D;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3002;&#x7F51;&#x53CA;&#x65F6;&#x6E05;&#x9664;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x5173;&#x952E;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6B62;&#x8840;&#xFF0C;&#x907F;&#x514D;&#x81EA;&#x6211;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x6F14;&#x793A;&#x6587;&#x7A3F;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x6D4B;&#x8BD5;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE;&#x60A3;&#x8005;&#x4E0D;&#x80FD;&#x6E05;&#x9664;&#x7F51;&#x3001; &#x72FC;&#x75AE;&#x6027;&#x80BE;&#x708E;&#x7684;&#x53D1;&#x75C5;&#x673A;&#x5236;&#x4F5C;&#x51FA;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x5047;&#x8BF4;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A;&#x8BE5;&#x8131;&#x6C27;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; 1 &#x8840;&#x6E05;&#x5185;&#x5207;&#x9176;&#x662F;&#x53CD;&#x6C47;&#x7F16;&#x7684;&#x868A;&#x5E10;&#x7684;&#x5FC5;&#x8981;&#x6761;&#x4EF6;&#x3002;&#x6709;&#x8DA3;&#x7684;&#x662F;&#xFF0C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE;&#x60A3;&#x8005;&#x8840;&#x6E05;&#x5DEE;&#x964D;&#x7EA7;&#x868A;&#x5E10;&#x3002;&#x9020;&#x6210;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#x53D7;&#x635F;&#x51C0;&#x9000;&#x5316;&#xFF1A; (i) &#x7684;&#x8131;&#x6C27;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; 1 &#x6291;&#x5236;&#x5242;&#x6216; (ii) anti-NET &#x5B58;&#x5728;&#x6297;&#x4F53;&#x65E0;&#x6CD5;&#x8131;&#x6C27;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; 1 &#x8FDB;&#x5165;&#x7F51;&#x3002;&#x8131;&#x6C27;&#x6838;&#x7CD6;&#x6838;&#x9178;&#x9176; 1 &#x51FD;&#x6570;&#x548C;&#x672A;&#x80FD;&#x62C6;&#x9664;&#x7F51;&#x4E0E;&#x80BE;&#x810F;&#x53C2;&#x4E0E;&#x76F8;&#x5173;&#x51CF;&#x503C;&#x51C6;&#x5907;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x4E0D;&#x80FD;&#x62C6;&#x9664;&#x868A;&#x5E10;&#x7684;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x6807;&#x8BC6;&#x53EF;&#x80FD;&#x80BE;&#x810F;&#x75C5;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x6709;&#x7528;&#x7684;&#x6307;&#x6807;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x868A;&#x5E10;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x6027;&#x7EA2;&#x6591;&#x72FC;&#x75AE;&#x7684;&#x6CBB;&#x7597;&#x9776;&#x70B9;&#x3002;

&#x72FC;&#x75AE;&#x6027;&#x80BE;&#x708E;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x80DE;&#x5916;&#x9677;&#x9631;&#x9000;&#x5316;&#x7684;&#x635F;&#x5BB3;&#x3002;

Systemic lupus erythematosus (SLE) is an autoimmune disease in which patients develop autoantibodies to DNA, histones, and often to neutrophil proteins. These form immune complexes that are pathogenic and may cause lupus nephritis. In SLE patients, infections can initiate flares and are a major cause of mortality. Neutrophils respond to infections and release extracellular traps (NETs), which are antimicrobial and are made of DNA, histones, and neutrophil proteins. The timely removal of NETs may be crucial for tissue homeostasis to avoid presentation of self-antigens. We tested the hypothesis that SLE patients cannot clear NETs, contributing to the pathogenesis of lupus nephritis. Here we show that serum endonuclease DNase1 is essential for disassembly of NETs. Interestingly, a subset of SLE patients' sera degraded NETs poorly. Two mechanisms caused this impaired NET degradation: (i) the presence of DNase1 inhibitors or (ii) anti-NET antibodies prevented DNase1 access to NETs. Impairment of DNase1 function and failure to dismantle NETs correlated with kidney involvement. Hence, identification of SLE patients who cannot dismantle NETs might be a useful indicator of renal involvement. Moreover, NETs might represent a therapeutic target in SLE.

Impairment of neutrophil extracellular trap degradation is associated with lupus nephritis.

Le lupus &#xE9;ryth&#xE9;mateux diss&#xE9;min&#xE9; (SLE) est une maladie auto-immune dans laquelle les patients d&#xE9;veloppent des autoanticorps &#xE0; l&#x26;#39;ADN, les histones, et souvent &#xE0; des prot&#xE9;ines des neutrophiles. Ces complexes immuns forme qui sont pathog&#xE8;nes et peuvent provoquer une n&#xE9;phrite lupique. Chez les patients lupiques, les infections peuvent d&#xE9;clencher des fus&#xE9;es &#xE9;clairantes et sont une cause majeure de mortalit&#xE9;. Les neutrophiles r&#xE9;pondre aux infections et de lib&#xE9;rer des pi&#xE8;ges extracellulaires (filets), qui sont des antimicrobiens et sont constitu&#xE9;s d&#x26;#39;ADN, les histones, prot&#xE9;ines et des neutrophiles. Le retrait rapide de la NET peut &#xEA;tre cruciale pour l&#x26;#39;hom&#xE9;ostasie tissulaire afin d&#x26;#39;&#xE9;viter la pr&#xE9;sentation de l&#x26;#39;auto-antig&#xE8;nes. Nous avons test&#xE9; l&#x26;#39;hypoth&#xE8;se selon laquelle les patients lupiques ne pouvez pas effacer NET, ce qui contribue &#xE0; la pathogen&#xE8;se de la n&#xE9;phropathie lupique. Ici, nous montrons que DNase1 endonucl&#xE9;ase s&#xE9;rum est essentielle pour le d&#xE9;montage des filets. Fait int&#xE9;ressant, un sous-ensemble de s&#xE9;rums NET d&#xE9;grad&#xE9;es patients lupiques &#xAB;mal. Deux m&#xE9;canismes caus&#xE9; cette d&#xE9;gradation douteux, d&#xE9;duction faite: (i) la pr&#xE9;sence d&#x26;#39;inhibiteurs DNase1 ou (ii) l&#x26;#39;anti-NET anticorps emp&#xEA;ch&#xE9; DNase1 l&#x26;#39;acc&#xE8;s aux moustiquaires. D&#xE9;pr&#xE9;ciation de la fonction DNase1 et l&#x26;#39;&#xE9;chec de d&#xE9;manteler NET en corr&#xE9;lation avec une atteinte r&#xE9;nale. Par cons&#xE9;quent, l&#x26;#39;identification des patients atteints de qui ne peut pas d&#xE9;manteler NET pourrait &#xEA;tre un indicateur utile de l&#x26;#39;atteinte r&#xE9;nale. En outre, NET pourrait repr&#xE9;senter une cible th&#xE9;rapeutique dans le lupus.

