Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Microinjection of Xenopus laevis oocytes followed by thin-sectioning electron microscopy (EM) is an excellent system for studying nucleocytoplasmic ...

University of British Columbia - UBC

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Microinjection of Xenopus laevis oocytes is an excellent system for studying nuclear transport because of the large size of the oocyte and its high nuclear pore complex (NPC) density. In addition, the fact that Xenopus oocytes are not permissive for most mammalian viruses makes this system especially useful for studying nuclear transport of viruses in the absence of the confounding factor of virus replication. In this article, we briefly discuss the contribution of microinjection of Xenopus oocytes to the field of nuclear transport. We then describe the protocols we have developed using microinjection of Xenopus oocytes to study nuclear transport of viral capsids, and summarize variations of the technique that can be used to address many different questions about the nuclear transport of viruses.

Microinjection of Xenopus laevis oocytes as a system for studying nuclear transport of viruses.

Microinjection des ovocytes de Xenopus laevis est un excellent syst&egrave;me pour &eacute;tudier le transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires en raison de la grande taille de l&#39;ovocyte et sa densit&eacute; (NPC) complexe de pore nucl&eacute;aire &eacute;lev&eacute;. En outre, le fait que les ovocytes de Xenopus ne sont pas permissives des virus plus de mammif&egrave;res rend ce syst&egrave;me particuli&egrave;rement utile pour &eacute;tudier le transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires de virus en l&#39;absence du facteur confusionnel de r&eacute;plication du virus. Dans cet article, nous discutons bri&egrave;vement la contribution de la microinjection d&#39;ovocytes de Xenopus laevis dans le domaine du transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires. Nous d&eacute;crivons ensuite les protocoles que nous avons d&eacute;velopp&eacute; &agrave; l&#39;aide de la microinjection d&#39;ovocytes Xenopus pour &eacute;tudier le transport nucl&eacute;aire des capsides virales et de r&eacute;sumer des variantes de la technique qui permet d&#39;aborder les nombreuses questions diff&eacute;rentes sur le transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires de virus.

Microinjection des ovocytes de Xenopus laevis comme syst&egrave;me pour &eacute;tudier le transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires de virus.

Microinjection der Xenopus Laevis Eizellen ist ein ausgezeichnetes System f&uuml;r das Studium von Nukleartransporten wegen der Gr&ouml;&szlig;e der Eizelle und seine hohe nukleare komplexe (NPC) Porendichte. Dar&uuml;ber hinaus macht die Tatsache, dass Xenopus Oocytes nicht f&uuml;r die meisten S&auml;ugetier-Viren permissive dieses System besonders f&uuml;r nukleare Transport von Viren in Ermangelung der verzerrender Faktor der Virus-Replikation zu studieren. In diesem Artikel diskutieren wir kurz den Beitrag der Microinjection der Xenopus Oocytes auf dem Gebiet der Nukleartransporten. Dann beschreiben wir die Protokolle, die wir entwickelt haben, mit Microinjection der Xenopus Oocytes nukleare Transport von viralen Capsids zu studieren und Variationen dieser Technik, die verwendet werden k&ouml;nnen, um viele verschiedene Fragen &uuml;ber den nuklearen Transport von Viren zusammenfassen.

Microinjection der Xenopus Laevis Eizellen als System f&uuml;r nukleare Transport von Viren zu studieren.

Microiniezione degli ovociti di Xenopus laevis &egrave; un eccellente sistema per studiare il trasporto nucleare a causa delle grandi dimensioni dell&#39;ovocita e la densit&agrave; (NPC) complessa alto poro nucleare. Inoltre, il fatto che gli ovociti di Xenopus non sono permissivi per i virus pi&ugrave; mammiferi rende questo sistema particolarmente utile per studiare il trasporto nucleare di virus in assenza del fattore confondente della replicazione del virus. In questo articolo, abbiamo brevemente discutere il contributo della microiniezione degli ovociti di Xenopus nel campo dei trasporti nucleari. Abbiamo quindi descrivere i protocolli abbiamo sviluppato mediante Microiniezione degli ovociti di Xenopus studiare trasporto nucleare di capsidi virali, e riassumere le variazioni della tecnica che pu&ograve; essere utilizzato per affrontare molte diverse domande circa il trasporto nucleare di virus.

Microiniezione degli ovociti di Xenopus laevis come un sistema per studiare il trasporto nucleare di virus.

