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<em>In vivo</em> Imaging of Transgenic <em>Leishmania</em> Parasites in a Live Host

Distinct species of Leishmania, a protozoan parasite of the family Trypanosomatidae, typically cause different human disease manifestations. The most ...

University of Iowa, and the VA Medical Center

&#x5A92;&#x7684;&#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x675C;&#x6C0F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x539F;&#x866B; chagasi &#x63A5;&#x79CD;&#x5230;&#x76AE;&#x80A4;&#x540E;&#x4F1A;&#x5BFC;&#x81F4;&#x8F7B;&#x5FAE;&#x708E;&#x75C7;&#xFF0C;&#x4F46;&#x4F20;&#x64AD;&#x9020;&#x6210;&#x81F4;&#x547D;&#x5185;&#x810F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x75C5;&#x3002;&#x82E5;&#x8981;&#x5B9A;&#x4E49;&#x5728;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x79CD;&#x90E8;&#x4F4D;&#x7684;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F15;&#x5165;&#x4E9A;&#x5FAA;&#x73AF;&#x7FA4; L.&#x539F;&#x866B; chagasi promastigotes intradermally &#x5230; BALB/c &#x5C0F;&#x9F20;&#x8033;&#x548C;&#x7814;&#x7A76;&#x708E;&#x75C7;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D85;&#x8FC7; 7 &#x5929;&#x3002;Ly6G(+) &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8FC5;&#x901F;&#x6E17;&#x900F;&#x5230;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x8FBE;&#x5230;&#x9AD8;&#x5CF0;&#x540E; 6 &#x81F3; 24 h.&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C; NK &#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0B;&#x4E00;&#x6B65;&#x6E17;&#x900F;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#xFF0C;&#x548C; NK &#x8DDF;&#x6269;&#x5927;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x4E2D;&#x7684; B &#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x542B;&#x6709;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x541E;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x6807;&#x8BB0; mCherry L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x88AB;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x3002;Ly6G(+) &#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E4B;&#x540E;&#x8F7D;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B; 6 &#x81F3; 24 h &#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x6BD4;&#x4F8B;&#xFF0C;&#x800C;&#x771F;&#x76AE;&#x7684;&#x5DE8;&#x566C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x540E; 2 &#x5230; 7 &#x5929;&#x6000;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x5927;&#x591A;&#x6570;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x89C2;&#x5BDF;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#x4E0B;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x9A8C;&#x8BC1;&#x3002;&#x4F4E;&#x5242;&#x91CF;&#x6297;&#x4F53;&#x7684;&#x6682;&#x6001;&#x8D2B;&#x5316;&#x5C0F;&#x9F20;&#x7684;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x5176;&#x4ED6;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4FDD;&#x6301;&#x4E0D;&#x53D8;&#x3002;&#x5408;&#x5E76;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x7684;&#x6D3B;&#x4F53;&#x6210;&#x50CF;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#xFF0C;&#x548C;&#x5B9A;&#x91CF; pcr &#x65B9;&#x6CD5;&#x663E;&#x793A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6D88;&#x8017;&#x6709;&#x6240;&#x653E;&#x7F13;&#x671F;&#x95F4;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A; 24 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7684;&#x80DE;&#x5916; &#xFF08;&#x8367;&#x5149;&#x7D20;&#x9176;&#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;) promastigotes &#x8FC7;&#x5173;&#x540E;&#x63A5;&#x79CD;&#x5C1A;&#x672A;&#x4E0B;&#x964D;&#x7684;&#x542B;&#x6E38;&#x79BB; (mCherry &#x6297;&#x4F53;&#x9633;&#x6027;) &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x7684;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;3 &#x5929;&#x4EE5;&#x540E;&#xFF0C;&#x4ECE;&#x603B; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x542B;&#x771F;&#x76AE;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x603B; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x662F;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x8FD9;&#x4E24;&#x4E2A;&#x7EC4;&#x3002;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6CE2; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x5305;&#x542B;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x53D1;&#x751F;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8017;&#x5C3D;&#x7684;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6062;&#x590D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x5BF9;&#x5E94;&#x5230;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x79CD;&#x540E; 7 &#x5929;&#x3002;&#x56E0;&#x6B64;&#xFF0C;&#x5728;&#x63A5;&#x79CD;&#x4E4B;&#x540E;&#x751A;&#x81F3;&#x665A;&#x5230;&#x771F;&#x76AE;&#x5C42;&#x62DB;&#x8058;&#x4E86;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE; L.&#x539F;&#x866B; chagasi &#x8D29;&#x8FD0;&#x548C;&#x901A;&#x8FC7;&#x4E24;&#x4E2A;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x5BF9;&#x7167;&#x7EC4;&#x5C0F;&#x9F20;&#xFF0C;&#x5C3D;&#x7BA1;&#x6709;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x52A8;&#x529B;&#x5B66;&#x3002;&#x55DC;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x4E2D;&#x6027;&#x7C92;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5728;&#x77AC;&#x6001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x5C45;&#x4F4F;&#x7684;&#x62DB;&#x8058;&#x53EF;&#x80FD; nonulcerative &#x5F62;&#x5F0F;&#x7684;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x75C5;&#x7684;&#x4F5C;&#x7528;&#x3002;