D&#xE9;pr&#xE9;ciation de la d&#xE9;gradation des neutrophiles pi&#xE8;ge extracellulaire est associ&#xE9;e atteints de n&#xE9;phrite lupique

Systemischer Lupus erythematodes (SLE) ist eine Autoimmunerkrankung, die in der Patienten Autoantik&ouml;rper DNA, Histone, und oft neutrophil Proteine entwickeln. Diese Form-Immunkomplexe, die pathogenen und Lupusnephritis verursachen k&ouml;nnen. Bei SLE-Patienten Infektionen k&ouml;nnen Fackeln initiieren und sind eine der Hauptursachen der Sterblichkeit. Neutrophile auf Infektionen zu reagieren und extrazellul&auml;re Traps (NETs), die antimikrobielle und bestehen aus DNA, Histone und neutrophil Proteine freizugeben. Die rechtzeitige Entfernung der Netze m&ouml;glicherweise entscheidend f&uuml;r die Gewebe-Hom&ouml;ostase, Pr&auml;sentation der selbst-Antigene zu vermeiden. Wir testeten die Hypothese, dass SLE Patienten Netze, einen Beitrag zur Pathogenese der Lupusnephritis l&ouml;schen nicht m&ouml;glich. Hier zeigen wir, dass das Serum-Endonuklease DNase1 f&uuml;r Demontage der Netze unverzichtbar ist. Interessanterweise degradiert eine Teilmenge der SLE-Patienten Sera Netze schlecht. Zwei Mechanismen verursacht dies beeintr&auml;chtigt NET Abbau: (i) das Vorhandensein von DNase1 Inhibitoren oder (Ii) Anti-NET Antik&ouml;rper verhinderten den DNase1 Zugang zu Netzen. Beeintr&auml;chtigung der DNase1-Funktion und scheitern, Netze zu zerschlagen korreliert mit Beteiligung der Niere. Daher m&ouml;glicherweise die Identifizierung von SLE-Patienten, die Netze zu zerschlagen, kann kein n&uuml;tzlicher Indikator der Nierenbeteiligung. Dar&uuml;ber hinaus k&ouml;nnen Netze ein therapeutisches Ziel im SLE darstellen.

Wertminderung von neutrophil extrazellul&auml;re Trap Abbau ist Lupusnephritis zugeordnet.

Lupus eritematoso sistemico (Les) &egrave; una malattia autoimmune in cui i pazienti sviluppano autoanticorpi anti DNA, istoni e spesso le proteine dei neutrofili. Questi complessi immuni di forma che sono patogeni e possono causare nefrite lupica. In pazienti affetti da Les, le infezioni possono avviare chiarori e sono delle principali cause di mortalit&agrave;. Neutrofili rispondono alle infezioni e rilasciare trappole extracellulare (reti), che sono antimicrobici e sono costituiti da DNA, istoni e proteine dei neutrofili. La tempestiva rimozione di reti pu&ograve; essere cruciale per l&#39;omeostasi del tessuto evitare la presentazione di antigeni self. Abbiamo testato l&#39;ipotesi che i pazienti di SLE non possono cancellare le reti, contribuendo alla patogenesi della nefrite lupica. Qui vi mostriamo che endonucleasi siero DNase1 sono essenziale per lo smontaggio delle reti. &Egrave; interessante notare che, un sottoinsieme dei sieri dei pazienti di SLE degradata reti scarsamente. Due meccanismi causati questo alterato netto degrado: anticorpi (i) la presenza di inibitori DNase1 o (ii) anti-NET impedito DNase1 accesso alle reti. Compromissione della funzione DNase1 e fallimento per smantellare le reti correlate con coinvolgimento renale. Quindi, identificazione dei pazienti di SLE che non &egrave; possibile smantellare le reti potrebbe essere un indicatore utile del coinvolgimento renale. Inoltre, le reti potrebbero rappresentare un obiettivo terapeutico in SLE.

Compromissione della degradazione trappola extracellulari del neutrofilo &egrave; associato con nefrite lupica.

&#x5168;&#x8EAB;&#x6027;&#x30A8;&#x30EA;&#x30C6;&#x30DE;&#x30C8;&#x30FC;&#x30C7;&#x30B9;&#xFF08;SLE&#xFF09;&#x306E;&#x60A3;&#x8005;&#x304C;DNA&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x3001;&#x3057;&#x3070;&#x3057;&#x3070;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x3078;&#x306E;&#x6297;&#x4F53;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x305F;&#x81EA;&#x5DF1;&#x514D;&#x75AB;&#x75BE;&#x60A3;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30E0;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x8907;&#x5408;&#x4F53;&#x306F;&#x3001;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x814E;&#x708E;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002; SLE&#x60A3;&#x8005;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x304C;&#x30D5;&#x30EC;&#x30A2;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3057;&#x3001;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7387;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x611F;&#x67D3;&#x3068;&#x6297;&#x83CC;&#x85AC;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x3001;DNA&#x3001;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;&#x3067;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#xFF08;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#xFF09;&#x306B;&#x5BFE;&#x5FDC;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30BF;&#x30A4;&#x30E0;&#x30EA;&#x30FC;&#x306A;&#x9664;&#x53BB;&#x306F;&#x3001;&#x81EA;&#x5DF1;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x63D0;&#x793A;&#x3092;&#x907F;&#x3051;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x7D44;&#x7E54;&#x306E;&#x6052;&#x5E38;&#x6027;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x814E;&#x708E;&#x306E;&#x75C5;&#x56E0;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x3057;&#x3001;SLE&#x60A3;&#x8005;&#x306F;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3068;&#x3044;&#x3046;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x3092;&#x691C;&#x8A3C;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x8840;&#x6E05;&#x30CC;&#x30AF;&#x30EC;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;DNase1&#x304C;&#x89E3;&#x4F53;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4E0D;&#x53EF;&#x6B20;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x306B;&#x3001;&#x4E0D;&#x5341;&#x5206;&#x306A;SLE&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x8840;&#x6E05;&#x304C;&#x52A3;&#x5316;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3064;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x969C;&#x5BB3;NET&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x306F;&#x3001;&#xFF08;i&#xFF09;DNase1&#x963B;&#x5BB3;&#x5264;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#xFF08;ii&#xFF09;&#x6297;-NET&#x6297;&#x4F53;&#x306F;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;DNase1&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x3092;&#x9632;&#x6B62;&#x3057;&#x305F;&#x3002; DNase1&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x814E;&#x81D3;&#x306E;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3068;&#x76F8;&#x95A2;NET&#x3092;&#x89E3;&#x4F53;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x969C;&#x5BB3;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x305F;&#x969C;&#x5BB3;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x89E3;&#x4F53;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x305B;&#x3093;SLE&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x540C;&#x5B9A;&#x306F;&#x3001;&#x814E;&#x969C;&#x5BB3;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x306A;&#x6307;&#x6A19;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x307E;&#x305B;&#x3093;&#x3002;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x30CD;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F;&#x3001;SLE&#x306E;&#x6CBB;&#x7642;&#x76EE;&#x6A19;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x7D30;&#x80DE;&#x5916;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30D7;&#x52A3;&#x5316;&#x306E;&#x6E1B;&#x640D;&#x306F;&#x3001;&#x30EB;&#x30FC;&#x30D7;&#x30B9;&#x814E;&#x708E;&#x306B;&#x95A2;&#x4FC2;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#xC804;&#xC2E0; &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; (SLE)&#xC740; &#xC790;&#xAC00; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC9C8;&#xD658; &#xD658;&#xC790; &#xC790;&#xAC00; DNA, &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC790;&#xC8FC; &#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC591;&#xC2DD; &#xBA74;&#xC5ED;&#xC131;&#xC774; &#xC788;&#xB294; &#xBCF5;&#xD569;&#xBB3C;&#xC744; &#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC;&#xC744; &#xC77C;&#xC73C;&#xD0AC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. SLE &#xD658;&#xC790;&#xC5D0;&#xC11C; &#xAC10;&#xC5FC; &#xC870;&#xBA85;&#xD0C4;&#xC744; &#xC2DC;&#xC791;&#xD560; &#xC218;&#xC640; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xB960;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xC6D0;&#xC778;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xC751;&#xB2F5; &#xAC10;&#xC5FC; &#xD558; &#xACE0; &#xD56D;&#xADE0; &#xC131; &#xACE0; DNA&#xC640; &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4;, &#xD638; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xB9CC;&#xB4E4;&#xC5B4;&#xC9C4; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD2B8;&#xB7A9; (&#xADF8;&#xBB3C;) &#xCD9C;&#xC2DC;. &#xADF8;&#xBB3C;&#xC758; &#xC801;&#xC2DC; &#xC81C;&#xAC70; &#xC870;&#xC9C1;&#xC758; &#xD56D;&#xC0C1;&#xC131;&#xC744; &#xD53C;&#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC790;&#xAE30;-&#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0;&#xC758; &#xD504;&#xB808; &#xC820; &#xD14C;&#xC774; &#xC158;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xAC00;&#xC124; SLE &#xD658;&#xC790; &#xADF8;&#xBB3C;, &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC;&#xC758; &#xBCD1; &#xC778;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xD558; &#xACE0; &#xC120;&#xD0DD;&#xC744; &#xCDE8;&#xC18C;&#xD560; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8; &#xD608; &#xCCAD; endonuclease DNase1 &#xADF8;&#xBB3C;&#xC758; &#xD574;&#xCCB4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC218;&#xC801;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD765;&#xBBF8;&#xB86D;&#xAC8C;&#xB3C4;, SLE &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC138;&#xB77C;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC740; &#xC800;&#xC870;&#xD55C; &#xADF8;&#xBB3C; &#xC800;&#xD558;. &#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC778; NET &#xC800;&#xD558; &#xC7A5;&#xC560;: (i) DNase1 &#xC5B5;&#xC81C;&#xC81C; &#xB610;&#xB294; (ii) Anti-net&#xC758; &#xC874;&#xC7AC; &#xD56D; &#xCCB4; &#xADF8;&#xBB3C;&#xC5D0; DNase1 &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. DNase1 &#xAE30;&#xB2A5;&#xACFC; &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; &#xBD84;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC2E4;&#xD328;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xCC38;&#xC5EC;&#xC640; &#xC0C1;&#xAD00; &#xB41C;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xADF8;&#xBB3C;&#xC744; &#xD574;&#xCCB4; &#xC218; &#xC5C6;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; SLE &#xD658;&#xC790; &#xC2DD;&#xBCC4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xAD00;&#xB828;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xC9C0;&#xD45C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, &#xADF8;&#xBB3C; SLE&#xC5D0;&#xC11C; &#xCE58;&#xB8CC; &#xB300;&#xC0C1;&#xC744; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0BC; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xD638; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; &#xD2B8;&#xB7A9; &#xC800;&#xD558;&#xC758; &#xC7A5;&#xC560;&#xB294; &#xB8E8; &#xD478; &#xC2A4; &#xC2E0;&#xC7A5; &#xC5FC;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xACB0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

