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Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Herein we present a protocol of reprogramming human adult fibroblasts into human induced pluripotent stem cells (hiPSC) using retroviral vectors encoding ...

The Scripps Research Institute

&#x805A;&#x9170;&#x80FA;&#x82EF;&#x4E01;&#x9178;&#x6C2E;&#x82A5;&#x5171;&#x8F6D; (1R Chl) &#x902E;&#x6355;&#x5404;&#x79CD;&#x5404;&#x6837;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE; G2/M &#x9636;&#x6BB5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x53CA;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7EC4; H4c &#x86CB;&#x767D;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x8868;&#x8FBE;&#x3002;&#x4F46;&#x662F;&#xFF0C;&#x9488;&#x5BF9; H4c mRNA siRNA &#x5BFC;&#x81F4; G1/S &#x902E;&#x6355;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; G2/M &#x88AB;&#x6355;&#x524D;&#x7684;&#xFF0C;1R Chl &#x75C5;&#x6BD2; H4c&#x3002;G2/M &#x902E;&#x6355;&#x662F;&#x5BFC;&#x81F4;&#x78F7;&#x9178;&#x5316; H2A 1R-&#x667A;&#x5229;&#x3001; &#x5E7F;&#x6CDB; DNA &#x635F;&#x4F24;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;X &#x4E0A;&#x4E1D;&#x6C28;&#x9178; 139&#x3001; Nbs1 &#x4FEE;&#x590D;&#x86CB;&#x767D;&#x8D28;&#x3001; &#x62DB;&#x8058;&#x548C;&#x7EA7;&#x8054;&#x7684;&#x672A;&#x77E5;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x6700;&#x7EC8;&#x4E0E; cdc2 &#x78F7;&#x9178;&#x5316;&#x916A;&#x6C28;&#x9178; 15 &#x548C; cdc2 &#x6FC0;&#x9176;&#x6D3B;&#x6027;&#x88C1;&#x64A4;&#x3002;&#x63A7;&#x5236;&#x805A;&#x9170;&#x80FA; Chl &#x5171;&#x8F6D;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x65E2;&#x4E0D;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230; H4c &#x57FA;&#x56E0;&#x4E5F;&#x4E0D;&#x7531;&#x672C;&#x8EAB;&#x5177;&#x6709;&#x6297;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; G2/M &#x902E;&#x6355;&#x65F6;&#x5BFC;&#x81F4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x88AB;&#x89C6;&#x4E3A;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684; siRNAs H3 &#x6216; H4c&#x3002;

Pre-mitotic &#x902E;&#x6355;&#x7684;&#x80BF;&#x7624;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x805A;&#x9170;&#x80FA;-alkylator &#x5171;&#x8F6D;&#x4E8C;&#x6253;&#x51FB;&#x673A;&#x5236;&#x3002;

A polyamide-chlorambucil conjugate (1R-Chl) arrests a wide range of human cancer cell lines at the G2/M phase of the cell cycle and downregulates histone H4c gene expression. However, an siRNA against H4c mRNA causes G1/S arrest. Here, we report that 1R-Chl downregulates H4c prior to G2/M arrest. G2/M arrest is the result of extensive DNA damage by 1R-Chl, which leads to phosphorylation of H2A.X at serine 139, recruitment of the Nbs1 repair protein, and a cascade of unknown events culminating with cdc2 phosphorylation at tyrosine 15 and abolishment of cdc2 kinase activity. A control polyamide-Chl conjugate, which neither binds to the H4c gene nor has an anti-proliferative effect by itself, causes G2/M arrest when cells are treated with siRNAs specific for H3 or H4c.

A two-hit mechanism for pre-mitotic arrest of cancer cell proliferation by a polyamide-alkylator conjugate.

Un polyamide-chlorambucil conjugu&eacute; arrestations (1R-Chl) une vaste gamme de lign&eacute;es cellulaires canc&eacute;reuses humaines lors de la phase G2/M de l&#39;expression de g&egrave;nes d&#39;histone H4c cycle cellulaire et att&eacute;nue. Toutefois, un siARN contre H4c ARNm provoque une arrestation G1/S. Nous rapportons ici, cette action 1R-Chl H4c avant l&#39;arrestation de G2/M. G2/M arrestation est le r&eacute;sultat de vastes dommages &agrave; l&#39;ADN par 1R-Chl, qui m&egrave;ne &agrave; la phosphorylation de H2A.X &agrave; s&eacute;rine 139, recrutement de la prot&eacute;ine de r&eacute;paration Nbs1 et une cascade d&#39;&eacute;v&eacute;nements inconnus, culminant avec cdc2 phosphorylation de tyrosine 15 et suppression de l&#39;activit&eacute; kinase cdc2. Un contr&ocirc;le polyamide-Chl conjugu&eacute;, ni se lie au g&egrave;ne H4c ni a un effet anti-prolif&eacute;rante par lui-m&ecirc;me, entra&icirc;ne G2/M arrestation quand les cellules sont trait&eacute;es avec le siARN sp&eacute;cifique pour H3 ou H4c.

Un m&eacute;canisme &agrave; deux frappes pour arr&ecirc;ter la prolif&eacute;ration des cellules canc&eacute;reuses par un conjugu&eacute; de polyamide-alkylator pre-mitotic.

Ein Polyamid-Chlorambucil Konjugat (1R-Chl) Verhaftungen eine Vielzahl von menschlichen Krebszelllinien bei der G2/M-Phase des Zellzyklus und Downregulates-Histon H4c-Genexpression. Ein SiRNA gegen H4c mRNA bewirkt jedoch, dass G1/S Verhaftung. Hier berichten wir, dass 1R-Chl Downregulates H4c vor der Verhaftung der G2/M. G2/M-Festnahme ist das Ergebnis einer umfangreichen DNA-Sch&auml;den durch 1R-Chl, Phosphorylierung von H2A f&uuml;hrt.X Serin 139, Rekrutierung von Nbs1-Reparatur-Protein und eine Kaskade von unbekannte Ereignisse, die ihren H&ouml;hepunkt mit cdc2 Phosphorylierung an Tyrosin 15 und Abschaffung von cdc2-Kinase-Aktivit&auml;t. Ein Steuerelement-Polyamid-Chl-Konjugat, die weder an das H4c-gen bindet noch eine antiproliferative Wirkung selbst, G2/M-Verhaftung verursacht, wenn Zellen behandelt werden mit spezifischen SiRNAs f&uuml;r H3 oder H4c.

Eine zweifache Mechanismus pre-mitotic Verhaftung von Krebs Zellproliferation von einem Polyamid-Alkylator-Konjugat.