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Xenopus laevis oocytes microinjection &#xD575; &#xC804;&#xC1A1; &#xB41C; oocyte (NPC)&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xD575; &#xACF5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xBC00;&#xB3C4;&#xC758; &#xD070; &#xD06C;&#xAE30; &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xACF5;&#xBD80;&#xB97C; &#xC704;&#xD55C; &#xD6CC;&#xB96D;&#xD55C; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB610;&#xD55C;, Xenopus oocytes &#xAC00;&#xC7A5; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD5C8;&#xC6A9; &#xB418;&#xC9C0; &#xC54A;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC0AC;&#xC2E4;&#xC774;&#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xBCF5;&#xC81C;&#xC758; &#xD63C;&#xB3D9; &#xC694;&#xC778;&#xC774; &#xC5C6;&#xC744; &#xACBD;&#xC6B0;&#xC5D0;&#xB294; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD575; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC744; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xD2B9;&#xD788; &#xC720;&#xC6A9;&#xD55C; &#xAC8C;. &#xC774; &#xBB38;&#xC11C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xAC04;&#xB2E8; &#xD558; &#xAC8C; microinjection Xenopus oocytes &#xD575; &#xC804;&#xC1A1; &#xBD84;&#xC57C;&#xC5D0;&#xC758; &#xAE30;&#xC5EC; &#xB17C;&#xC758;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB2E4;&#xC74C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; capsids&#xC758; &#xD575; &#xC6B4;&#xC1A1;&#xC744; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558; &#xACE0; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xC758; &#xD575; &#xC804;&#xC1A1;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xAE30;&#xC220; &#xC694;&#xC57D; Xenopus oocytes&#xC758; microinjection&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xAC1C;&#xBC1C;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

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Microinyecci&oacute;n de ovocitos de Xenopus laevis es un excelente sistema para estudiar el transporte nuclear debido al gran tama&ntilde;o del ovocito y su densidad (NPC) complejo de poro nuclear alta. Adem&aacute;s, el hecho de que no son permisivos para virus mam&iacute;feros m&aacute;s ovocitos de Xenopus hace este sistema especialmente &uacute;til para el estudio de transporte nuclear de virus en la ausencia del factor de confusi&oacute;n de la replicaci&oacute;n del virus. En este art&iacute;culo, discutimos brevemente la contribuci&oacute;n de microinyecci&oacute;n de ovocitos de Xenopus al campo de transporte nuclear. A continuaci&oacute;n describimos los protocolos que hemos desarrollado con microinyecci&oacute;n de ovocitos de Xenopus para estudiar el transporte nuclear de la c&aacute;psida viral y resumir las variaciones de la t&eacute;cnica que puede utilizarse para tratar muchas preguntas diferentes sobre el transporte nuclear de virus.

Microinyecci&oacute;n de ovocitos de Xenopus laevis como un sistema para el estudio de transporte nuclear de virus.

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&#x75C5;&#x6BD2;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x7684;&#x8BBF;&#x95EE;&#x65B9;&#x5F0F;&#x3002;

Many viruses depend on nuclear proteins for replication. Therefore, their viral genome must enter the nucleus of the host cell. In this review we briefly summarize the principles of nucleocytoplasmic transport, and then describe the diverse strategies used by viruses to deliver their genomes into the host nucleus. Some of the emerging mechanisms include: (1) nuclear entry during mitosis, when the nuclear envelope is disassembled, (2) viral genome release in the cytoplasm followed by entry of the genome through the nuclear pore complex (NPC), (3) capsid docking at the cytoplasmic side of the NPC, followed by genome release, (4) nuclear entry of intact capsids through the NPC, followed by genome release, and (5) nuclear entry via virus-induced disruption of the nuclear envelope. Which mechanism a particular virus uses depends on the size and structure of the virus, as well as the cellular cues used by the virus to trigger capsid disassembly and genome release. This article is part of a Special Issue entitled: Regulation of Signaling and Cellular Fate through Modulation of Nuclear Protein Import.

How viruses access the nucleus.