&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6E17;&#x5165;&#x76AE;&#x80A4;&#x53CA;&#x5F15;&#x6D41;&#x533A;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7ED3;&#x675C;&#x6C0F;&#x5229;&#x4EC0;&#x66FC;&#x539F;&#x866B; chagasi &#x539F;&#x751F;&#x52A8;&#x7269;&#x7FA4;&#x843D;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;

The vector-borne protozoan Leishmania infantum chagasi causes minimal inflammation after inoculation into skin but disseminates to cause fatal visceral leishmaniasis. To define the inflammatory response at the parasite inoculation site, we introduced metacyclic L. infantum chagasi promastigotes intradermally into BALB/c mouse ears and studied inflammatory cells over 7 days. Ly6G(+) neutrophils rapidly infiltrated the dermis, peaking after 6 to 24 h. Macrophages and NK cells next infiltrated the dermis, and NK followed by B cells expanded in draining lymph nodes. Parasite-containing phagocytes were tracked with fluorescent mCherry-labeled L. infantum chagasi. Ly6G(+) neutrophils contained the greatest proportion of intracellular parasites 6 to 24 h after inoculation, whereas dermal macrophages harbored the majority of intracellular parasites after 2 to 7 days. These observations were validated microscopically. Low doses of antibody transiently depleted mice of neutrophils, leaving other cells intact. Combined results of in vivo imaging, flow cytometry, and quantitative PCR showed that neutrophil depletion slowed the clearance of extracellular (luciferase-positive) promastigotes during the first 24 h after inoculation yet decreased the numbers of leukocytes containing intracellular (mCherry-positive) parasites. From 3 days onward, total L. infantum chagasi-containing dermal leukocytes and total L. infantum chagasi parasites in draining lymph nodes were similar in both groups. Nonetheless, a second wave of L. infantum chagasi-containing neutrophils occurred 7 days after parasite inoculation into neutrophil-depleted mice, corresponding to the time of neutrophil recovery. Thus, neutrophils were recruited to the dermis even late after inoculation, and L. infantum chagasi trafficked through neutrophils in both neutrophil-depleted and control mice, albeit with different kinetics. Recruitment of neutrophils and transient parasite residence in neutrophils may play a role in nonulcerative forms of leishmaniasis.

Leukocytes infiltrate the skin and draining lymph nodes in response to the protozoan Leishmania infantum chagasi.