Un poliammide-clorambucil coniugato (1R-Chl) arresti una vasta gamma di linee di cellule tumorali umane nella fase G2/M del ciclo cellulare e sottoregola istone H4c espressione di gene. Tuttavia, un siRNA contro H4c mRNA provoca arresto G1/S. Qui, segnaliamo che sottoregola 1R-Chl H4c prima dell&#39;arresto di G2/M. Arresto di G2/M &egrave; il risultato di danni del DNA da 1R-Chl, che conduce alla fosforilazione di H2A.X di serina 139, reclutamento della proteina di riparazione Nbs1 e una cascata di eventi sconosciuti che si conclude con cdc2 fosforilazione in tirosina 15 e abolizione di attivit&agrave; della chinasi cdc2. Un controllo di poliammide-Chl coniugato che n&eacute; si lega al gene H4c n&eacute; ha un effetto anti-proliferativo di per s&eacute;, causa arresto G2/M quando le cellule sono trattate con specifici siRNA per H3 o H4c.

Un meccanismo del due-colpo per pre-mitotic arresto della proliferazione di cellule cancerogene di un coniugato di poliammide-alkylator.

&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9; &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE;&#x5171;&#x5F79; (1 r, &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#xFF09; &#x902E;&#x6355;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x3072;&#x3068;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x5468;&#x671F;&#x3068;&#x306F;&#x30D2;&#x30B9;&#x30C8;&#x30F3; H4c &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x767A;&#x73FE;&#x306E; G2/M &#x76F8;&#x3067;&#x3002;&#x3057;&#x304B;&#x3057;&#x306B; H4c mRNA &#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B; siRNA G1/S &#x902E;&#x6355;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x306E; 1 r Chl &#x306F; H4c G2/M &#x306E;&#x902E;&#x6355;&#x306E;&#x524D;&#x306B;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;G2/M &#x902E;&#x6355; H2A &#x306E;&#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x306B;&#x3064;&#x306A;&#x304C;&#x308B; 1R-&#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5E83;&#x7BC4;&#x306A; DNA &#x640D;&#x50B7;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x30BB;&#x30EA;&#x30F3; 139&#x3001;Nbs1 &#x4FEE;&#x5FA9;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x52DF;&#x96C6;&#x304A;&#x3088;&#x3073; cdc2 &#x30EA;&#x30F3;&#x9178;&#x5316;&#x30C1;&#x30ED;&#x30B7;&#x30F3; 15 &#x3068; cdc2 &#x30AD;&#x30CA;&#x30FC;&#x30BC;&#x6D3B;&#x6027;&#x306E;&#x5EC3;&#x6B62;&#x3067;&#x6700;&#x9AD8;&#x6F6E;&#x306B;&#x9054;&#x3059;&#x308B;&#x672A;&#x77E5;&#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E;&#x30AB;&#x30B9;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C9; X&#x3002;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB; &#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9; &#x30AF;&#x30ED;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A3;&#x30EB;&#x306E;&#x5171;&#x5F79;&#x3001;&#x3069;&#x3061;&#x3089;&#x3082; H4c &#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306B;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x6297;&#x5897;&#x6B96;&#x52B9;&#x679C;&#x81EA;&#x4F53;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x6301;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x6271;&#x308F;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x304D; G2/M &#x902E;&#x6355; siRNAs &#x3068;&#x7279;&#x5B9A; H3 &#x307E;&#x305F;&#x306F; H4c &#x306E;&#x539F;&#x56E0;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

Pre-mitotic &#x902E;&#x6355;&#x30DD;&#x30EA;&#x30A2;&#x30DF;&#x30C9; alkylator &#x5171;&#x5F79;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x764C;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E; 2 &#x30D2;&#x30C3;&#x30C8; &#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x3002;

&#xD3F4; &#xB9AC;&#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; chlorambucil &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xAE30;&#xC640; downregulates &#xD788;&#xC2A4;&#xD1A4; H4c &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xBC1C;&#xD604;&#xC758; G2/M &#xB2E8;&#xACC4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC778;&#xAC04; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xB77C;&#xC778; (1R Chl) &#xCCB4;&#xD3EC; &#xCF24;&#xB808;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; H4c Mrna&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; siRNA G1/S &#xCCB4;&#xD3EC;&#xB97C; &#xBC1C;&#xC0DD;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 1 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; Chl downregulates H4c G2/M &#xCCB4;&#xD3EC; &#xC774;&#xC804;&#xC5D0; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. G2/M &#xCCB4;&#xD3EC; 1 &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC;-Chl h2a&#xC758; &#xC778; &#xC0B0;&#xD654;&#xC5D0; &#xC774;&#xB974;&#xAC8C; &#xD558; &#xC5EC; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; DNA &#xC190;&#xC0C1;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xC774;&#xB2E4;.&#xB5A0;&#xB4E4;&#xACE0; 139, Nbs1 &#xC218;&#xB9AC; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8;&#xC758; &#xBAA8;&#xC9D1; &#xBC0F; &#xC54C; &#xC218; &#xC5C6;&#xB294; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; cdc2 &#xC778; &#xC0B0;&#xD654; &#xD2F0;&#xB85C;&#xC2E0; 15&#xC640; cdc2 kinase &#xD65C;&#xB3D9;&#xC758; &#xD3D0;&#xC9C0;&#xC640; culminating&#xC758; &#xD3ED;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; X. &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xD3F4; &#xB9AC;&#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; Chl &#xACF5;&#xC561;-&#xC5B4;&#xB290; H4c &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;&#xB3C4; &#xC790;&#xCCB4; &#xC548;&#xD2F0; &#xC99D;&#xC2DD; &#xD6A8;&#xACFC;&#xAC00;, &#xC6D0;&#xC778;&#xC774; G2/M &#xCCB4;&#xD3EC; &#xC140; &#xCE58;&#xB8CC;&#xB294; siRNAs &#xD2B9;&#xC815; H3 &#xB610;&#xB294; H4c.

&#xD3F4; &#xB9AC;&#xC544; &#xBBF8;&#xB4DC; alkylator &#xACF5;&#xC561;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC554; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC758; pre-mitotic &#xCCB4;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB450; &#xD788;&#xD2B8; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;.