De nombreux virus d&eacute;pendent des prot&eacute;ines nucl&eacute;aires pour la r&eacute;plication. Par cons&eacute;quent, leur g&eacute;nome viral doit entrer dans le noyau de la cellule h&ocirc;te. Dans cette revue, nous r&eacute;sumer bri&egrave;vement les principes de transport nucl&eacute;ocytoplasmique et ensuite d&eacute;crire les diverses strat&eacute;gies utilis&eacute;es par les virus pour livrer leurs g&eacute;nomes dans le noyau de l&#39;h&ocirc;te. Parmi les m&eacute;canismes &eacute;mergents : entr&eacute;e (1) nucl&eacute;aire au cours de la mitose, lors du d&eacute;montage, l&#39;enveloppe nucl&eacute;aire (2) viral g&eacute;nome lib&eacute;rer dans le cytoplasme, suivi par l&#39;entr&eacute;e du g&eacute;nome par le complexe du pore nucl&eacute;aire (NPC), (3) capside d&#39;amarrage sur le c&ocirc;t&eacute; cytoplasmique de l&#39;APN, suivie par la lib&eacute;ration de g&eacute;nome, entr&eacute;e (4) nucl&eacute;aire des capsides intactes &agrave; travers le NPC, suivie par la lib&eacute;ration de g&eacute;nomeet (5) entr&eacute;e nucl&eacute;aire par l&#39;interm&eacute;diaire de perturbation induite par le virus de l&#39;enveloppe nucl&eacute;aire. Quel m&eacute;canisme utilise un virus particulier d&eacute;pend de la taille et la structure du virus, ainsi que les signaux cellulaires utilis&eacute;es par le virus pour d&eacute;clencher le d&eacute;montage de la capside et la lib&eacute;ration de g&eacute;nome. Cet article fait partie d&#39;un num&eacute;ro sp&eacute;cial intitul&eacute; : r&egrave;glement de signalisation et destin cellulaire par l&#39;interm&eacute;diaire de Modulation d&#39;Import de prot&eacute;ines nucl&eacute;aires.

Comment acc&eacute;der &agrave; virus du noyau.

Viele Viren h&auml;ngen von nuklearen Proteine f&uuml;r die Replikation. Deshalb muss ihr virale Genom im Zellkern der Wirtszelle eingeben. In diesem Bericht wir fassen kurz zusammen, die Grunds&auml;tze der Nucleocytoplasmic Transport und dann beschreiben die verschiedenen Strategien, die von Viren verwendet werden, um ihre Genome in den Host-Zellkern zu liefern. Einige der aufstrebenden Mechanismen geh&ouml;ren: (1) nukleare Eintrag w&auml;hrend der Mitose, wenn die Kernh&uuml;lle demontiert ist, (2) virale Genom lassen in das Zytoplasma, gefolgt vom Eintrag des Genoms durch den nuklearen Pore-Komplex (NPC), (3) Kapsid Andocken an der zytoplasmatischen Seite der NPC, gefolgt von Genom-Version (4) nukleare Eintrag von intakten Capsids durch den NPC, gefolgt von Genom-Version, und (5) nukleare Eintrag &uuml;ber Virus-induzierte St&ouml;rung der Kernh&uuml;lle. Welche Mechanismen, die ein bestimmter Virus verwendet h&auml;ngt von der Gr&ouml;&szlig;e und Struktur des Virus sowie die zellul&auml;re Signale, die vom Virus zum Ausl&ouml;sen von Kapsid Demontage und Genom-Version verwendet. Dieser Artikel ist Teil einer Spezial-Ausgabe mit dem Titel: Verordnung des Signal- und zellulare Schicksal durch Modulation of Nuclear Protein Import.

Wie Viren den Zellkern zugreifen.

Molti virus dipendono dalle proteine nucleari per la replica. Quindi, loro genoma virale deve entrare il nucleo della cellula ospite. In questa recensione abbiamo brevemente riassumere i principi di trasporto nucleo-citoplasmatici e quindi descrivere le diverse strategie utilizzate dal virus per consegnare loro genoma nel nucleo ospitante. Alcuni dei meccanismi emergenti comprendono: (1) nucleare entrata durante la mitosi, quando la membrana nucleare &egrave; smontato, genoma virale (2) rilascio nel citoplasma seguito dalla voce del genoma attraverso il complesso nucleare del poro (NPC), (3) capside aggancio sul lato citoplasmatico del NPC, seguita dal rilascio di genoma, voce (4) nucleare di capsidi intatti attraverso il NPC, seguito dal rilascio del genomae (5) voce nucleare via perturbazione indotta dal virus della busta nucleare. Quale meccanismo utilizza un particolare virus dipende la dimensione e la struttura del virus, come pure le stecche cellulare utilizzate dal virus per attivare lo smontaggio del capside e rilascio del genoma. Questo articolo fa parte di un numero speciale dal titolo: regolamento di segnalazione e destino cellulare attraverso la modulazione di importazione nucleare della proteina.

Come virus accesso al nucleo.