Le vecteur d&#x26;#39;origine protozoaire Leishmania infantum chagasi provoque une inflammation minime apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation dans la peau, mais diffuse de causer la mort la leishmaniose visc&#xE9;rale. Pour d&#xE9;finir la r&#xE9;ponse inflammatoire au site d&#x26;#39;inoculation du parasite, nous avons introduit m&#xE9;tacyclique L. infantum promastigotes chagasi par voie intradermique dans les oreilles de souris BALB / c et a &#xE9;tudi&#xE9; les cellules inflammatoires pendant 7 jours. Ly6G (+) neutrophiles sont rapidement infiltr&#xE9;s dans le derme, avec un pic au bout de 6 &#xE0; 24 h. Les macrophages et les cellules NK prochaine infiltr&#xE9; le derme, et NK suivie par les cellules B &#xE9;largi dans les ganglions lymphatiques. Parasite contenant les phagocytes ont &#xE9;t&#xE9; suivis avec fluorescente chagasi mCherry marqu&#xE9; L. infantum. Ly6G (+) neutrophiles contenait la plus grande proportion de parasites intracellulaires 6 &#xE0; 24 h apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation, alors que les macrophages dermiques regroupait la majorit&#xE9; des parasites intracellulaires apr&#xE8;s 2 &#xE0; 7 jours. Ces observations ont &#xE9;t&#xE9; valid&#xE9;s au microscope. De faibles doses d&#x26;#39;anticorps transitoirement appauvri souris de neutrophiles, laissant les autres cellules intactes. Les r&#xE9;sultats combin&#xE9;s de imagerie in vivo, cytom&#xE9;trie de flux, et PCR quantitative a montr&#xE9; que l&#x26;#39;appauvrissement des neutrophiles ralenti le jeu de promastigotes extracellulaires (lucif&#xE9;rase-positif) durant les 24 premi&#xE8;res heures apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation encore diminu&#xE9; le nombre de leucocytes contenant des parasites intracellulaires (mCherry-positif). Du 3 partir jours, au total L. infantum chagasi-dermiques contenant des leucocytes et le total des parasites L. infantum chagasi dans les ganglions lymphatiques &#xE9;taient semblables dans les deux groupes. N&#xE9;anmoins, une deuxi&#xE8;me vague de L. infantum chagasi contenant des neutrophiles a eu lieu 7 jours apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation du parasite dans les neutrophiles appauvri souris, correspondant au temps de la r&#xE9;cup&#xE9;ration des neutrophiles. Ainsi, les neutrophiles ont &#xE9;t&#xE9; recrut&#xE9;s pour le derme, m&#xEA;me tard apr&#xE8;s l&#x26;#39;inoculation, et L. infantum chagasi victimes de la traite par le biais des neutrophiles dans les deux neutrophiles appauvri et les souris de contr&#xF4;le, mais avec des cin&#xE9;tiques diff&#xE9;rentes. Le recrutement des neutrophiles et de s&#xE9;jour des parasites transitoires dans les neutrophiles peut jouer un r&#xF4;le dans les formes de leishmaniose non ulc&#xE9;reuse.

Leucocytes Infiltrer la peau et les ganglions lymphatiques de drainage en r&#xE9;ponse &#xE0; la chagasi Protozoaire Leishmania infantum