El lupus eritematoso sist&#xE9;mico (LES) es una enfermedad autoinmune en la cual los pacientes desarrollan anticuerpos contra el ADN, las histonas, y con frecuencia a las prote&#xED;nas de los neutr&#xF3;filos. Estos complejos inmunes de forma que son pat&#xF3;genos y pueden causar nefritis l&#xFA;pica. En los pacientes con LES, las infecciones pueden iniciar las erupciones y son una causa importante de mortalidad. Los neutr&#xF3;filos responden a las infecciones y liberar trampas extracelulares (TNE), que son antimicrobianos y est&#xE1;n hechos de ADN, histonas, prote&#xED;nas y neutr&#xF3;filos. La eliminaci&#xF3;n oportuna de los TNE puede ser crucial para la homeostasis del tejido para evitar la presentaci&#xF3;n de ant&#xED;genos propios. Hemos probado la hip&#xF3;tesis de que los pacientes con LES no se puede borrar NET, lo que contribuye a la patog&#xE9;nesis de la nefritis l&#xFA;pica. Aqu&#xED; nos muestran que DNase1 endonucleasa de suero es esencial para el desmontaje de los TNE. Curiosamente, un subgrupo de pacientes con LES NET de sueros degradados mal. Dos mecanismos de esta degradaci&#xF3;n causada deteriorada NET: (i) la presencia de inhibidores de DNase1 o (ii) anticuerpos anti-NET impedido DNase1 acceso a las redes. Deterioro de la funci&#xF3;n DNase1 y la falta de desmantelar las redes de correlaci&#xF3;n con compromiso renal. Por lo tanto, la identificaci&#xF3;n de pacientes con LES que no pueden desmantelar las redes podr&#xED;a ser un indicador &#xFA;til de la afectaci&#xF3;n renal. Por otra parte, NET podr&#xED;a representar una diana terap&#xE9;utica en el LES.

Deterioro del valor de la degradaci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos trampa extracelular est&#xE1; asociada con nefritis l&#xFA;pica

&#x81F4;&#x75C5;&#x6027;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9634;&#x6027;&#x83CC;&#x4F7F;&#x7528;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5206;&#x6CCC;&#x7CFB;&#x7EDF; &#xFF08;TTSS&#xFF09; &#x4F20;&#x9012;&#x5230;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6BD2;&#x529B;&#x56E0;&#x5B50;&#x3002;&#x5176;&#x4E2D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x7EB3;&#x5165;&#x65E5;&#x76CA; TTSS &#x7684;&#x987A;&#x5E8F;&#x662F;&#x5F88;&#x597D;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#xFF0C;&#x5E95;&#x5C42;&#x7684;&#x5927;&#x4F1A;&#x673A;&#x5236;&#x867D;&#x4ECD;&#x4E0D;&#x6E05;&#x695A;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; TTSS &#x9488; protomer refolds&#xFF0C;&#x81EA;&#x53D1;&#x5730;&#x628A;&#x9488;&#x4ECE;&#x8FDC;&#x7AEF;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F00;&#x53D1;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x7A81;&#x53D8;&#x4F53;&#x9488; protomer &#x4ECE;&#x798F;&#x6C0F;&#x5FD7;&#x8D3A;&#x83CC;&#x548C;&#x9F20;&#x4F24;&#x5BD2;&#x6C99;&#x95E8;&#x6C0F;&#x83CC;&#xFF0C;&#x7814;&#x7A76;&#x5176;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x663E;&#x793A; protomer &#x90E8;&#x5206; refolds &#x4ECE;&#x963F;&#x5C14;&#x6CD5;&#x87BA;&#x65CB;&#x6210; &beta;-&#x94FE;&#x6784;&#x8C61;&#x5F62;&#x6210; TTSS &#x9488;&#x3002;&#x91CD;&#x7EC4;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x8868;&#x660E;&#x9488;&#x751F;&#x957F;&#x4E0D;&#x9700;&#x8981; ATP&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x7ED3;&#x6784;&#x4E0A;&#x76F8;&#x5173;&#x7684;&#x97AD;&#x6BDB;&#x7CFB;&#x7EDF;&#xFF0C;&#x50CF;&#x9488;&#x4F38;&#x957F;&#x7684;&#x4E9A;&#x57FA;&#x805A;&#x5408;&#x7684;&#x8FDC;&#x7AEF;&#xFF0C;&#x4F46;&#x9700;&#x8981; protomer &#x590D;&#x6027;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x4E00;&#x4E2A;&#x8D77;&#x59CB;&#x70B9;&#x6765;&#x4E86;&#x89E3;&#x5206;&#x5B50;&#x7EC4;&#x88C5;&#x673A;&#x5236;&#x548C;&#x539F;&#x5B50;&#x4E00;&#x7EA7; TTSS &#x7684;&#x7ED3;&#x6784;&#x3002;

&#x9700;&#x8981;&#x5BF9;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x96C6;&#x7684;&#x7C7B;&#x578B;&#x4E09;&#x4E2A;&#x5206;&#x6CCC;&#x9488;&#x86CB;&#x767D;&#x590D;&#x6027;&#x3002;

Pathogenic Gram-negative bacteria use a type three secretion system (TTSS) to deliver virulence factors into host cells. Although the order in which proteins incorporate into the growing TTSS is well described, the underlying assembly mechanisms are still unclear. Here we show that the TTSS needle protomer refolds spontaneously to extend the needle from the distal end. We developed a functional mutant of the needle protomer from Shigella flexneri and Salmonella typhimurium to study its assembly in vitro. We show that the protomer partially refolds from alpha-helix into beta-strand conformation to form the TTSS needle. Reconstitution experiments show that needle growth does not require ATP. Thus, like the structurally related flagellar systems, the needle elongates by subunit polymerization at the distal end but requires protomer refolding. Our studies provide a starting point to understand the molecular assembly mechanisms and the structure of the TTSS at atomic level.