Un poliamida-clorambucilo conjugado detenciones (1R-Chl) una amplia gama de l&iacute;neas celulares de c&aacute;ncer humano en la fase G2/M de la expresi&oacute;n del gen histona H4c ciclo celular y algo. Sin embargo, un siRNA contra H4c mRNA causa detenci&oacute;n G1/S. Aqu&iacute;, divulgamos regula 1R-Chl H4c antes de G2/M detenci&oacute;n. Detenci&oacute;n de G2/M es el resultado de da&ntilde;os de ADN por 1R-Chl, que conduce a la fosforilaci&oacute;n de H2A.X en serina 139, reclutamiento de la prote&iacute;na de reparaci&oacute;n de Nbs1 y una cascada de eventos desconocidos culminando en cdc2 fosforilaci&oacute;n en tirosina de 15 y la abolici&oacute;n de la actividad de la quinasa cdc2. Un conjugado de poliamida-Chl control, que ni se une al gen H4c ni tiene un efecto anti proliferativo por s&iacute; misma, causa detenci&oacute;n de G2/M cuando las c&eacute;lulas se tratan con siRNAs espec&iacute;ficos para H3 o H4c.

Un mecanismo de dos hits para pre-mitotic detenci&oacute;n de la proliferaci&oacute;n celular de c&aacute;ncer por un conjugado de poliamida-un f&aacute;rmaco alquilante.

&#x7EE7;&#x627F;&#x795E;&#x7ECF;&#x9000;&#x884C;&#x6027;&#x75BE;&#x75C5;&#x5F17;&#x91CC;&#x5FB7;&#x8D56;&#x5E0C;&#x7684;&#x5171;&#x6D4E;&#x5931;&#x8C03; (FRDA) &#x662F;&#x7531;&#x7B2C;&#x4E00;&#x4E2A;&#x5185;&#x542B;&#x5B50;&#x7684; FXN &#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x7F16;&#x7801;&#x7EBF;&#x7C92;&#x4F53;&#x86CB;&#x767D; frataxin GAA&sdot;TTC &#x4E09;&#x8054;&#x4F53;&#x91CD;&#x590D; hyperexpansions &#x5F15;&#x8D77;&#x7684;&#x3002;&#x957F; GAA&sdot;TTC &#x91CD;&#x590D;&#x539F;&#x56E0;&#x5F02;&#x67D3;&#x8272;&#x8D28;&#x4ECB;&#x5BFC;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x6C89;&#x9ED8;&#x548C; frataxin &#x5728;&#x53D7;&#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x4E2A;&#x4EBA;&#x635F;&#x5931;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE; &#xFF08;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF09; &#x7684;&#x63A8;&#x5BFC;&#x4ECE; FRDA &#x60A3;&#x8005;&#x6210;&#x7EA4;&#x7EF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8F6C;&#x5F55;&#x56E0;&#x5B50;&#x91CD;&#x65B0;&#x8BBE;&#x7F6E;&#x3002;FXN &#x57FA;&#x56E0;&#x9547;&#x538B;&#x88AB;&#x4FDD;&#x6301;&#x9B54;&#x9B3C;&#xFF0C;&#x662F;&#x5168;&#x7403;&#x57FA;&#x56E0;&#x8868;&#x8FBE;&#x7B7E;&#x540D;&#x53CD;&#x6620;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x7684;&#x75BE;&#x75C5;&#x3002;&#x552F;&#x72EC;&#x5728;&#x9B54;&#x9B3C;&#x7684; FXN GAA&sdot;TTC &#x91CD;&#x590D;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E;&#x75C5;&#x4EBA;&#x7684;&#x5BB6;&#x5EAD;&#xFF0C;&#x5728;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x5C55;&#x5F00;&#x548C;/&#x6216;&#x5408;&#x540C;&#x4E0E;&#x5404;&#x4EE3;&#x4EBA;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x957F;&#x5EA6;&#x7684;&#x79BB;&#x6563;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x3002;&#x9519;&#x914D;&#x4FEE;&#x590D;&#x9176; MSH2&#xFF0C;&#x7275;&#x8FDE;&#x5176;&#x4ED6;&#x4E09;&#x8054;&#x4F53;&#x91CD;&#x590D;&#x75BE;&#x75C5;&#xFF0C;&#x91CD;&#x590D;&#x7684;&#x4E0D;&#x7A33;&#x5B9A;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9AD8;&#x5EA6;&#x8868;&#x8FBE;&#x548C;&#x5360;&#x5730; FXN &#x5185;&#x542B;&#x5B50; 1&#xFF0C;&#x548C; shRNA &#x6C89;&#x9ED8;&#x7684; MSH2 &#x963B;&#x788D;&#x91CD;&#x590D;&#x6269;&#x5C55;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x5B50;&#x5728; FRDA &#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x6269;&#x5F20;&#x89E3;&#x91CA;&#x3002;

&#x5F17;&#x91CC;&#x5FB7;&#x8D56;&#x5E0C;&#x7684;&#x5171;&#x6D4E;&#x5931;&#x8C03;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6A21;&#x578B;&#x4EE3;&#x9645; GAA&sdot;TTC &#x4E09;&#x8054;&#x4F53;&#x91CD;&#x590D;&#x52A8;&#x8361;&#x3002;

The inherited neurodegenerative disease Friedreich's ataxia (FRDA) is caused by GAAâ‹…TTC triplet repeat hyperexpansions within the first intron of the FXN gene, encoding the mitochondrial protein frataxin. Long GAAâ‹…TTC repeats cause heterochromatin-mediated gene silencing and loss of frataxin in affected individuals. We report the derivation of induced pluripotent stem cells (iPSCs) from FRDA patient fibroblasts by transcription factor reprogramming. FXN gene repression is maintained in the iPSCs, as are the global gene expression signatures reflecting the human disease. GAAâ‹…TTC repeats uniquely in FXN in the iPSCs exhibit repeat instability similar to patient families, where they expand and/or contract with discrete changes in length between generations. The mismatch repair enzyme MSH2, implicated in repeat instability in other triplet repeat diseases, is highly expressed in pluripotent cells and occupies FXN intron 1, and shRNA silencing ofÂ MSH2 impedes repeat expansion, providing a possible molecular explanation for repeat expansion in FRDA.

Friedreich's ataxia induced pluripotent stem cells model intergenerational GAAâ‹…TTC triplet repeat instability.