&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x306E;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3057;&#x305F;&#x304C;&#x3063;&#x3066;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x3092;&#x5165;&#x529B;&#x3057;&#x3066;&#x304F;&#x3060;&#x3055;&#x3044;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30EC;&#x30D3;&#x30E5;&#x30FC;&#x3067;&#x306F;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x9593;&#x8F38;&#x9001;&#x306E;&#x539F;&#x7406;&#x3092;&#x7C21;&#x5358;&#x306B;&#x8981;&#x7D04;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30DB;&#x30B9;&#x30C8;&#x6838;&#x306B;&#x5F7C;&#x3089;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x591A;&#x69D8;&#x306A;&#x6226;&#x7565;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x65B0;&#x8208;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3092;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#xFF1A; &#xFF08;1&#xFF09; &#x6838;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x6709;&#x7CF8;&#x5206;&#x88C2;&#x6642;&#x6838;&#x5C01;&#x7B52;&#x3092;&#x9006;&#x30A2;&#x30BB;&#x30F3;&#x30D6;&#x30EB;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x3001;(2) &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6838;&#x819C;&#x5B54;&#x8907;&#x5408;&#x4F53; &#xFF08;NPC&#xFF09; (3) (4) &#x6838;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA; &#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;NPC &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0; &#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;NPC &#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x5074;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x306E;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x306B;&#x7D9A;&#x3044;&#x3066;&#x3001;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x8A98;&#x767A;&#x4E2D;&#x65AD;&#x6838;&#x819C;&#x306E;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066; (5) &#x6838;&#x30A8;&#x30F3;&#x30C8;&#x30EA;&#x3002;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3069;&#x306E;&#x30E1;&#x30AB;&#x30CB;&#x30BA;&#x30E0;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30BA;&#x3068;&#x3001;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x5206;&#x89E3;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x306E;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3092;&#x30C8;&#x30EA;&#x30AC;&#x30FC;&#x3059;&#x308B;&#x4F7F;&#x7528;&#x643A;&#x5E2F;&#x96FB;&#x8A71;&#x5408;&#x56F3;&#x306E;&#x69CB;&#x9020;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x7570;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3068;&#x984C;&#x3059;&#x308B;&#x7279;&#x96C6;&#x306E;&#x4E00;&#x90E8;&#x3067;&#x3059;&#xFF1A; &#x898F;&#x5236;&#x306E;&#x30B7;&#x30B0;&#x30CA;&#x30EB;&#x4F1D;&#x9054;&#x3068;&#x7D30;&#x80DE;&#x904B;&#x547D;&#x6838;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x8ABF;&#x3092;&#x4ECB;&#x3057;&#x3066;&#x3002;

&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x6838;&#x3078;&#x306E;&#x30A2;&#x30AF;&#x30BB;&#x30B9;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3002;

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&#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4;&#xB294; &#xD575;&#xC744; &#xC561;&#xC138;&#xC2A4; &#xD558;&#xB294; &#xBC29;&#xBC95;.

Muchos virus dependen de prote&iacute;nas nucleares para la replicaci&oacute;n. Por lo tanto, su genoma viral debe introducir el n&uacute;cleo de la c&eacute;lula hu&eacute;sped. En esta revisi&oacute;n resumimos brevemente los principios de transporte NUCLEOCITOPLASM&Aacute;TICO y luego describir las diversas estrategias utilizadas por virus para entregar sus genomas en el n&uacute;cleo del anfitri&oacute;n. Algunos de los mecanismos emergentes incluyen: entrada (1) nuclear durante la mitosis, la envoltura nuclear est&aacute; desmontada, genoma (2) viral liberar en el citoplasma seguido por entrada del genoma a trav&eacute;s del complejo del poro nuclear (NPC), (3) c&aacute;pside atracan en el lado citoplasm&aacute;tico de la APN, seguida por genoma, entrada (4) nuclear de c&aacute;psida intacta a trav&eacute;s de la APN, seguida por genomay (5) entrada nuclear v&iacute;a la interrupci&oacute;n inducida por virus de la envoltura nuclear. Qu&eacute; mecanismo utiliza un virus en particular depende en el tama&ntilde;o y la estructura de los virus, as&iacute; como las se&ntilde;ales celulares que utiliza el virus para desencadenar el desmontaje de la c&aacute;pside y liberaci&oacute;n del genoma. Este art&iacute;culo forma parte de una edici&oacute;n especial titulada: regulaci&oacute;n de la se&ntilde;alizaci&oacute;n y destino celular a trav&eacute;s de la modulaci&oacute;n de importaci&oacute;n de prote&iacute;nas nucleares.

&iquest;C&oacute;mo el virus al n&uacute;cleo.