Protein refolding is required for assembly of the type three secretion needle.

Pathog&#xE8;nes Gram n&#xE9;gatif utiliser un syst&#xE8;me de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type trois (SSTT) pour d&#xE9;livrer des facteurs de virulence dans des cellules h&#xF4;tes. Bien que l&#x26;#39;ordre dans lequel les prot&#xE9;ines incorporer dans le SSTT de plus en plus est bien d&#xE9;crite, les m&#xE9;canismes d&#x26;#39;assemblage sous-jacents sont encore mal connues. Ici, nous montrons que le protom&#xE8;re aiguille SSTT replie spontan&#xE9;ment pour &#xE9;tendre l&#x26;#39;aiguille de l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; distale. Nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un mutant fonctionnel du protom&#xE8;re aiguille de Shigella flexneri et Salmonella typhimurium pour &#xE9;tudier son assembl&#xE9;e in vitro. Nous montrons que le protom&#xE8;re replie partiellement &#xE0; partir de l&#x26;#39;h&#xE9;lice alpha en b&#xEA;ta-brin conformation pour former l&#x26;#39;aiguille SSTT. Des exp&#xE9;riences de reconstitution montrent que la croissance aiguille ne n&#xE9;cessite pas d&#x26;#39;ATP. Ainsi, comme les syst&#xE8;mes structurellement li&#xE9;s flagellaires, l&#x26;#39;aiguille s&#x26;#39;allonge par polym&#xE9;risation sous-unit&#xE9; &#xE0; l&#x26;#39;extr&#xE9;mit&#xE9; distale, mais n&#xE9;cessite repliement protom&#xE8;re. Nos &#xE9;tudes apportent un point de d&#xE9;part pour comprendre les m&#xE9;canismes d&#x26;#39;assemblage mol&#xE9;culaire et la structure des SSTT au niveau atomique.

Repliement des prot&#xE9;ines est n&#xE9;cessaire pour le montage de l&#x26;#39;aiguille de s&#xE9;cr&#xE9;tion de type trois

Pathogene Gramnegative Bakterien mithilfe einer Art drei Sekretionssystem (TTSS) um Virulenzfaktoren in Wirtszellen zu &uuml;bermitteln. Obwohl die Reihenfolge, in der Proteine in der wachsenden TTSS integrieren, gut beschrieben ist, sind die zugrunde liegenden Mechanismen der Versammlung noch unklar. Hier zeigen wir, dass die TTSS Nadel Protomer Refolds spontan um die Nadel aus dem distalen Ende zu erweitern. Wir entwickelten eine funktionale Mutante von der Nadel Protomer von Shigella Flexneri und Salmonella Typhimurium seiner in-vitro-Assembly zu studieren. Wir zeigen, dass die Protomer teilweise aus &alpha;-Helix in Beta-Strang Konformation TTSS Nadel zu bilden refolds. Rekonstitution Experimente zeigen, dass die Nadel Wachstum ATP nicht erforderlich ist. So wie die strukturverwandter Flimmerband Systeme, die Nadel Kieme&ouml;ffnungen durch Untereinheit Polymerisation am distalen Ende aber Protomer R&uuml;ckfaltung erfordert. Unsere Studien stellen einen Ausgangspunkt um die molekulare Montage-Mechanismen und die Struktur der TTSS auf atomarer Ebene zu verstehen.

Proteinr&uuml;ckfaltung ist erforderlich f&uuml;r die Montage der Typ drei Sekretion Nadel.

Batteri patogeni gram-negativi utilizzano un sistema di secrezione tre tipi (SS3) per fornire fattori di virulenza in cellule ospiti. Anche se l&#39;ordine in cui le proteine incorporano nella SS3 crescente &egrave; ben descritto, sono ancora poco chiari i meccanismi di assemblaggio sottostante. Qui vi mostriamo che la SS3 ago protomer ripiegamenti spontaneamente per estendere l&#39;ago dall&#39;estremit&agrave; distale. Abbiamo sviluppato un mutante funzionale dell&#39;ago protomer da Shigella flexneri e Salmonella typhimurium per studiare la sua Assemblea in vitro. Mostriamo che la protomer refolds parzialmente da alfa-elica in conformazione beta-filo per formare l&#39;ago SS3. Ricostituzione esperimenti mostrano che ago crescita non richiede ATP. Cos&igrave;, come i sistemi flagellari strutturalmente correlati, l&#39;ago si allunga per polimerizzazione di subunit&agrave; all&#39;estremit&agrave; distale ma richiede protomer ripiegamento. I nostri studi forniscono un punto di partenza per comprendere i meccanismi di assemblaggio molecolare e la struttura del SS3 a livello atomico.

Ripiegamento di proteine &egrave; necessaria per il montaggio dell&#39;ago tipo tre secrezione.

&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x9670;&#x6027;&#x83CC;&#x306F;&#x3001;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x3078;&#x306E;&#x75C5;&#x539F;&#x6027;&#x56E0;&#x5B50;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;3&#x5206;&#x6CCC;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#xFF08;TTSS&#xFF09;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306F;&#x6210;&#x9577;TTSS&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x3080;&#x9806;&#x5E8F;&#x306B;&#x306F;&#x3088;&#x304F;&#x8A18;&#x8F09;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x57FA;&#x672C;&#x7684;&#x306A;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306F;&#x4F9D;&#x7136;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x4E0D;&#x660E;&#x3067;&#x3042;&#x308B;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;TTSS&#x91DD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x306F;&#x3001;&#x5148;&#x7AEF;&#x304B;&#x3089;&#x91DD;&#x3092;&#x62E1;&#x5F35;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x81EA;&#x767A;&#x7684;&#x306B;refolds&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;in vitro&#x3067;&#x305D;&#x306E;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EA;&#x3092;&#x52C9;&#x5F37;&#x3059;&#x308B;&#x8D64;&#x75E2;&#x83CC;&#x3068;&#x30CD;&#x30BA;&#x30DF;&#x30C1;&#x30D5;&#x30B9;&#x83CC;&#x304B;&#x3089;&#x91DD;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x5909;&#x7570;&#x4F53;&#x3092;&#x958B;&#x767A;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x304C;&#x90E8;&#x5206;&#x7684;&#x306B;TTSS&#x91DD;&#x3092;&#x5F62;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x3B2;-&#x9396;&#x30B3;&#x30F3;&#x30D5;&#x30A9;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3B1;-&#x30D8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x304B;&#x3089;refolds&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x518D;&#x69CB;&#x6210;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;&#x91DD;&#x306E;&#x6210;&#x9577;&#x306F;ATP&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x69CB;&#x9020;&#x7684;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x97AD;&#x6BDB;&#x30B7;&#x30B9;&#x30C6;&#x30E0;&#x3068;&#x540C;&#x69D8;&#x306B;&#x3001;&#x91DD;&#x304C;&#x9060;&#x4F4D;&#x7AEF;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30E6;&#x30CB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x91CD;&#x5408;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F38;&#x9577;&#x304C;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30DE;&#x30FC;&#x306E;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3092;&#x5FC5;&#x8981;&#x3068;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x5206;&#x5B50;&#x96C6;&#x5408;&#x4F53;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3068;&#x539F;&#x5B50;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3067;&#x306E;TTSS&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x3092;&#x7406;&#x89E3;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x51FA;&#x767A;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EA;&#x30D5;&#x30A9;&#x30FC;&#x30EB;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D7;&#x4E09;&#x5206;&#x6CCC;&#x91DD;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x7ACB;&#x3066;&#x304C;&#x5FC5;&#x8981;&#x3067;&#x3059;