Die vektor&uuml;bertragbare Protozoen Leishmania Infantum Chagasi verursacht minimale Entz&uuml;ndung nach Inokulation in Haut aber verbreitet um t&ouml;dliche Leishmaniose verursachen. Um die entz&uuml;ndliche Reaktion am Standort Inokulation Parasit definieren, wir metacyclic L. Infantum Chagasi Promastigotes intradermal in BALB/c Maus Ohren eingef&uuml;hrt und studierte von Entz&uuml;ndungszellen mehr als 7 Tagen. Ly6G(+) Neutrophilen schnell infiltriert die Dermis, H&ouml;chststand nach 6 bis 24 Uhr Makrophagen und NK-Zellen infiltriert weiter der Dermis und NK gefolgt von B-Zellen in Drainierende Lymphknoten erweitert. Parasit-haltigen Fresszellen wurden mit fluoreszierenden mCherry-beschrifteten L. Infantum Chagasi verfolgt. Ly6G(+) Neutrophilen enthalten zum gr&ouml;&szlig;ten Teil intrazellul&auml;re Parasiten 6 bis 24 h nach der Inokulation, w&auml;hrend dermale Makrophagen die Mehrheit der intrazellul&auml;re Parasiten nach 2 bis 7 Tagen hegten. Diese Beobachtungen wurden mikroskopisch &uuml;berpr&uuml;ft. Niedrige Dosen von Antik&ouml;rper ersch&ouml;pft vor&uuml;bergehend M&auml;use von Neutrophilen, andere Zellen intakt. Kombinierten Ergebnisse der in-vivo Bildgebung, Durchflusszytometrie und quantitativer PCR zeigte, dass neutrophil Ersch&ouml;pfung den Rechnungsabschlu&szlig; extrazellul&auml;re (Luciferase-positiv) Promastigotes w&auml;hrend der ersten 24 Stunden verlangsamt nach Impfung noch die Zahl der Leukozyten, die intrazellul&auml;re Parasiten in (mCherry-positiv) verringert. Ab 3 Tage vorw&auml;rts waren total L. Infantum Chagasi-haltigen dermal Leukozyten und total L. Infantum Chagasi Parasiten in Drainierende Lymphknoten in beiden Gruppen &auml;hnlich. Dennoch ist eine zweite Welle von L. Infantum Chagasi-haltigen Neutrophilen 7 Tage nach der Inokulation der Parasit in Neutrophilen-abgereichertem M&auml;use, entsprechend der Zeit des neutrophil Wiederherstellung aufgetreten. So Neutrophilen wurden auch sp&auml;t nach der Inokulation der Dermis angeworben, und L. Infantum Chagasi verschleppt durch neutrophile in beiden Neutrophilen-ersch&ouml;pft und Steuerelement-M&auml;usen, wenn auch mit unterschiedlichen Kinetik. Rekrutierung von Neutrophilen und Transienten Parasit Residenz in Neutrophilen kann eine Rolle in Nonulcerative Formen der Leishmaniose.

Leukozyten infiltrieren Haut und Drainierende Lymphknoten als Reaktion auf die Protozoen Leishmania Infantum Chagasi.

Vettoriali protozoo Leishmania infantum chagasi provoca infiammazione minima dopo l&#39;inoculazione in pelle ma dissemina per causare fatale leishmaniosi viscerale. Per definire la risposta infiammatoria presso il sito di inoculazione del parassita, abbiamo introdotto per via intradermica metacyclic L. infantum chagasi promastigotes nelle orecchie di topo BALB/c e studiato le cellule infiammatorie oltre 7 giorni. Ly6G(+) neutrofili rapidamente infiltrarono il derma, piazzandosi dopo 6-24 h. macrofagi e cellule NK prossimo infiltrarono il derma, NK seguita da cellule B ampliate nei linfonodi drenanti. Fagociti contenenti parassita sono stati monitorati con fluorescente mCherry-etichettati L. infantum chagasi. Ly6G(+) neutrofili contenevano la pi&ugrave; grande percentuale di parassiti intracellulari 6-24 h dopo l&#39;inoculazione, considerando che macrofagi dermici ospitava la maggior parte dei parassiti intracellulari dopo 2-7 giorni. Queste osservazioni sono state convalidate microscopicamente. Basse dosi dell&#39;anticorpo impoverito transitoriamente topi dei neutrofili, lasciando intatte le altre cellule. Risultati combinati di imaging in vivo, citometria a flusso, e PCR quantitativa hanno mostrato che deplezione dei neutrofili ha rallentato la liquidazione dei extracellulare (luciferase-positivo) promastigotes durante le prime 24 h dopo inoculazione ancora &egrave; diminuito il numero dei leucociti contenenti parassiti intracellulari di (mCherry-positivo). Da 3 giorni in poi, totale L. infantum chagasi parassiti nei linfonodi drenanti e totali L. infantum contenenti chagasi dermico leucociti erano simili in entrambi i gruppi. Tuttavia, una seconda ondata di neutrofili contenenti chagasi di L. infantum si &egrave; verificato in 7 giorni dopo l&#39;inoculazione del parassita in topi impoverito neutrofili, corrispondente al tempo di recupero dei neutrofili. Cos&igrave;, i neutrofili sono stati reclutati per il derma anche tardi dopo l&#39;inoculazione, e L. infantum chagasi trafficate attraverso i neutrofili in entrambi i neutrofili-esaurito e topi di controllo, sia pure con diversa cinetica. Reclutamento di neutrofili e parassita temporaneo soggiorno in neutrofili pu&ograve; svolgere un ruolo in nonulcerative forme di leishmaniosi.