Ataxie de Friedreich maladie neurod&#xE9;g&#xE9;n&#xE9;rative h&#xE9;r&#xE9;ditaire de (FRDA) est provoqu&#xE9; par hyperexpansions GAA TTC &#x22C5; Les r&#xE9;p&#xE9;t&#xE9;es triplet dans le premier intron du g&#xE8;ne FXN, codant pour la prot&#xE9;ine mitochondriale frataxine. &#x22C5; Les r&#xE9;p&#xE9;titions longues GAA TTC provoquer gene silencing h&#xE9;t&#xE9;rochromatine m&#xE9;diation et la perte de la frataxine chez les individus affect&#xE9;s. Nous rapportons la d&#xE9;rivation de cellules souches pluripotentes induites (CISP) &#xE0; partir de fibroblastes de patients atteints d&#x26;#39;AF par le facteur de transcription de la reprogrammation. La r&#xE9;pression des g&#xE8;nes FXN est maintenu dans les CSPi, comme le sont les signatures d&#x26;#39;expression g&#xE9;nique mondiaux refl&#xE9;tant la maladie humaine. GAA TTC &#x22C5; r&#xE9;p&#xE8;te uniquement dans FXN dans l&#x26;#39;instabilit&#xE9; CSPi r&#xE9;p&#xE9;tition exposition similaire aux familles des patients, o&#xF9; ils se d&#xE9;tendent et / ou d&#x26;#39;un contrat avec des changements discrets de longueur entre les g&#xE9;n&#xE9;rations. L&#x26;#39;enzyme de r&#xE9;paration des m&#xE9;sappariements MSH2, impliqu&#xE9; dans l&#x26;#39;instabilit&#xE9; de r&#xE9;p&#xE9;tition en r&#xE9;p&#xE9;tition de triplets d&#x26;#39;autres maladies, est fortement exprim&#xE9; dans les cellules pluripotentes et occupe FXN intron 1, et de la r&#xE9;pression shRNA de MSH2 entrave l&#x26;#39;expansion de r&#xE9;p&#xE9;tition, en fournissant une explication possible pour l&#x26;#39;expansion mol&#xE9;culaire r&#xE9;p&#xE9;tition dans FRDA.

L&#x26;#39;ataxie de Friedreich pluripotentes induites sur les cellules souches mod&#xE8;le interg&#xE9;n&#xE9;rationnel GAA TTC &#x22C5; instabilit&#xE9; des r&#xE9;p&#xE9;titions Triplet

Die vererbte Neurodegenerative Krankheit Friedreich Ataxie (Krankheit) wird durch GAA&sdot;TTC Triplet wiederholte Hyperexpansions innerhalb der ersten Intron des FRDA-Gens, Codierung der mitochondrialen Protein Frataxin verursacht. Lange GAA&sdot;TTC wiederholt Ursache Heterochromatin-vermittelte gen-silencing und Verlust von Frataxin in betroffenen Einzelpersonen. Wir Bericht die Ableitung von induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) Krankheit Patienten Fibroblasten durch Transkription Faktor Neuprogrammierung. FRDA gen Unterdr&uuml;ckung ist in die iPSCs aufrechterhalten, als das globale Gen Ausdruck Signaturen reflektieren die menschliche Krankheit sind. GAA&sdot;TTC Wiederholungen eindeutig im FRDA in die iPSCs weisen &auml;hnlich dem Patienten Familien, in denen sie/erweitern oder Vertrag mit diskreten Ver&auml;nderungen in der L&auml;nge zwischen den Generationen wiederholen Instabilit&auml;t. Das Missverh&auml;ltnis-Reparatur-Enzym MSH2, wiederholen Instabilit&auml;t in anderen Triplet-wiederholen-Krankheiten in Verbindung gebracht wird hoch in pluripotente Zellen ausgedr&uuml;ckt und nimmt FRDA Intron 1 und ShRNA zum Schweigen der MSH2 wiederholen Erweiterung, die eine m&ouml;gliche Molekulare Erkl&auml;rung f&uuml;r eine Wiederholung Expansion in Krankheit behindert.

Friedreich Ataxie induzierte pluripotente Stammzellen Modell generationen&uuml;bergreifenden GAA&sdot;TTC Triplet wiederholte Instabilit&auml;t.

Atassia di Friedreich di malattie neurodegenerative ereditarie (FRDA) &egrave; causato da GAA&sdot;TTC triplet repeat hyperexpansions all&#39;interno del primo introne del gene FXN, che codifica per la proteina mitocondriale fratassina. GAA&sdot;TTC lunga ripete causa eterocromatina-mediata del gene silencing e perdita di fratassina nei soggetti affetti. Riportiamo la derivazione di cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs) da fibroblasti di pazienti FRDA riprogrammando transcription factor. Repressione del gene FXN &egrave; mantenuto in iPSCs, come lo sono il gene globale le firme di espressione che riflette la malattia umana. GAA&sdot;TTC si ripete in modo univoco in FXN nelle iPSCs presentano instabilit&agrave; ripetizione simile al paziente famiglie, dove essi espandere o contrarre con discrete variazioni di lunghezza tra le generazioni. L&#39;enzima di riparazione mismatch MSH2, implicato nella ripetizione instabilit&agrave; in altre malattie di ripetizione di terzina, &egrave; altamente espresso in cellule pluripotenti e occupa introne FXN 1 e shRNA silenziamento di MSH2 impedisce l&#39;espansione di ripetizione, fornendo una possibile spiegazione molecolare per l&#39;espansione di ripetizione in FRDA.

Atassia di Friedreich induced pluripotent stem cells modello intergenerazionale GAA&sdot;TTC terzina ripetizione instabilit&agrave;.