&#x6746;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x662F;&#x5728;&#x5176;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E2D;&#x590D;&#x5236;&#x7684;&#x6700;&#x5927;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x671F;&#x95F4;&#x611F;&#x67D3;&#x8863;&#x58F3;&#xFF0C;&#x542B;&#x6709; DNA &#x75C5;&#x6BD2;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#xFF0C;&#x88AB;&#x91CA;&#x653E;&#x5230;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x548C;&#x5728;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x65F6;&#x5C06;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x4F20;&#x9001;&#x5230;&#x539F;&#x5B50;&#x6838;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x673A;&#x5236;&#xFF0C;&#x4E3B;&#x8981;&#x662F;&#x672A;&#x77E5;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x91CC;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x82DC;&#x84FF;&#x5C3A;&#x8816;&#x6606;&#x866B;&#x6746;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2; capsids &#x591A;&#x591A;&#x89D2;&#x4F53;&#x75C5;&#x6BD2;&#x4E0E;&#x7ED3;&#x5408;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x663E;&#x5FAE;&#x955C;&#xFF0C;&#x53D1;&#x73B0;&#x8FD9;&#x8863;&#x58F3;&#x8DE8;&#x8D8A;&#x4EBA;&#x5927;&#x548C;&#x8FDB;&#x5165;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6838;&#x4E0D;&#x53D8;&#xFF0C;&#x5B83;&#x6240;&#x91CA;&#x653E;&#x5176;&#x57FA;&#x56E0;&#x7EC4;&#x3002;&#x4E3A;&#x4E86;&#x66F4;&#x597D;&#x5730;&#x8BF4;&#x660E;&#x6B64;&#x8863;&#x58F3;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EBA;&#x5927;&#x5728;&#x5176;&#x672C;&#x673A;&#x7684;&#x6784;&#x8C61;&#x4E2D;&#x7684;&#x5B58;&#x5728;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x91CD;&#x5EFA;&#x4F7F;&#x7528;&#x7535;&#x5B50;&#x65AD;&#x5C42;&#x626B;&#x63CF;&#x7684;&#x6838;&#x5BFC;&#x5165;&#x4E8B;&#x4EF6;&#x3002;&#x6B64;&#x5916;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5B9E;&#x9A8C;&#x6761;&#x4EF6;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5F97;&#x4EE5;&#x53EF;&#x89C6;&#x5316;&#x4EA4;&#x4E92;&#x4EBA;&#x5927;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8D28;&#x7EC6;&#x4E1D;&#xFF0C;&#x6700;&#x521D;&#x505C;&#x9760;&#x7AD9;&#x70B9;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x901A;&#x8FC7;&#x4EBA;&#x5927;&#x4E2D;&#x9014;&#x5C9B;&#x7684;&#x5B8C;&#x597D;&#x8863;&#x58F3;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x8868;&#x660E;&#x5168;&#x56FD;&#x4EBA;&#x5927;&#x4E2D;&#x592E;&#x901A;&#x9053;&#x7ECF;&#x5386;&#x5927;&#x89C4;&#x6A21;&#x7684;&#x91CD;&#x6392;&#x5141;&#x8BB8;&#x5B8C;&#x597D; 250 nm &#x957F;&#x6746;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x8863;&#x58F3;&#x6613;&#x4F4D;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6211;&#x4EEC;&#x6839;&#x636E;&#x5168;&#x56FD;&#x4EBA;&#x5927;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x5047;&#x8BBE;&#x6A21;&#x578B;&#x7684;&#x7ED3;&#x679C;&#x3002;

&#x6746;&#x72B6;&#x75C5;&#x6BD2;&#x7684;&#x6838;&#x8FD0;&#x8F93;&#xFF1A; &#x63ED;&#x793A;&#x6838;&#x590D;&#x6742;&#x5B54;&#x9053;&#x3002;

Baculoviruses are one of the largest viruses that replicate in the nucleus of their host cells. During an infection the capsid, containing the DNA viral genome, is released into the cytoplasm and delivers the genome into the nucleus by a mechanism that is largely unknown. Here, we used capsids of the baculovirus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus in combination with electron microscopy and discovered this capsid crosses the NPC and enters into the nucleus intact, where it releases its genome. To better illustrate the existence of this capsid through the NPC in its native conformation, we reconstructed the nuclear import event using electron tomography. In addition, using different experimental conditions, we were able to visualize the intact capsid interacting with NPC cytoplasmic filaments, as an initial docking site, and midway through the NPC. Our data suggests the NPC central channel undergoes large-scale rearrangements to allow translocation of the intact 250-nm long baculovirus capsid. We discuss our results in the light of the hypothetical models of NPC function.

Nuclear transport of baculovirus: Revealing the nuclear pore complex passage.