Leucociti infiltrano la pelle e il drenaggio dei linfonodi in risposta al protozoo Leishmania infantum chagasi.

&#x5A92;&#x4ECB;&#x539F;&#x866B;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;infantum chagasi&#x306F;&#x3001;&#x76AE;&#x819A;&#x306B;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x6700;&#x5C0F;&#x9650;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x81F4;&#x547D;&#x7684;&#x306A;&#x5185;&#x81D3;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x75C7;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x767A;&#x4FE1;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x63A5;&#x7A2E;&#x90E8;&#x4F4D;&#x3067;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3092;&#x5B9A;&#x7FA9;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3001;&#x6211;&#x3005;&#x306F;metacyclic L. infantum chagasi&#x306F;&#x3001;BALB / c&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x8033;&#x306B;&#x76AE;&#x524D;&#x97AD;&#x3068;7&#x65E5;&#x9593;&#x306E;&#x708E;&#x75C7;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x7814;&#x7A76;&#x767A;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002; Ly6G&#xFF08;+&#xFF09;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x6025;&#x901F;&#x306B;6&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x5F8C;&#x306B;&#x30D4;&#x30FC;&#x30AF;&#x306B;&#x9054;&#x3057;&#x3001;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x6D78;&#x6F64;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x3084;NK&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x6B21;&#x306E;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x4FB5;&#x5165;&#x3057;&#x3001;NK&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;&#x3057;&#x3001;B&#x7D30;&#x80DE;&#x304C;&#x7D9A;&#x304F;&#x3002;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x542B;&#x6709;&#x98DF;&#x7D30;&#x80DE;&#x306F;&#x3001;&#x86CD;&#x5149;mCherry&#x6A19;&#x8B58;L. infantum chagasi&#x3067;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x771F;&#x76AE;&#x306E;&#x30DE;&#x30AF;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30FC;&#x30B8;&#x304C;2&#x304B;&#x3089;7&#x65E5;&#x5F8C;&#x306B;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x4F53;&#x306E;&#x5927;&#x534A;&#x3092;&#x62B1;&#x3044;&#x4E00;&#x65B9;Ly6G&#xFF08;+&#xFF09;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5185;&#x5BC4;&#x751F;&#x4F53;&#x306E;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x5272;&#x5408;&#x304C;6&#x304B;&#x3089;24&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x542B;&#x307E;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x89B3;&#x200B;&#x200B;&#x5BDF;&#x306F;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3067;&#x691C;&#x8A3C;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x4F4E;&#x7528;&#x91CF;&#x306F;&#x3001;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306B;&#x4ED6;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306B;&#x3057;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x3092;&#x67AF;&#x6E07;&#x3002; in