&#x7D99;&#x627F;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x795E;&#x7D4C;&#x5909;&#x6027;&#x75BE;&#x60A3;&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D2;&#x5931;&#x8ABF;&#x75C7;&#xFF08;FRDA&#xFF09;&#x306F;&#x30DF;&#x30C8;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C9;&#x30EA;&#x30A2;&#x306E;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30E9;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x3092;&#x30B3;&#x30FC;&#x30C9;FXN&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x7B2C;1&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;&#x5185;&#x306E;GAA&#x22C5;TTC&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;hyperexpansions&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30ED;&#x30F3;&#x30B0;GAA&#x22C5;TTC&#x304C;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x500B;&#x4EBA;&#x306E;&#x30D8;&#x30C6;&#x30ED;&#x30AF;&#x30ED;&#x30DE;&#x30C1;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x30D5;&#x30E9;&#x30BF;&#x30AD;&#x30B7;&#x30F3;&#x306E;&#x640D;&#x5931;&#x3092;&#x5F15;&#x304D;&#x8D77;&#x3053;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x8EE2;&#x200B;&#x200B;&#x5199;&#x56E0;&#x5B50;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;FRDA&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x7DDA;&#x7DAD;&#x82BD;&#x7D30;&#x80DE;&#x304B;&#x3089;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#xFF08;&#x6027;IPSC&#xFF09;&#x306E;&#x5C0E;&#x51FA;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x30D2;&#x30C8;&#x306E;&#x75BE;&#x60A3;&#x3092;&#x53CD;&#x6620;&#x3057;&#x305F;&#x30B0;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D0;&#x30EB;&#x306A;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x767A;&#x73FE;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CD;&#x30C1;&#x30E3;&#x304C;&#x3042;&#x308B;&#x3088;&#x3046;FXN&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6291;&#x5236;&#x306F;&#x3001;&#x6027;IPSC&#x306B;&#x4FDD;&#x6301;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002; GAA&#x22C5;TTC&#x306F;&#x3001;&#x5F7C;&#x3089;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x3057;&#x3066;/&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3001;&#x4E16;&#x4EE3;&#x9593;&#x306E;&#x9577;&#x3055;&#x3067;&#x96E2;&#x6563;&#x5909;&#x5316;&#x3068;&#x306E;&#x5951;&#x7D04;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x60A3;&#x8005;&#x306E;&#x5BB6;&#x65CF;&#x306B;&#x4F3C;&#x6027;IPSC&#x306E;&#x5C55;&#x793A;&#x3092;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x306B;FXN&#x3067;&#x4E00;&#x610F;&#x306B;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ED6;&#x306E;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x75C5;&#x3067;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306B;&#x95A2;&#x4E0E;&#x3059;&#x308B;&#x30DF;&#x30B9;&#x30DE;&#x30C3;&#x30C1;&#x4FEE;&#x5FA9;&#x9175;&#x7D20;MSH2&#x306F;&#x3001;&#x975E;&#x5E38;&#x306B;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x7D30;&#x80DE;&#x3067;&#x767A;&#x73FE;&#x3055;&#x305B;&#x3001;FXN&#x30A4;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30F3;1&#x3092;&#x5360;&#x3081;&#x3001;MSH2&#x306E;shRNA&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30EC;&#x30F3;&#x30B7;&#x30F3;&#x30B0;&#x306F;&#x3001;FRDA&#x306E;&#x7E70;&#x308A;&#x8FD4;&#x3057;&#x62E1;&#x5F35;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x5206;&#x5B50;&#x306E;&#x8AAC;&#x660E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x3001;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x62E1;&#x5927;&#x3092;&#x59A8;&#x3052;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3002;&#x3066;&#x3044;&#x308B;

&#x30D5;&#x30EA;&#x30FC;&#x30C9;&#x30E9;&#x30A4;&#x30D2;&#x5931;&#x8ABF;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306E;&#x4E16;&#x4EE3;GAA&#x22C5;TTC&#x30C8;&#x30EA;&#x30D7;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x30EA;&#x30D4;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x4E0D;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;

&#xC0C1;&#xC18D; &#xB41C; &#xC2E0;&#xACBD; &#xD1F4;&#xD589; &#xC131; &#xC9C8;&#xBCD1; &#xD504;&#xB9AC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E4; &#xC870; &#xC99D; (FRDA) GAA&sdot;TTC triplet &#xBC18;&#xBCF5; hyperexpansions &#xC778;&#xCF54;&#xB529; &#xBBF8;&#xD1A0; &#xCF58; &#xB4DC;&#xB9AC; &#xC544; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; frataxin FXN &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xCCAB; &#xBC88;&#xC9F8; intron &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE34; GAA&sdot;TTC frataxin &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xAC1C;&#xC778;&#xC758; &#xC190;&#xC2E4;&#xACFC; &#xC6D0;&#xC778; &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC12C;&#xC73C;&#xB85C; &#xC911;&#xC7AC; &#xC785;&#xC744; &#xBC18;&#xBCF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xC804;&#xC0AC; &#xC694;&#xC18C;&#xB97C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D; &#xD558; &#xC5EC; FRDA &#xD658;&#xC790;&#xC758; &#xC12C;&#xC720; &#xC544; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; (iPSCs)&#xC758; &#xC720;&#xB798;&#xB97C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC744; &#xBC18;&#xC601; &#xC2DD; &#xC11C;&#xBA85; &#xAE00;&#xB85C;&#xBC8C; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xB294; FXN &#xC720;&#xC804;&#xC790; &#xC5B5;&#xC81C;&#xB294; Ipscs&#xC5D0; &#xC720;&#xC9C0; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC720;&#xC77C; &#xD558; &#xAC8C;&#xB294; Ipscs&#xC5D0;&#xC11C; FXN&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; GAA&sdot;TTC &#xBC18;&#xBCF5; &#xBC18;&#xBCF5; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xD658;&#xC790; &#xAC00;&#xC871;, &#xC5B4;&#xB514; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC740; &#xD655;&#xC7A5; &#xBC0F; &#xC138;&#xB300; &#xAC04;&#xC758; &#xAE38;&#xC774;&#xC5D0; &#xAC1C;&#xBCC4; &#xBCC0;&#xACBD; &#xACC4;&#xC57D; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD55C; &#xC804;&#xC2DC;. &#xBD88;&#xC77C;&#xCE58; &#xBCF5;&#xAD6C; &#xD6A8;&#xC18C; MSH2, &#xBC18;&#xBCF5; &#xBD88;&#xC548;&#xC815; &#xB2E4;&#xB978; triplet &#xBC18;&#xBCF5; &#xC9C8;&#xBCD1;&#xC5D0; &#xC5F0;&#xB8E8; &#xB192;&#xC740; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC138;&#xD3EC; &#xB2E8;&#xC704;&#xB85C; FXN intron 1, &#xCC28;&#xC9C0; &#xACE0; shRNA msh2&#xC758; &#xC785;&#xC744; &#xB9C9;&#xC544; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD655;&#xC7A5;, &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; FRDA&#xC5D0;&#xC11C; &#xBC18;&#xBCF5; &#xD655;&#xC7A5; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xBD84;&#xC790; &#xC124;&#xBA85;.

&#xD504;&#xB9AC;&#xC758; &#xC6B4;&#xB3D9; &#xC2E4; &#xC870; &#xC99D; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC; &#xBAA8;&#xB378; &#xC138;&#xB300;&#xAC04; GAA&sdot;TTC triplet &#xBC18;&#xBCF5; &#xBD88;&#xC548;&#xC815;.

Ataxia de Friedreich La enfermedad neurodegenerativa hereditaria (FRDA) es causada por la repetici&#xF3;n GAA &#x22C5; hyperexpansions TTC triplete en el primer intr&#xF3;n del gen FXN, que codifica la prote&#xED;na mitocondrial frataxina. Largas GAA se repite &#x22C5; TTC provocar heterocromatina mediada por silenciamiento de los genes y la p&#xE9;rdida de la frataxina en los individuos afectados. Se presenta la derivaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas (iPSCs) a partir de fibroblastos de pacientes de FRDA por el factor de transcripci&#xF3;n reprogramaci&#xF3;n. Represi&#xF3;n FXN gen se mantiene en las iPSCs, como son los genes de las firmas globales de expresi&#xF3;n que reflejan la enfermedad humana. &#x22C5; GAA TTC repite &#xFA;nicamente en FXN en la inestabilidad de repeticiones de iPSCs exposici&#xF3;n similar a la familias de los pacientes, donde se expanden y / o contrato con cambios discretos en la longitud entre las generaciones. La enzima de reparaci&#xF3;n de genes MSH2, implicado en la inestabilidad se repiten en otras enfermedades de repetici&#xF3;n de triplete, es altamente expresado en c&#xE9;lulas pluripotentes y ocupa FXN intr&#xF3;n 1, y el silenciamiento del MSH2 shRNA impide expansi&#xF3;n de la repetici&#xF3;n, proporciona una posible explicaci&#xF3;n molecular para la expansi&#xF3;n de la repetici&#xF3;n en la Ataxia de Friedreich.