Les baculovirus sont un des plus gros virus qui reproduisent dans le noyau de leurs cellules de l&#39;h&ocirc;te. Lors d&#39;une infection, la capside, contenant le g&eacute;nome de l&#39;ADN viral, est lib&eacute;r&eacute;e dans le cytoplasme et fournit le g&eacute;nome dans le noyau par un m&eacute;canisme qui est en grande partie inconnu. Ici, nous avons utilis&eacute; les capsides du baculovirus Autographa californica multiple nucleopolyhedrovirus en combinaison avec la microscopie &eacute;lectronique et d&eacute;couvert cette capside traverse le NPC et p&eacute;n&egrave;tre dans le noyau intact, o&ugrave; il lib&egrave;re son g&eacute;nome. Pour mieux illustrer l&#39;existence de cette capside via le PNJ dans sa conformation native, nous avons reconstitu&eacute; l&#39;&eacute;v&eacute;nement import nucl&eacute;aire utilisant la tomographie &eacute;lectronique. En outre, en utilisant des conditions exp&eacute;rimentales diff&eacute;rentes, nous avons pu visualiser la capside intacte interagissant avec des filaments cytoplasmiques de NPC, comme site d&#39;accueil initial et &agrave; mi-chemin de la NPC. Nos donn&eacute;es sugg&egrave;rent que le canal central de NPC subit des r&eacute;arrangements &agrave; grande &eacute;chelle pour permettre la translocation de la capside intact baculovirus longue de 250 nm. Nous discutons de nos r&eacute;sultats &agrave; la lumi&egrave;re les mod&egrave;les hypoth&eacute;tiques de la fonction de PNC.

Transport de mati&egrave;res nucl&eacute;aires de baculovirus : r&eacute;v&eacute;lant le passage complexe pore nucl&eacute;aire.

Baculoviruses sind einer der gr&ouml;&szlig;ten Viren, die im Kern ihrer Wirtszellen zu replizieren. W&auml;hrend einer Infektion das Kapsid mit das virale DNA-Genom, in das Zytoplasma freigegeben und liefert das Genom in den Zellkern durch einen Mechanismus, der weitgehend unbekannt ist. Hier wir verwendet Capsids des Baculovirus Autographa Californica mehrere Nucleopolyhedrovirus in Kombination mit Elektronenmikroskopie und entdeckte dieses Kapsid kreuzt die NPC und Eintritt in den Zellkern intakt, wo es sein Genom frei. Um die Existenz dieses Kapsid durch den NPC in ihrer nativen Konformation besser zu veranschaulichen, rekonstruieren wir anhand Elektron Tomographie das nukleare Import-Ereignis. Dar&uuml;ber hinaus waren mit verschiedene experimentelle Bedingungen, wir in der Lage, das intakte Kapsid Interaktion mit NPC zytoplasmatischen F&auml;den, als erste docking-Website und zur Halbzeit der NPC zu visualisieren. Unsere Daten schl&auml;gt vor, der NPC-Zentralkanal gro&szlig; angelegte Umlagerungen Translokation von der intakten 250-nm lange Baculovirus-Kapsid erm&ouml;glichen erf&auml;hrt. Wir besprechen unsere Ergebnisse im Lichte der hypothetische Modelle der NPC-Funktion.

Nukleare Baculovirus-Transport: offenbart die nukleare Pore-Komplex-Passage.

Baculoviruses sono uno dei pi&ugrave; grandi virus che replicano nel nucleo delle loro cellule ospiti. Durante un&#39;infezione il capside, contenente il genoma virale del DNA, viene rilasciato nel citoplasma e batte il genoma nel nucleo di un meccanismo che &egrave; in gran parte sconosciuto. Qui, abbiamo usato capsidi di baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus multiple in combinazione con la microscopia elettronica e scoperto questo capside attraversa il NPC ed entra nel nucleo intatto, dove si rilascia il suo genoma. Per meglio illustrare l&#39;esistenza di questo capside attraverso il NPC nella sua conformazione nativa, abbiamo ricostruito l&#39;evento di importazione nucleare mediante tomografia elettrone. Inoltre, utilizzando differenti condizioni sperimentali, siamo stati in grado di visualizzare il capside intatto interagisce con filamenti citoplasmatici NPC, come un sito di ancoraggio iniziale e midway attraverso il NPC. I nostri dati suggeriscono che il canale centrale NPC subisce riarrangiamenti per consentire la traslocazione del capside intatto baculovirus lunga 250 nm. Discutiamo i nostri risultati alla luce i modelli ipotetici della funzione NPC.

Trasporto nucleare di baculovirus: rivelando il passaggio complesso del poro nucleare.