vivo&#x30A4;&#x30E1;&#x30FC;&#x30B8;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3001;&#x5B9A;&#x91CF;PCR&#x3067;&#x306E;&#x7D50;&#x5408;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x4E88;&#x9632;&#x63A5;&#x7A2E;&#x304C;&#x307E;&#x3060;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;mCherry&#x967D;&#x6027;&#xFF09;&#x3001;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x6570;&#x3092;&#x6E1B;&#x5C11;&#x3055;&#x305B;&#x305F;&#x5F8C;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x304C;&#x6700;&#x521D;&#x306E;24&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x5916;&#xFF08;&#x30EB;&#x30B7;&#x30D5;&#x30A7;&#x30E9;&#x30FC;&#x30BC;&#x967D;&#x6027;&#xFF09;&#x524D;&#x97AD;&#x306E;&#x30AF;&#x30EA;&#x30A2;&#x30E9;&#x30F3;&#x30B9;&#x3092;&#x9045;&#x304F;&#x3057;&#x305F;&#x3002; 3&#x65E5;&#x4EE5;&#x964D;&#x3001;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x3092;&#x6392;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x7DCF;L. infantum chagasi&#x542B;&#x6709;&#x76AE;&#x819A;&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x3068;&#x7DCF;L. infantum chagasi&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306F;&#x4E21;&#x7FA4;&#x3067;&#x540C;&#x7B49;&#x3067;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x305D;&#x308C;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;L. infantum chagasi&#x542B;&#x6709;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x6CE2;&#x306F;7&#x65E5;&#x9593;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x56DE;&#x5FA9;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306B;&#x76F8;&#x5F53;&#x3059;&#x308B;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306B;&#x5BC4;&#x751F;&#x63A5;&#x7A2E;&#x5F8C;&#x306B;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306F;&#x3001;&#x63A5;&#x7A2E;&#x3057;&#x305F;&#x5F8C;&#x3067;&#x3082;&#x9045;&#x304F;&#x771F;&#x76AE;&#x306B;&#x63A1;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x3001;&#x3068;L. infantum chagasi&#x306F;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x52D5;&#x614B;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x306B;&#x3082;&#x304B;&#x304B;&#x308F;&#x3089;&#x305A;&#x3001;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x67AF;&#x6E07;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x30DE;&#x30A6;&#x30B9;&#x306E;&#x4E21;&#x65B9;&#x3067;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x58F2;&#x8CB7;&#x3002;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x597D;&#x4E2D;&#x7403;&#x306E;&#x4E00;&#x6642;&#x7684;&#x306A;&#x5BC4;&#x751F;&#x866B;&#x306E;&#x4F4F;&#x5B85;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x306F;&#x3001;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;&#x75C7;&#x306E;nonulcerative&#x5F62;&#x3067;&#x5F79;&#x5272;&#x3092;&#x679C;&#x305F;&#x3059;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x767D;&#x8840;&#x7403;&#x306F;&#x539F;&#x866B;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E5;&#x30DE;&#x30CB;&#x30A2;Infantum Chagasi&#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3057;&#x305F;&#x76AE;&#x819A;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6240;&#x5C5E;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7BC0;&#x306B;&#x6F5C;&#x5165;