Ataxia de Friedreich pluripotentes inducidas C&#xE9;lulas Madre Modelo de Intergeneracional GAA &#x22C5; triplete TTC inestabilidad de repeticiones de

&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x662F;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x548C;&#x8BF1;&#x5BFC;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5E94;&#x7528;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5BF9; 186 &#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x548C; 119 nonpluripotent &#x6837;&#x54C1;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x9AD8;&#x5206;&#x8FA8;&#x7387;&#x7684;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027; &#xFF08;&#x5355;&#x6838;&#x82F7;&#x9178;&#x591A;&#x6001;&#x6027;&#xFF09; &#x5206;&#x6790;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x62A5;&#x544A; subchromosomal &#x526F;&#x672C;&#x6570;&#x53D8;&#x5316;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x6837;&#x54C1;&#x4E0E;&#x7279;&#x5B9A;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x533A;&#x57DF;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x53D8;&#x5316;&#x76F8;&#x6BD4; nonpluripotent &#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x7684;&#x8F83;&#x9AD8;&#x7684;&#x9891;&#x7387;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53D8;&#x5316;&#x7684;&#x5206;&#x5E03;&#x4E0D;&#x540C;&#x4E4B;&#x95F4; hESCs &#x548C; hiPSCs&#xFF0C;&#x7279;&#x70B9;&#x662F;&#x5927;&#x91CF;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x51E0;&#x4E2A; hESC &#x6837;&#x672C;&#x548C;&#x9002;&#x4E2D;&#x6570;&#x91CF;&#x7684;&#x5220;&#x9664;&#x5206;&#x5E03;&#x5728;&#x8BB8;&#x591A; hiPSC &#x6837;&#x54C1;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x3002;&#x4E3A; hiPSCs&#xFF0C;&#x7F16;&#x7A0B;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x662F;&#x4E0E;&#x80BF;&#x7624;&#x6291;&#x5236;&#x57FA;&#x56E0;&#xFF0C;&#x5220;&#x9664;&#x76F8;&#x5173;&#x8054;&#xFF0C;&#x800C;&#x6587;&#x5316;&#x4E2D;&#x7684;&#x65F6;&#x95F4;&#x662F;&#x4E0E;&#x91CD;&#x590D;&#x81F4;&#x7624;&#x76F8;&#x5173;&#x57FA;&#x56E0;&#x7684;&#x5173;&#x8054;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8FD8;&#x89C2;&#x5BDF;&#x5230;&#x4E00;&#x79CD;&#x5206;&#x5316;&#x534F;&#x8BAE;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x4E2D;&#x51FA;&#x73B0;&#x7684;&#x91CD;&#x590D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x7814;&#x7A76;&#x7ED3;&#x679C;&#x8BF4;&#x660E;&#x57FA;&#x56E0;&#x5F02;&#x5E38;&#x7684;&#x591A;&#x80FD;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x6027;&#x8D28;&#x548C;&#x9700;&#x8981;&#x9891;&#x7E41;&#x7684;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x76D1;&#x6D4B;&#x4EE5;&#x786E;&#x4FDD;&#x8868;&#x578B;&#x7A33;&#x5B9A;&#x548C;&#x4E34;&#x5E8A;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3002;

&#x62F7;&#x8D1D;&#x6570;&#x7684;&#x591A;&#x6F5C;&#x80FD;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6269;&#x6563;&#x57FA;&#x56E0;&#x5728;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x80DA;&#x80CE;&#x5E72;&#x7EC6;&#x80DE;&#x548C;&#x9B54;&#x9B3C;&#x671F;&#x95F4;&#x91CD;&#x65B0;&#x7F16;&#x7A0B;&#x548C;&#x6587;&#x5316;&#x5728;&#x65F6;&#x95F4;&#x4E2D;&#x7684;&#x52A8;&#x6001;&#x53D8;&#x5316;&#x3002;

Genomic stability is critical for the clinical use of human embryonic and induced pluripotent stem cells. We performed high-resolution SNP (single-nucleotide polymorphism) analysis on 186 pluripotent and 119 nonpluripotent samples. We report a higher frequency of subchromosomal copy number variations in pluripotent samples compared to nonpluripotent samples, with variations enriched in specific genomic regions. The distribution of these variations differed between hESCs and hiPSCs, characterized by large numbers of duplications found in a few hESC samples and moderate numbers of deletions distributed across many hiPSC samples. For hiPSCs, the reprogramming process was associated with deletions of tumor-suppressor genes, whereas time in culture was associated with duplications of oncogenic genes. We also observed duplications that arose during a differentiation protocol. Our results illustrate the dynamic nature of genomic abnormalities in pluripotent stem cells and the need for frequent genomic monitoring to assure phenotypic stability and clinical safety.

Dynamic changes in the copy number of pluripotency and cell proliferation genes in human ESCs and iPSCs during reprogramming and time in culture.

La stabilit&#xE9; g&#xE9;nomique est essentielle pour l&#x26;#39;utilisation clinique de l&#x26;#39;embryon de l&#x26;#39;homme et cellules souches pluripotentes induites. Nous avons effectu&#xE9; &#xE0; haute r&#xE9;solution SNP (polymorphisme nucl&#xE9;otidique unique) l&#x26;#39;analyse sur 186 119 &#xE9;chantillons pluripotentes et nonpluripotent. Nous rapportons une fr&#xE9;quence plus &#xE9;lev&#xE9;e de subchromosomal variations du nombre de copies dans des &#xE9;chantillons pluripotentes par rapport aux &#xE9;chantillons nonpluripotent, avec des variations enrichis en r&#xE9;gions g&#xE9;nomiques sp&#xE9;cifiques. La r&#xE9;partition de ces variations diff&#xE8;rent entre les CSEh et hiPSCs, caract&#xE9;ris&#xE9;es par un grand nombre de duplications trouv&#xE9;es dans quelques &#xE9;chantillons de CSEh et quelques num&#xE9;ros de mod&#xE9;r&#xE9;s de suppressions distribu&#xE9;s &#xE0; travers des &#xE9;chantillons hiPSC nombreux. Pour hiPSCs, le processus de reprogrammation a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; des d&#xE9;l&#xE9;tions de g&#xE8;nes suppresseurs de tumeur, alors que le temps dans la culture a &#xE9;t&#xE9; associ&#xE9;e &#xE0; des duplications de g&#xE8;nes oncog&#xE9;niques. Nous avons &#xE9;galement observ&#xE9; des duplications qui ont &#xE9;t&#xE9; soulev&#xE9;es lors d&#x26;#39;un protocole de diff&#xE9;renciation. Nos r&#xE9;sultats illustrent la nature dynamique des anomalies g&#xE9;nomiques dans les cellules souches pluripotentes et la n&#xE9;cessit&#xE9; d&#x26;#39;une surveillance fr&#xE9;quente g&#xE9;nomique pour assurer la stabilit&#xE9; ph&#xE9;notypique et la s&#xE9;curit&#xE9; clinique.