&#xBCD1;&#xC6D0; &#xC131; &#xADF8;&#xB78C; &#xC74C;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB3C5;&#xC131; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xD615; 3 &#xBD84; &#xBE44; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; (TTSS)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; TTSS&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xC21C;&#xC11C;&#xB294; &#xC798; &#xC124;&#xBA85;, &#xAE30;&#xBCF8; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xC544;&#xC9C1; &#xBA85;&#xD655; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; TTSS protomer refolds &#xC2A4;&#xCF54;&#xD504; &#xB05D;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xB298;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558; &#xC5EC; &#xC790;&#xBC1C;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC14;&#xB298;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC;&#xB97C; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC5F0;&#xAD6C; Shigella flexneri &#xBC0F; &#xC0B4; &#xBAA8; &#xB12C; &#xB77C; &#xD2F0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC14;&#xB298; protomer&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5; &#xB3CC;&#xC5F0;&#xBCC0;&#xC774; &#xAC1C;&#xBC1C;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB97C; protomer &#xBD80;&#xBD84;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; refolds &#xC54C;&#xD30C;-&#xD5EC;&#xB9AD;&#xC2A4;&#xC5D0;&#xC11C; TTSS &#xBC14;&#xB298;&#xC744; &#xD615;&#xC131; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xBCA0;&#xD0C0; &#xAC00;&#xB2E5; &#xB098; &#xB780;&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xC5EC;&#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC7AC;&#xAD6C;&#xC131; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC14;&#xB298; &#xC131;&#xC7A5; ATP&#xB97C; &#xD544;&#xC694;&#xB85C; &#xD558;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xAD6C;&#xC870;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xAD00;&#xB828;&#xB41C; flagellar &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xCC98;&#xB7FC; &#xBC14;&#xB298; elongates &#xC2A4;&#xCF54;&#xD504; &#xB05D;&#xC5D0; &#xC18C; &#xB2E8;&#xC704; &#xC911; &#xD569; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; protomer refolding &#xD544;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xB294; &#xBD84;&#xC790; &#xC5B4;&#xC148;&#xBE14;&#xB9AC; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998; &#xBC0F; &#xC6D0;&#xC790; &#xC218;&#xC900;&#xC5D0;&#xC11C; TTSS&#xC758; &#xAD6C;&#xC870;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xC2DC;&#xC791; &#xC9C0;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; refolding &#xC720;&#xD615; 3 &#xBD84; &#xBE44; &#xBC14;&#xB298;&#xC758; &#xC870;&#xB9BD;&#xC5D0; &#xD544;&#xC694;&#xD55C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Pat&#xF3;genas bacterias Gram-negativas utilizar un tipo de sistema de secreci&#xF3;n de tres (SSTT) para entregar factores de virulencia en las c&#xE9;lulas hu&#xE9;sped. Aunque el orden en que las prote&#xED;nas incorporar en el SSTT creciente est&#xE1; bien descrito, los mecanismos de montaje subyacentes son todav&#xED;a no est&#xE1; claro. Aqu&#xED; nos muestran que la aguja prot&#xF3;mero SSTT repliega espont&#xE1;neamente para extender la aguja desde el extremo distal. Hemos desarrollado un mutante funcional de la prot&#xF3;mero aguja de Shigella flexneri y Salmonella typhimurium para estudiar su montaje in vitro. Se demuestra que la parte prot&#xF3;mero repliega a partir de alfa-h&#xE9;lice en la conformaci&#xF3;n beta-cadena para formar la aguja SSTT. Experimentos muestran que el crecimiento de reconstituci&#xF3;n aguja no requiere ATP. As&#xED;, como los sistemas estructuralmente relacionados flagelares, la aguja se alarga mediante polimerizaci&#xF3;n subunidad en el extremo distal, sino que requiere replegamiento prot&#xF3;mero. Nuestros estudios proporcionan un punto de partida para comprender los mecanismos moleculares de montaje y la estructura de los SSTT a nivel at&#xF3;mico.

Replegamiento prote&#xED;na es necesaria para el montaje de la aguja de secreci&#xF3;n tipo tres

&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C; (PCa) &#x662F;&#x5728;&#x897F;&#x65B9;&#x4E16;&#x754C;&#x7537;&#x6027;&#x764C;&#x75C7;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x4E2A;&#x4E3B;&#x8981;&#x539F;&#x56E0;&#x3002;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x8BC1;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x6162;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x53EF;&#x4EE5;&#x542F;&#x52A8;&#x7684;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x4E00;&#x4E2A;&#x91CD;&#x8981;&#x56E0;&#x7D20;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x7684;&#x5DE5;&#x4F5C;&#x5DF2;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x75E4;&#x75AE;&#x4E19;&#x9178;&#x538C;&#x6C27;&#x7684;&#x9769;&#x5170;&#x6C0F;&#x9633;&#x6027;&#x7EC6;&#x83CC;&#xFF0C;&#x53F6;&#x764C;&#x6027;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x68C0;&#x6D4B;&#x7387;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x539F;&#x4F4D;&#x514D;&#x75AB;&#x8367;&#x5149; &#xFF08;&#x5728;&#x590F;&#x5A01;&#x5937;&#xFF09;&#xFF0C;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x4E2D;&#x627E; 58 &#x4E2A; 71 &#xFF08;81.7%&#xFF09; &#x6D4B;&#x8BD5;&#x764C;&#x6027;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x6837;&#x672C;&#xFF0C;&#x4F46;&#x662F;&#x6CA1;&#x6709;&#x4ECE;&#x5065;&#x5EB7;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7EC4;&#x7EC7; &#xFF08;20 &#x6837;&#x672C;&#xFF09; &#x548C;&#x5176;&#x4ED6;&#x764C;&#x7EC4;&#x7EC7;&#x5207;&#x7247; &#xFF08;59 &#x5988;&#x5988;&#x764C;&#x6837;&#x672C;&#xFF09;&#x3002;&#x751F;&#x6D3B;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x7EC6;&#x83CC;&#x5206;&#x79BB;&#x5230;&#x53F6;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x764C;&#x548C;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE; RWPE1 &#x4E0E;&#x6C57;&#x817A;&#x3002;&#x57FA;&#x56E0;&#x82AF;&#x7247;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x660E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56DE;&#x5E94;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x4E0E;&#x5F3A;&#x5927;&#x7684;&#x591A;&#x65B9;&#x9762;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#x3002;&#x79EF;&#x6781;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C;&#x8D8B;&#x5316;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x5982;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-6 &#x548C;&#x767D;&#x4ECB;&#x7D20;-8&#xFF0C;&#x4ECE;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x8BC1;&#x5B9E;&#x3002;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x662F;&#x6709;&#x53EF;&#x80FD;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50; NF-&kappa; B &#x548C; STAT3&#xFF0C;&#x56E0;&#x4E3A;&#x4E24;&#x8005;&#x5728;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x611F;&#x67D3;&#x540E;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53CD;&#x5E94;&#x8FD8;&#x5305;&#x62EC; COX2 &#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x7D20;&#x548C;&#x7EA4;&#x6EB6;&#x9176;&#x539F;&#x57FA;&#x8D28;&#x91D1;&#x5C5E;&#x86CB;&#x767D;&#x9176;&#x901A;&#x8DEF;&#x7684;&#x6FC0;&#x6D3B;&#x3002;&#x957F;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x4E8E;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x6539;&#x53D8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x542F;&#x7528;&#x7887;&#x6CCA;&#x5904;&#x72EC;&#x7ACB;&#x751F;&#x957F;&#x7684;&#x53D7;&#x611F;&#x67D3;&#x7684;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x800C;&#x542F;&#x52A8;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5316;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8868;&#x660E;&#x4F53;&#x80B2;&#x75E4;&#x75AE;&#x611F;&#x67D3;&#x53EF;&#x80FD;&#x662F;&#x4E00;&#x4E2A;&#x56E0;&#x7D20;&#x7684;&#x5F00;&#x59CB;&#x6216;&#x4E3B;&#x6210;&#x5206;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x8FDB;&#x5C55;&#x3002;