Protozoan Leishmania infantum &#xBCA1;&#xD130; &#xBD80;&#xB2F4; chagasi &#xD53C;&#xBD80;&#xC5D0; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xCD5C;&#xC18C;&#xD55C;&#xC758; &#xC5FC;&#xC99D;&#xC774; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xCE58;&#xBA85;&#xC801;&#xC778; &#xB0B4;&#xC7A5; leishmaniasis&#xB97C; &#xBC1C;&#xC2E0;. &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC811;&#xC885; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC120; &#xB3D9;&#xC801;&#xC778; &#xC751;&#xB2F5;&#xC744; &#xC815;&#xC758; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; BALB/c &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xADC0;&#xC5D0; intradermally metacyclic L. infantum chagasi promastigotes&#xB97C; &#xB3C4;&#xC785; &#xD558; &#xACE0; 7 &#xC77C; &#xB3D9;&#xC548; &#xC5FC;&#xC99D; &#xC131; &#xC138;&#xD3EC;&#xB97C; &#xACF5;&#xBD80; &#xD588;&#xB2E4;. Ly6G(+) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xB294; &#xAE09;&#xC18D; &#xD558; &#xAC8C; &#xC815;&#xC810; 6 ~ 24 h. &#xB300; &#xC2DD; &#xD6C4; &#xC9C4; &#xD53C; &#xCE68;&#xD22C; NK &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC9C4; &#xD53C;, &#xCE68;&#xD22C; &#xBC0F; NK &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD655;&#xC7A5; B &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xC74C;&#xC5D0;. &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC774; &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xAD11; mCherry &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; L. infantum chagasi&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xCD94;&#xC801; &#xD588;&#xB2E4;. Ly6G(+) &#xD638; &#xC911;&#xAD6C; &#xD53C;&#xBD80; &#xB300; &#xC2DD; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xB300;&#xBD80;&#xBD84; 2 ~ 7 &#xC77C; &#xD6C4; &#xC228;&#xACA8; &#xBC18;&#xBA74;, &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; 6 ~ 24 h&#xC758; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xBE44;&#xC728;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAD00;&#xCC30; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC73C;&#xB85C; &#xD655;&#xC778; &#xD588;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xB0AE;&#xC740; &#xBCF5;&#xC6A9;&#xB7C9;&#xC740; transiently &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xC140;&#xC740; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xB450;&#xACE0; &#xB9C8;&#xC6B0;&#xC2A4; &#xACE0;&#xAC08;. Vivo&#xC5D0;&#xC11C; &#xC601;&#xC0C1;&#xC758; &#xACB0;&#xD569;&#xB41C; &#xACB0;&#xACFC; cytometry, &#xD750;&#xB984;&#xACFC; &#xC815;&#xB7C9;&#xC801; PCR &#xD638; &#xACE0;&#xAC08; &#xD6C4; &#xC811;&#xC885; &#xC544;&#xC9C1; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; (mCherry &#xC591;&#xC131;) &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xC758; &#xC22B;&#xC790;&#xB97C; &#xAC10;&#xC18C; &#xCCAB; 24 &#xC2DC;&#xAC04; &#xB3D9;&#xC548; &#xC138;&#xD3EC; &#xC678; (&#xB8E8;&#xC2DC;&#xD398;&#xB77C;&#xC544;&#xC81C; &#xC591;&#xC131;) promastigotes&#xC758; &#xD074;&#xB9AC;&#xC5B4;&#xB7F0;&#xC2A4;&#xB97C; &#xB454;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. 3 &#xC77C; &#xC774;&#xD6C4;, &#xCD1D; L. infantum chagasi &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD53C;&#xBD80; &#xBC31;&#xD608;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xCD1D; L. infantum chagasi &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; &#xB450; &#xADF8;&#xB8F9; &#xC804;&#xBD80;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7FC;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xBD88;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0;, L. infantum chagasi &#xD3EC;&#xD568; &#xB41C; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBB3C;&#xACB0; &#xD638; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0; &#xD574;&#xB2F9; &#xD558;&#xB294; neutrophil &#xACE0;&#xAC08; &#xC950;&#xB85C; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9; &#xC811;&#xC885; &#xD6C4; 7 &#xC77C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB530;&#xB77C;&#xC11C;, &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;, &#xC811;&#xC885; &#xD6C4;&#xC5D0; &#xB2A6;&#xAC8C; &#xC9C4; &#xD53C;&#xC5D0; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xB41C; &#xBC0F; &#xB2E4;&#xB978; &#xC18D;&#xB3C4; &#xB860;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xAE30;&#xB294; &#xD558;&#xC9C0;&#xB9CC; neutrophil &#xACE0;&#xAC08; &#xBAA8;&#xB450;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC911; &#xC131;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD1B5;&#xC81C; &#xC950;&#xB97C; &#xD1B5;&#xD574; &#xC778;&#xC2E0; &#xB9E4;&#xB9E4; L. infantum chagasi. &#xC911; &#xC131;&#xAD6C; &#xBC0F; &#xD638; &#xC911;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xAC70;&#xC8FC; &#xACFC;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC0DD;&#xCDA9;&#xC758; &#xBAA8;&#xC9D1; nonulcerative &#xD615;&#xD0DC;&#xC758; leishmaniasis &#xC5ED;&#xD560;&#xC744; &#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBC31;&#xD608;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xCE68;&#xD22C; &#xD53C;&#xBD80;&#xC640; &#xBC30;&#xCD9C; &#xB9BC;&#xD504;&#xC808; protozoan Leishmania infantum chagasi&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;.