Changements dynamiques dans le nombre de copies de g&#xE8;nes de prolif&#xE9;ration cellulaire dans la pluripotence et les CES de l&#x26;#39;homme et CISP lors de la reprogrammation et l&#x26;#39;heure dans la culture

Genomische Stabilit&auml;t ist entscheidend f&uuml;r die klinische Verwendung von menschlichen embryonalen und induzierten pluripotenten Stammzellen. Wir spielten hochaufl&ouml;sende SNP (Single Nucleotide Polymorphismus) Analyse auf 186 pluripotenten und 119 Nonpluripotent Proben. Wir berichten &uuml;ber eine h&ouml;here Frequenz von subchromosomal Copy Number Variationen in pluripotente Proben im Vergleich zu Nonpluripotent Proben, mit Variationen in spezifischen genomischen Regionen bereichert. Die Verteilung dieser Varianten unterschieden sich zwischen Zellkulturen und HiPSCs, zeichnet sich durch gro&szlig;e Anzahl von &Uuml;berschneidungen gefunden in einigen hESC-Beispiele und mittlere Anzahl an L&ouml;schungen &uuml;ber viele HiPSC Proben verteilt. F&uuml;r HiPSCs war der Neuprogrammierung Prozess L&ouml;schungen Tumorsuppressor Gene, zugeordnet, w&auml;hrend der Zeit in Kultur Doppeleintrag Onkogene Gene verbunden war. Wir beobachteten auch &Uuml;berschneidungen, die eine Differenzierung-Protokoll auftraten. Unsere Ergebnisse zeigen die dynamische Natur der genomischen Anomalien in pluripotenten Stammzellen und die Notwendigkeit der h&auml;ufigen genomische &Uuml;berwachung um die ph&auml;notypische Stabilit&auml;t und klinische Sicherheit gew&auml;hrleisten.

Dynamische &Auml;nderungen in der Nummer der Ausfertigung der Pluripotenz und Zelle Verbreitung Gene in menschliche WSR und iPSCs w&auml;hrend der Neuprogrammierung und Zeit in Kultur.

Stabilit&agrave; genomica &egrave; critico per l&#39;uso clinico di cellule staminali pluripotenti indotte ed embrionale umano. Abbiamo eseguito analisi SNP (polimorfismo a singolo nucleotide) di ad alta risoluzione su 186 pluripotenti e 119 nonpluripotent campioni. Si riportano una maggiore frequenza di variazioni del numero di copia subchromosomal in pluripotenti campioni rispetto ai campioni di nonpluripotent, con variazioni arricchiti in specifiche regioni genomiche. La distribuzione di queste varianti differiva tra hESC e hiPSCs, caratterizzata da un gran numero di duplicati trovati in alcuni campioni hESC e un numero moderato di delezioni distribuiti in molti campioni di hiPSC. Per hiPSCs, il processo di riprogrammazione &egrave; stato associato con delezioni di geni del tumore-soppressore, considerando che il tempo nella cultura &egrave; stato associato con duplicazioni dei geni oncogeni. Abbiamo anche osservato duplicazioni che sorsero durante un protocollo di differenziazione. I nostri risultati dimostrano la natura dinamica di anomalie genomiche in cellule staminali pluripotenti e la necessit&agrave; di frequenti genomic monitoraggio per assicurare stabilit&agrave; fenotipica e sicurezza clinica.

Cambiamenti dinamici nel numero di copie dei geni di proliferazione pluripotenza e cellula umana CES e iPSCs durante la riprogrammazione e tempo nella cultura.

&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x306F;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;&#x80DA;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x8A98;&#x5C0E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x81E8;&#x5E8A;&#x4F7F;&#x7528;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x91CD;&#x8981;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x9AD8;&#x89E3;&#x50CF;&#x5EA6;&#x306E;SNP&#xFF08;&#x4E00;&#x5869;&#x57FA;&#x591A;&#x578B;&#xFF09;186&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;119 nonpluripotent&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306E;&#x5206;&#x6790;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x3001;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x6FC3;&#x7E2E;&#x3055;&#x306E;&#x30D0;&#x30EA;&#x30A8;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3092;&#x6301;&#x3064;nonpluripotent&#x8A66;&#x6599;&#x306B;&#x6BD4;&#x3079;&#x3066;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x8A66;&#x6599;&#x306E;subchromosomal&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306E;&#x9AD8;&#x5468;&#x6CE2;&#x3092;&#x5831;&#x544A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x306E;&#x5206;&#x5E03;&#x306F;&#x5C11;&#x6570;&#x306E;hESC&#x306E;&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x3068;&#x591A;&#x304F;&#x306E;hiPSC&#x30B5;&#x30F3;&#x30D7;&#x30EB;&#x306B;&#x5206;&#x6563;&#x3057;&#x3066;&#x6B20;&#x5931;&#x306E;&#x9069;&#x5EA6;&#x306A;&#x6570;&#x5024;&#x306B;&#x898B;&#x3089;&#x308C;&#x308B;&#x91CD;&#x8907;&#x306E;&#x591A;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7279;&#x5FB4;&#x3065;&#x3051;&#x3001;&#x30D2;&#x30C8;ES&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;hiPSCs&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x7570;&#x306A;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x4E2D;&#x3067;&#x6642;&#x9593;&#x304C;&#x767A;&#x764C;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x91CD;&#x8907;&#x3068;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x306E;&#x306B;&#x5BFE;&#x3057;&#x3001;hiPSCs&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x306F;&#x3001;&#x66F4;&#x65B0;&#x30D7;&#x30ED;&#x30BB;&#x30B9;&#x306F;&#x3001;&#x816B;&#x760D;&#x6291;&#x5236;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x6B20;&#x5931;&#x306B;&#x95A2;&#x9023;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x3001;&#x5DEE;&#x5225;&#x5316;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x4E2D;&#x306B;&#x751F;&#x3058;&#x305F;&#x91CD;&#x8907;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x6211;&#x3005;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x306F;&#x3001;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x5E79;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x7570;&#x5E38;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x306A;&#x6027;&#x8CEA;&#x3068;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x306E;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3068;&#x81E8;&#x5E8A;&#x4E0A;&#x306E;&#x5B89;&#x5168;&#x6027;&#x3092;&#x78BA;&#x4FDD;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x983B;&#x7E41;&#x306A;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x76E3;&#x8996;&#x306E;&#x5FC5;&#x8981;&#x6027;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30EA;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B0;&#x30E9;&#x30DF;&#x30F3;&#x30B0;&#x3068;&#x6587;&#x5316;&#x306E;&#x6642;&#x9593;&#x306E;&#x9593;&#x306B;&#x30D2;&#x30C8;ESC&#x3068;&#x6027;IPSC&#x306E;&#x591A;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x306E;&#x30B3;&#x30D4;&#x30FC;&#x6570;&#x306E;&#x52D5;&#x7684;&#x5909;&#x5316;