&#x5728;&#x75C5;&#x53F6;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x548C;&#x5176;&#x708E;&#x75C7;&#x548C;&#x8F6C;&#x53D8;&#x5BF9;&#x524D;&#x5217;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D3B;&#x6027;&#x7684;&#x75E4;&#x75AE;&#x4E19;&#x9178;&#x6746;&#x83CC;&#x7684;&#x6D41;&#x884C;&#x60C5;&#x51B5;&#x3002;

Prostate cancer (PCa) is the second leading cause of male cancer deaths in the Western world. Mounting evidence has revealed that chronic inflammation can be an important initiating factor of PCa. Recent work has detected the anaerobic Gram-positive bacterium Propionibacterium acnes in cancerous prostates, but with wide-ranging detection rates. Here, using in situ immunofluorescence (ISIF), P. acnes was found in 58 out of 71 (81.7%) tested cancerous prostate tissue samples, but was absent from healthy prostate tissues (20 samples) and other cancerous tissue biopsies (59 mamma carcinoma samples). Live P. acnes bacteria were isolated from cancerous prostates and cocultured with the prostate epithelial cell line RWPE1. Microarray analysis showed that the host cell responded to P. acnes with a strong multifaceted inflammatory response. Active secretion of cytokines and chemokines, such as IL-6 and IL-8, from infected cells was confirmed. The host cell response was likely mediated by the transcriptional factors NF-ÎºB and STAT3, which were both activated upon P. acnes infection. The P. acnes-induced host cell response also included the activation of the COX2-prostaglandin, and the plasminogen-matrix metalloproteinase pathways. Long-term exposure to P. acnes altered cell proliferation, and enabled anchorage-independent growth of infected epithelial cells, thus initiating cellular transformation. Our results suggest that P. acnes infection could be a contributing factor to the initiation or progression of PCa.

Prevalence of Propionibacterium acnes in diseased prostates and its inflammatory and transforming activity on prostate epithelial cells.

Cancer de la prostate (APC) est la deuxi&egrave;me cause de d&eacute;c&egrave;s par cancer masculin dans le monde occidental. Montage des &eacute;l&eacute;ments de preuve a r&eacute;v&eacute;l&eacute; que l&#39;inflammation chronique peut &ecirc;tre un important facteur d&eacute;clencheur d&#39;APC. Des travaux r&eacute;cents a d&eacute;tect&eacute; la bact&eacute;rie Gram positif ana&eacute;robie Propionibacterium acnes canc&eacute;reuse de la prostate, mais avec des taux de d&eacute;tection de grande envergure. Ici, l&#39;utilisation in situ par immunofluorescence (ISIF), P. acnes trouvait dans 58 sur 71 (81,7 %) test&eacute; &eacute;chantillons de tissus canc&eacute;reux de la prostate, mais &eacute;tait absent de tissus de la prostate en bonne sant&eacute; (20 &eacute;chantillons) et d&#39;autres biopsies de tissus canc&eacute;reux (59 &eacute;chantillons de carcinome de maman). Vivre P. acnes bact&eacute;ries ont &eacute;t&eacute; isol&eacute;es de canc&eacute;reuse de la prostate et co-cultiv&eacute;es avec la ligne de cellules &eacute;pith&eacute;liales prostatiques RWPE1. &laquo; Microarray &raquo; analyse a montr&eacute; que la cellule-h&ocirc;te a r&eacute;pondu &agrave; P. acnes avec une forte r&eacute;action inflammatoire aux multiples facettes. La s&eacute;cr&eacute;tion de cytokines et de chimiokines, telles que l&#39;IL-6 et IL-8, provenant de cellules infect&eacute;es active a &eacute;t&eacute; confirm&eacute;e. La r&eacute;ponse de cellule h&ocirc;te risquait m&eacute;di&eacute;e par des facteurs de transcriptionnelles NF-&kappa;B et STAT3, qui &eacute;taient tous les deux activ&eacute;s apr&egrave;s infection de P. acnes. La r&eacute;ponse des lymphocytes P. acnes induite par l&#39;h&ocirc;te inclus &eacute;galement l&#39;activation de la prostaglandine-COX2 et les voies de m&eacute;talloprot&eacute;inase de matrice du plasminog&egrave;ne. Une exposition prolong&eacute;e &agrave; la P. acnes alt&eacute;r&eacute; la prolif&eacute;ration cellulaire et a permis la croissance des cellules &eacute;pith&eacute;liales infect&eacute;es, initiant ainsi la transformation cellulaire d&#39;ancrage ind&eacute;pendant. Nos r&eacute;sultats sugg&egrave;rent que P. acnes infection pourrait &ecirc;tre un facteur contribuant &agrave; l&#39;initiation ou la progression de l&#39;APC.

Pr&eacute;valence de Propionibacterium acnes dans les malade de la prostate et ses inflammatoires et transformer l&#39;activit&eacute; sur les cellules &eacute;pith&eacute;liales prostatiques.

Prostatakrebs (PCa) ist die zweite f&uuml;hrende Ursache der m&auml;nnlichen Krebstoten in der westlichen Welt. Mehrenden Beweise hat ergeben, dass chronischer Entz&uuml;ndung ein wichtiger ausl&ouml;senden Faktor des PCa sein kann. Die j&uuml;ngsten Arbeiten hat die anaerobe grampositive Bakterium Propionibakterien Krebs Prostata, aber mit weit reichenden Erkennungsraten festgestellt. Mit in-situ Immunfluoreszenz (ISIF), p. Acnes wurde gefunden in 58 von 71 (81,7 %) getestet Prostata Krebsgewebe Proben, aber fehlte aus gesunden Prostata Gewebe (20 Proben) und andere Krebsgewebe Biopsien (59 Mamma-Karzinom-Beispiele). Leben Sie p. Acnes Bakterien wurden von Krebs Prostata isoliert und mit der Prostata Epithelzellen Linie RWPE1 cocultured. Microarray-Analyse zeigte, dass die Wirtszelle auf p. Acnes mit einer starken facettenreiche entz&uuml;ndliche Antwort reagiert. Aktive Sekretion von Zytokine und Chemokine, wie IL-6 und IL-8, von infizierten Zellen wurde best&auml;tigt. Die Zelle Wirtsantwort wurde wahrscheinlich durch die transkriptionelle Faktoren NF-&kappa;B vermittelt und STAT3, die beide waren beim p. Acnes Infektion aktiviert. Die p. Acnes induziert Zelle Wirtsantwort umfasste auch die Aktivierung der COX2-Prostaglandin und die Plasminogen-Matrix-Metalloproteasen-Bahnen. Langfristiger Exposition gegen&uuml;ber p. Acnes ver&auml;ndert Zellproliferation und Ankerplatz-unabh&auml;ngigen Wachstum von infizierten Epithelzellen, so initiieren zellul&auml;ren Transformation aktiviert. Unsere Ergebnisse legen nahe, dass p. Acnes Infektion ein beitragender Faktor zur Einleitung oder Fortschreiten der PCa sein k&ouml;nnte.