La transmisi&#xF3;n vectorial protozoo Leishmania infantum chagasi causa inflamaci&#xF3;n m&#xED;nima despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n en la piel pero se disemina a provocar la leishmaniasis visceral fatal. Para definir la respuesta inflamatoria en el sitio de la inoculaci&#xF3;n del par&#xE1;sito, se introdujo metac&#xED;clicos de L. infantum chagasi promastigotos por v&#xED;a intrad&#xE9;rmica en los o&#xED;dos de ratones Balb / c, y estudi&#xF3; las c&#xE9;lulas inflamatorias durante 7 d&#xED;as. Ly6G (+) neutr&#xF3;filos r&#xE1;pidamente infiltrado en la dermis, con un pico despu&#xE9;s de las 6 a 24 h. Los macr&#xF3;fagos y las c&#xE9;lulas NK junto infiltrado en la dermis, y NK seguido por las c&#xE9;lulas B se ampli&#xF3; en ganglios linf&#xE1;ticos de drenaje. Par&#xE1;sito que contienen los fagocitos se les dio seguimiento por fluorescentes mCherry marcado con L. infantum chagasi. Ly6G (+) neutr&#xF3;filos tuvieron la mayor proporci&#xF3;n de par&#xE1;sitos intracelulares 6 a 24 h despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n, mientras que los macr&#xF3;fagos d&#xE9;rmicos se encontraba la mayor&#xED;a de los par&#xE1;sitos intracelulares despu&#xE9;s de 2 a 7 d&#xED;as. Estas observaciones fueron validadas con el microscopio. Las dosis bajas de anticuerpos transitoriamente agotado los ratones de los neutr&#xF3;filos, dejando a otras c&#xE9;lulas intactas. Los resultados combinados de im&#xE1;genes in vivo, citometr&#xED;a de flujo, y la PCR cuantitativa mostr&#xF3; que el agotamiento de los neutr&#xF3;filos se desaceler&#xF3; la liquidaci&#xF3;n de promastigotes extracelulares (luciferasa-positivo) durante las primeras 24 horas despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n sin embargo, disminuy&#xF3; el n&#xFA;mero de leucocitos que contienen par&#xE1;sitos intracelulares (mCherry-positivo). A partir del 3 en adelante d&#xED;a, el total de L. infantum chagasi-que contiene leucocitos d&#xE9;rmicos y el total de L. infantum chagasi par&#xE1;sitos en el drenaje de los ganglios linf&#xE1;ticos fueron similares en ambos grupos. Sin embargo, una segunda ola de L. infantum chagasi que contienen los neutr&#xF3;filos se produjo 7 d&#xED;as despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n del par&#xE1;sito en los neutr&#xF3;filos agotamiento de los ratones, lo que corresponde a la &#xE9;poca de recuperaci&#xF3;n de los neutr&#xF3;filos. Por lo tanto, los neutr&#xF3;filos fueron reclutados a la dermis hasta tarde despu&#xE9;s de la inoculaci&#xF3;n, y L. infantum chagasi trafica a trav&#xE9;s de los neutr&#xF3;filos, tanto en los neutr&#xF3;filos empobrecido y los ratones de control, aunque con diferente cin&#xE9;tica. El reclutamiento de neutr&#xF3;filos y de residencia transitoria del par&#xE1;sito en los neutr&#xF3;filos pueden jugar un papel en formas no ulcerativas de la leishmaniasis.

Colin J. Thalhofer

Interdisciplinary Immunology Program

University of Iowa, and the VA Medical Center

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Colin J. Thalhofer

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Interdisciplinary Immunology Program

University of Iowa, and the VA Medical Center

In vivo Imaging of Transgenic Leishmania Parasites in a Live Host

Interdisciplinary Immunology Program