&#x30D0;&#x30AD;&#x30E5;&#x30ED;&#x5BBF;&#x4E3B;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6838;&#x3067;&#x30EC;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30C8;&#x6700;&#x5927;&#x306E;&#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x4E00;&#x3064;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x611F;&#x67D3;&#x75C7;&#x306E;&#x4E2D;&#x306B; DNA &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x907A;&#x4F1D;&#x5B50;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x304C;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x3055;&#x308C;&#x3001;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x6838;&#x306B;&#x3042;&#x307E;&#x308A;&#x77E5;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x306A;&#x3044;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6A5F;&#x69CB;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x3053;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x9055;&#x3044;&#x74B0;&#x72B6;&#x30D0;&#x30AD;&#x30E5;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9;&#x306E;&#x30AB;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x8907;&#x6570;&#x6838;&#x591A;&#x89D2;&#x4F53;&#x75C5;&#x96FB;&#x5B50;&#x9855;&#x5FAE;&#x93E1;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x4F7F;&#x7528;&#x3068;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9; NPC &#x3092;&#x8D8A;&#x3048;&#x308B;&#x3057;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x306E;&#x6838;&#x306B;&#x305D;&#x308C;&#x305D;&#x306E;&#x30B2;&#x30CE;&#x30E0;&#x3092;&#x30EA;&#x30EA;&#x30FC;&#x30B9;&#x306B;&#x5165;&#x308B;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9; NPC &#x304C;&#x305D;&#x306E;&#x30CD;&#x30A4;&#x30C6;&#x30A3;&#x30D6;&#x5F62;&#x614B;&#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x306E;&#x5B58;&#x5728;&#x3092;&#x308F;&#x304B;&#x308A;&#x3084;&#x3059;&#x304F;&#x8AAC;&#x660E;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x306F;&#x3001;&#x96FB;&#x5B50;&#x7DDA;&#x30C8;&#x30E2;&#x30B0;&#x30E9;&#x30D5;&#x30A3;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x6838;&#x30A4;&#x30F3;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8; &#x30A4;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C8;&#x3092;&#x518D;&#x69CB;&#x7BC9;&#x3002;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x3001;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x5B9F;&#x9A13;&#x6761;&#x4EF6;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x521D;&#x671F;&#x306E;&#x30C9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x3001;&#x30DF;&#x30C3;&#x30C9;&#x30A6;&#x30A7;&#x30A4;&#x3001;NPC &#x3092;&#x901A;&#x3058;&#x3066;&#x3068;&#x3057;&#x3066; NPC &#x7D30;&#x80DE;&#x8CEA;&#x30D5;&#x30A3;&#x30E9;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C8;&#x3068;&#x306E;&#x5BFE;&#x8A71;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E;&#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x3092;&#x8996;&#x899A;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x305F;&#x3002;&#x79C1;&#x305F;&#x3061;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF; NPC &#x4E2D;&#x592E;&#x30C1;&#x30E3;&#x30F3;&#x30CD;&#x30EB;&#x306F;&#x305D;&#x306E;&#x307E;&#x307E; 250 nm &#x9577;&#x3044;&#x30D0;&#x30AD;&#x30E5;&#x30ED; &#x30A6;&#x30A4;&#x30EB;&#x30B9; &#x30AD;&#x30E3;&#x30D7;&#x30B7;&#x30C9;&#x306E;&#x8EE2;&#x6D41;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3059;&#x308B;&#x5927;&#x898F;&#x6A21;&#x306A;&#x518D;&#x7DE8;&#x6210;&#x3092;&#x7D4C;&#x308B;&#x3092;&#x793A;&#x5506;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;NPC &#x95A2;&#x6570;&#x306E;&#x4EEE;&#x8AAC;&#x30E2;&#x30C7;&#x30EB;&#x306B;&#x7167;&#x3089;&#x3057;&#x3066;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x8B70;&#x8AD6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