Pr&auml;valenz der Propionibakterien in Kranken Prostata und seine entz&uuml;ndliche und Transformieren von Aktivit&auml;t auf epitheliale Zellen der Prostata.

Il cancro della prostata (PCa) &egrave; la seconda principale causa di decessi per tumore maschile nel mondo occidentale. Prove di montaggio ha rivelato che l&#39;infiammazione cronica pu&ograve; essere un importante fattore scatenante della PCa. Lavoro recente ha rilevato il Propionibacterium acnes batterio Gram-positivi anaerobi in Prostate cancerose, ma con tassi di rilevamento ad ampio raggio. Qui, mediante immunofluorescenza in situ (ISIF), p. acnes &egrave; stato trovato in 58 di 71 (81.7%) testato campioni tessuto canceroso della prostata, ma era assente da tessuti sani della prostata (20 campioni) e altre biopsie di tessuti cancerosi (59 campioni di carcinoma della mamma). Live p. acnes batteri sono stati isolati da Prostate cancerose e cocultured con la linea di cellule epiteliali della prostata RWPE1. Analisi di microarray hanno dimostrato che la cellula ospite ha risposto a p. acnes con una forte risposta infiammatoria poliedrica. Attiva secrezione di citochine e chemochine, come IL-6 e IL-8, da cellule infette &egrave; stata confermata. La risposta della cellula ospite &egrave; stato probabilmente mediata dai fattori trascrizionali NF-&kappa;B e STAT3, che erano entrambi attivati su infezione da p. acnes. La risposta di cella di p. acnes-induced host incluso anche l&#39;attivazione di COX2-prostaglandina e i plasminogeno-matrix metalloproteinase percorsi. Esposizione a lungo termine per p. acnes alterata proliferazione cellulare e abilitate la crescita ancoraggio-indipendente delle cellule epiteliali infettate, iniziando cos&igrave; la trasformazione cellulare. I nostri risultati suggeriscono che l&#39;infezione da p. acnes potrebbe essere un fattore che contribuisce all&#39;iniziazione o progressione della PCa.

Prevalenza di Propionibacterium acnes prostates malato e sua infiammatoria e trasformare l&#39;attivit&agrave; su cellule epiteliali prostatiche.

&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304C;&#x3093; &#xFF08;PCa&#xFF09; &#x306F;&#x3001;&#x7537;&#x6027;&#x306E;&#x304C;&#x3093;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6B7B;&#x4EA1;&#x306E; 2 &#x756A;&#x76EE;&#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x539F;&#x56E0;&#x897F;&#x90E8;&#x306E;&#x4E16;&#x754C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x8A3C;&#x62E0;&#x3092;&#x30DE;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C8;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x6162;&#x6027;&#x708E;&#x75C7;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x958B;&#x59CB;&#x56E0;&#x5B50; PCa &#x306E;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x660E;&#x3089;&#x304B;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6700;&#x8FD1;&#x306E;&#x4ED5;&#x4E8B;&#x5ACC;&#x6C17;&#x6027;&#x30B0;&#x30E9;&#x30E0;&#x967D;&#x6027;&#x7D30;&#x83CC;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A2;&#x30AF;&#x30CD;&#x30B9;&#x304C;&#x3093;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304C;&#x5E45;&#x5E83;&#x3044;&#x691C;&#x51FA;&#x7387;&#x304C;&#x691C;&#x51FA;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;in situ &#x86CD;&#x5149; (ISIF) &#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x308F;&#x304B;&#x3063;&#x305F; 58 &#x306E;&#x3046;&#x3061;&#x30C6;&#x30B9;&#x30C8; 71 &#x3067; &#xFF08;81.7 &#xFF05;&#xFF09; &#x304C;&#x3093;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x7D44;&#x7E54;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3001;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x4F11;&#x3093;&#x3060;&#x304B;&#x3089;&#x5065;&#x5EB7;&#x306A;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x7D44;&#x7E54; &#xFF08;20 &#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#xFF09; &#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x4ED6;&#x764C;&#x6027;&#x30C6;&#x30A3;&#x30C3;&#x30B7;&#x30E5;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30D7;&#x30B7;&#x30FC; (59 mamma &#x764C;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;)&#x3002;P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x7D30;&#x83CC;&#x304C;&#x3093;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x304B;&#x3089;&#x5206;&#x96E2;&#x3055;&#x308C;, &#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30E9;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068; RWPE1 &#x3092;&#x57F9;&#x990A;&#x306B;&#x4F4F;&#x3093;&#x3067;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30DE;&#x30A4;&#x30AF;&#x30ED; &#x30A2;&#x30EC;&#x30A4;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x306F;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE; P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x5F37;&#x3044;&#x591A;&#x9762;&#x7684;&#x306A;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3068;&#x7B54;&#x3048;&#x305F;&#x3053;&#x3068;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30A2;&#x30AF;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5206;&#x6CCC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3068;&#x30B1;&#x30E2;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3001;IL-6 &#x3068; IL-8 &#x611F;&#x67D3;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x306A;&#x3069;&#x304C;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x8EE2;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50; NF-&kappa; &#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x305F;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x9AD8;&#x3044;&#x3068; P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x611F;&#x67D3;&#x306B;&#x4E21;&#x65B9;&#x3042;&#x3063;&#x305F; STAT3 &#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x8A98;&#x8D77;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306F;&#x3001;COX2 &#x30D7;&#x30ED;&#x30B9;&#x30BF;&#x30B0;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B8;&#x30F3;&#x3068;&#x30D7;&#x30E9;&#x30B9;&#x30DF;&#x30CE;&#x30FC;&#x30B2;&#x30F3; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9; &#x30DE;&#x30C8;&#x30EA;&#x30C3;&#x30AF;&#x30B9;&#x30E1;&#x30BF;&#x30ED;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C6;&#x30A2;&#x30FC;&#x30BC;&#x7D4C;&#x8DEF;&#x306E;&#x6D3B;&#x6027;&#x5316;&#x3082;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3002;P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x3078;&#x306E;&#x9577;&#x671F;&#x66B4;&#x9732;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x5909;&#x66F4;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5909;&#x63DB;&#x3092;&#x958B;&#x59CB;&#x3001;&#x611F;&#x67D3;&#x306E;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30A2;&#x30F3;&#x30AB;&#x30EC;&#x30C3;&#x30B8;&#x306B;&#x4F9D;&#x5B58;&#x3057;&#x306A;&#x3044;&#x6210;&#x9577;&#x304C;&#x6709;&#x52B9;&#x306B;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;P. &#x30CB;&#x30AD;&#x30D3;&#x611F;&#x67D3;&#x958B;&#x59CB;&#x307E;&#x305F;&#x306F; PCa &#x306E;&#x9032;&#x884C;&#x306B;&#x5BC4;&#x4E0E;&#x56E0;&#x5B50;&#x304B;&#x3082;&#x3057;&#x308C;&#x306A;&#x3044;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x793A;&#x5506;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;

&#x30D7;&#x30ED;&#x30D4;&#x30AA;&#x30CB;&#x30D0;&#x30AF;&#x30C6;&#x30EA;&#x30A6;&#x30E0;&#x30A2;&#x30AF;&#x30CD;&#x30B9;&#x75C5;&#x7684;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x3068;&#x524D;&#x7ACB;&#x817A;&#x4E0A;&#x76AE;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6D3B;&#x52D5;&#x3092;&#x5909;&#x9769;&#x3055;&#x305B;&#x3066;&#x306E;&#x6709;&#x75C5;&#x7387;&#x3002;