&#xAC8C;&#xB188; &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xC740; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xBC30;&#xC544; &#xBC0F; &#xC720;&#xB3C4; &#xB9CC;&#xB2A5; &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC784;&#xC0C1; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB9E4;&#xC6B0; &#xC911;&#xC694; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; 186 pluripotent 119 nonpluripotent &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xACE0;&#xD574;&#xC0C1;&#xB3C4; SNP (&#xB2E8;&#xC77C; &#xC5FC;&#xAE30; &#xB2E4;&#xD615;&#xC131;) &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xC218;&#xD589;. &#xC6B0;&#xB9AC; &#xBCF4;&#xACE0; &#xD2B9;&#xC815; &#xAC8C;&#xB188; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0; &#xD48D;&#xBD80; &#xD558; &#xAC8C; &#xBCC0;&#xD615; nonpluripotent &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574; pluripotent &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; subchromosomal &#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xBC88;&#xD638; &#xBCC0;&#xC774;&#xC758; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC720;&#xC0AC;&#xC758; &#xBD84;&#xD3EC; hESCs &#xBC0F; &#xC911;&#xBCF5; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; hESC &#xC0D8;&#xD50C; &#xBC0F; &#xC0AD;&#xC81C; &#xB9CE;&#xC740; hiPSC &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC0B0;&#xC758; &#xBC1C;&#xACAC;&#xC758; &#xB9CE;&#xC740; &#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD2B9;&#xC9D5; hiPSCs &#xC0AC;&#xC774; &#xB2EC;&#xB790;&#xB2E4;. HiPSCs&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xB2E4;&#xC2DC; &#xB9CC;&#xB4E4; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC04; &#xAD00;&#xB828; &#xAE08;&#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC911;&#xBCF5; &#xB41C; &#xBC18;&#xBA74; &#xC885;&#xC591; &#xC5B5;&#xC81C;&#xAE30; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC758; &#xC0AD;&#xC81C;&#xC640; &#xC5F0;&#xAD00; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xBD84;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xC911; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD558;&#xB294; &#xC911;&#xBCF5;&#xC744; &#xAD00;&#xCC30; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xAC8C;&#xB188; &#xC774;&#xC0C1;&#xC774; pluripotent &#xC904;&#xAE30; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC758; &#xB3D9;&#xC801; &#xD2B9;&#xC131; &#xBC0F; phenotypic &#xC548;&#xC815;&#xC131;&#xACFC; &#xC784;&#xC0C1; &#xC548;&#xC804;&#xC744; &#xBCF4;&#xC7A5; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574;&#xC11C; &#xC790;&#xC8FC; &#xAC8C;&#xB188; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD544;&#xC694;&#xC131;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBCF5;&#xC0AC;&#xBCF8; &#xC218; ESCs &#xC778;&#xAC04;&#xACFC; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB798;&#xBC0D;&#xC744; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; Ipscs&#xC5D0;&#xC11C; pluripotency&#xC640; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC720;&#xC804;&#xC790;&#xC640; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB3D9;&#xC801; &#xBCC0;&#xD654;.

Estabilidad gen&#xF3;mica es cr&#xED;tico para el uso cl&#xED;nico de embriones humanos y c&#xE9;lulas madre pluripotentes inducidas. Se realiz&#xF3; de alta resoluci&#xF3;n de SNP (polimorfismo de un solo nucle&#xF3;tido) en el an&#xE1;lisis de 186 pluripotentes y 119 muestras de nonpluripotent. Se presenta una mayor frecuencia de subchromosomal variaciones en el n&#xFA;mero de muestras pluripotentes comparaci&#xF3;n con las muestras nonpluripotent, con variaciones enriquecidas en regiones espec&#xED;ficas del genoma. La distribuci&#xF3;n de estas variaciones diferentes entre hESCs y hiPSCs, caracterizadas por un gran n&#xFA;mero de repeticiones que se encuentran en unos pocos ejemplos de hESC y un n&#xFA;mero moderado de deleciones distribuidas a trav&#xE9;s de muestras hiPSC muchos. Para hiPSCs, el proceso de reprogramaci&#xF3;n se asoci&#xF3; con deleciones de genes supresores de tumores, mientras que el tiempo en la cultura se asoci&#xF3; con una duplicaci&#xF3;n de los genes oncog&#xE9;nicos. Tambi&#xE9;n se observ&#xF3; la duplicaci&#xF3;n que se presentaron durante un protocolo de diferenciaci&#xF3;n. Nuestros resultados ilustran la naturaleza din&#xE1;mica de las alteraciones gen&#xF3;micas en c&#xE9;lulas madre pluripotentes y la necesidad de un monitoreo frecuente para asegurar la estabilidad gen&#xF3;mica y fenot&#xED;pica de seguridad cl&#xED;nica.

Los cambios din&#xE1;micos en el n&#xFA;mero de copias de genes de proliferaci&#xF3;n celular en la pluripotencia y CES Humanos y de las iPSCs durante la reprogramaci&#xF3;n y el tiempo en la cultura

Sherman Ku

Department of Molecular Biology

The Scripps Research Institute

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Sherman Ku

.css-o250i3{font-size:18px;font-family:Open Sans,sans-serif;line-height:21.6px;}Department of Molecular Biology

The Scripps Research Institute

Selecting and Isolating Colonies of Human Induced Pluripotent Stem Cells Reprogrammed from Adult Fibroblasts

Department of Molecular Biology