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Baculoviruses &#xD638;&#xC2A4;&#xD2B8; &#xC140;&#xC758; &#xD575;&#xC5D0;&#xC11C; &#xBCF5;&#xC81C; &#xD558;&#xB294; &#xAC00;&#xC7A5; &#xD070; &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC10;&#xC5FC; &#xD558;&#xB294; &#xB3D9;&#xC548; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB294; DNA &#xBC14;&#xC774;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC131; &#xAC8C;&#xB188; capsid &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8;&#xC5D0; &#xD574;&#xC81C; &#xB418; &#xACE0; &#xD06C;&#xAC8C; &#xC54C;&#xB824;&#xC9C4;&#xB41C; &#xBA54;&#xCEE4;&#xB2C8;&#xC998;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD575;&#xC5D0; &#xAC8C;&#xB188;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC5EC;&#xAE30;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xC7A0;&#xC7AC; Autographa californica capsids &#xC5EC;&#xB7EC; nucleopolyhedrovirus &#xD568;&#xAED8; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xC804;&#xC790; &#xD604;&#xBBF8;&#xACBD;&#xC774;&#xC774; capsid NPC&#xB97C; &#xAD50;&#xCC28; &#xD558; &#xACE0; &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xADF8;&#xAC83;&#xC758; &#xAC8C;&#xB188;&#xC744; &#xCD9C;&#xC2DC;&#xAC00; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; &#xD575;&#xC5D0; &#xC785;&#xB825;&#xC744; &#xBC1C;&#xACAC; &#xD558; &#xACE0;. &#xADF8; &#xAE30;&#xBCF8; &#xAD6C;&#xC870;&#xC5D0;&#xC11C; NPC &#xD1B5;&#xD574;&#xC774; capsid &#xC874;&#xC7AC;&#xC758; &#xC774;&#xD574;&#xB97C; &#xB3D5;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC6B0;&#xB9AC; &#xC804;&#xC790; &#xB2E8;&#xCE35; &#xCD2C;&#xC601;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xD575; &#xAC00;&#xC838;&#xC624;&#xAE30; &#xC774;&#xBCA4;&#xD2B8; &#xC7AC;&#xAC74;&#xCD95;. &#xB610;&#xD55C;, &#xB2E4;&#xB978; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC870;&#xAC74;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; capsid &#xCD08;&#xAE30; &#xB3C4;&#xD0B9; &#xC0AC;&#xC774;&#xD2B8; &#xBC0F; NPC &#xD1B5;&#xD574; &#xBBF8;&#xB4DC;&#xC6E8;&#xC774;&#xB85C; NPC &#xC138;&#xD3EC;&#xC9C8; &#xD544; &#xB77C; &#xBA58; &#xD2B8;&#xC640;&#xC758; &#xC0C1;&#xD638; &#xC791;&#xC6A9;&#xC744; &#xC2DC;&#xAC01;&#xD654; &#xC218; &#xC788;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB294; NPC &#xC911;&#xC559; &#xCC44;&#xB110; &#xACAA; &#xC2B5; &#xADF8;&#xB300;&#xB85C; 250 nm &#xAE34; &#xC7A0;&#xC7AC; capsid &#xC804; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xB300;&#xADDC;&#xBAA8; &#xC7AC;&#xBC30;&#xC5F4; &#xB098;&#xC654;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; NPC &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xAC00;&#xC0C1; &#xBAA8;&#xB378;&#xC5D0; &#xBE44;&#xCD94;&#xC5B4; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xACB0;&#xACFC; &#xB17C;&#xC758; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xC7A0;&#xC7AC;&#xC758; &#xD575; &#xC6B4;&#xC1A1;: &#xD575; &#xAE30; &#xACF5; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD1B5;&#xB85C; &#xACF5;&#xAC1C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Baculovirus son uno de los virus m&aacute;s grandes que replican en el n&uacute;cleo de sus c&eacute;lulas hospedadoras. Durante una infecci&oacute;n la c&aacute;pside, que contienen el genoma viral del ADN, se libera en el citoplasma y entrega del genoma en el n&uacute;cleo por un mecanismo que es en gran parte desconocido. Aqu&iacute;, utilizamos c&aacute;psida de los baculovirus Autographa californica nucleopolyhedrovirus m&uacute;ltiples en combinaci&oacute;n con microscopia electr&oacute;nica y descubri&oacute; esta c&aacute;pside cruza el NPC y entra en el n&uacute;cleo intacto, donde lanza su genoma. Para ilustrar mejor la existencia de esta c&aacute;pside a trav&eacute;s de la APN en su conformaci&oacute;n nativa, reconstruimos el evento de importaci&oacute;n nuclear utilizando tomograf&iacute;a electr&oacute;nica. Adem&aacute;s, usando diferentes condiciones experimentales, fuimos capaces de visualizar la c&aacute;pside intacta interactuando con filamentos citoplasm&aacute;ticos de NPC, como un sitio de atraque inicial y en medio de la APN. Nuestros datos sugieren que el canal central de NPC sufre cambios a gran escala para permitir el desplazamiento de la c&aacute;pside intacto baculovirus largo de 250 nm. Discutimos nuestros resultados a la luz de los modelos hipot&eacute;ticos de funci&oacute;n NPC.

Shelly Au

Department of Zoology

University of British Columbia - UBC

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Shelly Au

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University of British Columbia - UBC

Microinjection of Xenopus Laevis Oocytes

Department of Zoology