&#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC554; (PCa)&#xB294; &#xC11C;&#xBC29; &#xC138;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB0A8;&#xC131; &#xC554; &#xC0AC;&#xB9DD;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xC8FC;&#xC694; &#xC6D0;&#xC778;. &#xC7A5;&#xCC29; &#xC99D;&#xAC70; &#xB9CC;&#xC131; &#xC5FC;&#xC99D; Pca&#xC758; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC2DC;&#xC791; &#xC694;&#xC18C;&#xAC00; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC1D;&#xD78C; &#xBC14; &#xC788;&#xB2E4;. &#xCD5C;&#xADFC; &#xC9C1;&#xC7A5; &#xC554; &#xBCF4;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xAC80;&#xC0C9; &#xC18D;&#xB3C4;&#xC640; &#xD610; &#xAE30;&#xC131; &#xADF8;&#xB78C; &#xC591;&#xC131; &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; Propionibacterium acnes &#xAC10;&#xC9C0; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6D0;&#xB798;&#xC758; &#xC7A5;&#xC18C;&#xC5D0; &#xBA74;&#xC5ED; &#xD615;&#xAD11; &#xAC80;&#xC0AC; (ISIF)&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xD53C;. acnes&#xB294; &#xCC3E;&#xC558;&#xC9C0;&#xB9CC; 58 &#xC911; 71 (81.7%) &#xD14C;&#xC2A4;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC554; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0D8;&#xD50C;, &#xACB0; &#xC11D; &#xD588;&#xB2E4; &#xAC74;&#xAC15; &#xD55C; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC870;&#xC9C1; (20 &#xC0D8;&#xD50C;) &#xBC0F; &#xAE30;&#xD0C0; &#xC554; &#xC870;&#xC9C1; &#xC0DD; &#xAC80; (59 &#xB9D8; &#xB9C8; &#xC554; &#xC885; &#xC0D8;&#xD50C;). &#xD53C;. acnes &#xBC15;&#xD14C;&#xB9AC;&#xC544; &#xC554; &#xBCF4;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC73C;&#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xACA9;&#xB9AC; &#xB418;&#xC5C8;&#xACE0;, &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; RWPE1 cocultured &#xB77C;&#xC774;&#xBE0C;. Microarray &#xBD84;&#xC11D; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xD53C;. acnes &#xAC15;&#xD55C; &#xB2E4;&#xAC01;&#xC801;&#xC778; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBC18;&#xC751;&#xC73C;&#xB85C; &#xBC18;&#xC751;&#xC744; &#xBCF4;&#xC600;&#xB2E4;. Cytokines&#xACFC; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-6&#xC640; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; IL-8 &#xAC19;&#xC740; chemokines &#xD65C;&#xC131; &#xBD84; &#xBE44; &#xD655;&#xC778; &#xB410;&#xB2E4;. &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xC751;&#xB2F5;&#xC740; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131;&#xC774; transcriptional &#xC694;&#xC778; NF-&Kappa;b&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC911;&#xC7AC; &#xBC0F; &#xB458; &#xB2E4; STAT3 acnes &#xAC10;&#xC5FC; &#xC2DC; &#xD65C;&#xC131;&#xD654; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD53C;. acnes &#xC720;&#xBC1C; &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140; &#xC751;&#xB2F5; COX2-&#xC2A4;&#xD0C0; &#xAE00;&#xB780; &#xB518; &#xBC0F; plasminogen &#xB9E4;&#xD2B8;&#xB9AD;&#xC2A4; metalloproteinase &#xD1B5;&#xB85C;&#xC758; &#xD65C;&#xC131;&#xD654;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568;. &#xD53C;. acnes&#xC5D0; &#xC7A5;&#xAE30; &#xB178;&#xCD9C; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xBCC0;&#xACBD; &#xD558; &#xACE0; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC138;&#xD3EC; &#xBCC0;&#xD658; &#xC2DC;&#xC791; &#xAC10;&#xC5FC; &#xB41C; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC131;&#xC7A5;&#xC744; &#xC575;&#xCEE4;&#xB9AC;&#xC9C0; &#xB3C5;&#xB9BD;&#xC801;&#xC778; &#xC0AC;&#xC6A9;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xD53C;. acnes &#xAC10;&#xC5FC; &#xAC1C;&#xC2DC; &#xB610;&#xB294; Pca&#xC758; &#xC9C4;&#xD589;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xB420; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC88B;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCD1;&#xC5D0; &#xAC78;&#xB9B0; &#xBCF4;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xBC0F; &#xADF8; &#xC5FC;&#xC99D; &#xBC0F; &#xC804;&#xB9BD;&#xC120; &#xC0C1;&#xD53C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xD65C;&#xB3D9;&#xC744; &#xBCC0;&#xD615; Propionibacterium acnes&#xC758; &#xC720;&#xD589;.

El c&aacute;ncer de pr&oacute;stata (PCa) es la segunda causa de muertes por c&aacute;ncer masculino en el mundo occidental. Creciente evidencia ha revelado que la inflamaci&oacute;n cr&oacute;nica puede ser un importante factor de iniciaci&oacute;n de la PCa. Trabajo reciente ha detectado los acn&eacute;s de los bacteria gram-positiva anaerobia en pr&oacute;statas cancerosas, pero con tasas de detecci&oacute;n de gran alcance. Aqu&iacute;, mediante inmunofluorescencia in situ (femenina), p. acnes encontr&oacute; en 58 de 71 (81,7%) probado muestras de tejido canceroso de la pr&oacute;stata, pero carec&iacute;a de tejidos sanos de la pr&oacute;stata (20 muestras) y otras biopsias de tejido canceroso (59 muestras de carcinoma de mama). Vivir el p. acnes bacterias fueron aisladas de pr&oacute;statas cancerosas y cocultured con la l&iacute;nea de c&eacute;lulas epiteliales pr&oacute;stata RWPE1. An&aacute;lisis de microarrays demostraron que la c&eacute;lula hu&eacute;sped respondi&oacute; a p. acnes con una fuerte respuesta inflamatoria multifac&eacute;tica. Fue confirmada la activa secreci&oacute;n de citoquinas y quimioquinas, tales como IL-6 e IL-8, de las c&eacute;lulas infectadas. La respuesta de la c&eacute;lula hu&eacute;sped fue probablemente mediado por los factores transcripcionales NF-&kappa;B y STAT3, ambas activa sobre infecci&oacute;n de p. acnes. Respuesta de la c&eacute;lula hu&eacute;sped p. acnes-inducida tambi&eacute;n incluye la activaci&oacute;n de la COX2-prostaglandina y los caminos de la metaloproteinasa de matriz del plasmin&oacute;geno. La exposici&oacute;n prolongada a p. acnes hab&iacute;a alterado la proliferaci&oacute;n celular y permiti&oacute; anclaje independiente crecimiento de las c&eacute;lulas epiteliales infectadas, iniciando as&iacute; la transformaci&oacute;n celular. Nuestros resultados sugieren que la infecci&oacute;n de p. acnes podr&iacute;a ser un factor que contribuye a la iniciaci&oacute;n o progresi&oacute;n de la PCa.

Prevalencia de Propionibacterium acnes en pr&oacute;stata enferma y su inflamatoria y transformar la actividad de las c&eacute;lulas epiteliales prost&aacute;ticas.

Britta Laube

Core Facility Microscopy

Max Planck Institute for Infection Biology

Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

Britta Laube

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Neutrophil Extracellular Traps: How to Generate and Visualize Them

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