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Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells

Taste cells are highly specialized, with unique histological, molecular and physiological characteristics that permit detection of a wide range of simple ...

Monell Chemical Senses Center

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Taste cells have a limited life span and are replaced from a basal cell population, although the specific factors involved in this process are not well known. Short- and long-term cultures of other sensory cells have facilitated efforts to understand the signals involved in proliferation, differentiation, and senescence, yet few studies have reported successful primary culture protocols for taste cells. Furthermore, no studies have demonstrated both proliferation and differentiation in vitro. In this study, we have developed an in vitro culture system to maintain and utilize rat primary taste cells for more than 2 months without losing key molecular and biochemical features. Gustducin, phospholipase C-beta2 (PLC-beta2), T1R3, and T2R5 mRNA were detected in the cultured cells by reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Western blot analysis demonstrated gustducin and PLC-beta2 expression in the same samples, which was confirmed by immunocytochemistry. Labeling with bromo-2-deoxyuridine (BrdU) demonstrated proliferation, and a subset of BrdU-labeled cells were also immunoreactive for either gustducin or PLC-beta2, indicating differentiation of newly generated cells in vitro. Cultured cells also exhibited increases in intracellular calcium in response to several taste stimuli. These results indicate that taste cells from adult rats can be generated and maintained under the described conditions for at least 2 months. This system will enable further studies of the processes involved in proliferation, differentiation, and function of mammalian taste receptor cells in an in vitro preparation.

Characterization and long-term maintenance of rat taste cells in culture.

Cellules gustatives ont une dur&#xE9;e de vie limit&#xE9;e et sont remplac&#xE9;es &#xE0; partir d&#x26;#39;une population de cellules basales, bien que les facteurs sp&#xE9;cifiques impliqu&#xE9;s dans ce processus ne sont pas bien connus. &#xC0; court et &#xE0; long terme des cultures d&#x26;#39;autres cellules sensorielles ont facilit&#xE9; les efforts pour comprendre les signaux impliqu&#xE9;s dans la prolif&#xE9;ration, la diff&#xE9;renciation et la s&#xE9;nescence, mais peu d&#x26;#39;&#xE9;tudes ont rapport&#xE9; succ&#xE8;s protocoles de culture primaire de cellules gustatives. En outre, aucune &#xE9;tude n&#x26;#39;a d&#xE9;montr&#xE9; &#xE0; la fois la prolif&#xE9;ration et la diff&#xE9;renciation in vitro. Dans cette &#xE9;tude, nous avons d&#xE9;velopp&#xE9; un syst&#xE8;me de culture in vitro &#xE0; entretenir et &#xE0; utiliser des cellules de rat de go&#xFB;t primaires pour plus de 2 mois sans perdre principales caract&#xE9;ristiques mol&#xE9;culaires et biochimiques. Gustducin, la phospholipase C-b&#xEA;ta2 (PLC-b&#xEA;ta2), T1R3 et T2R5 ARNm ont &#xE9;t&#xE9; d&#xE9;tect&#xE9;s dans les cellules en culture par r&#xE9;action en cha&#xEE;ne par polym&#xE9;rase de la transcriptase inverse-. Analyse par Western blot a d&#xE9;montr&#xE9; une expression gustducin et PLC-b&#xEA;ta2 dans les m&#xEA;mes &#xE9;chantillons, ce qui a &#xE9;t&#xE9; confirm&#xE9; par immunocytochimie. Le marquage avec bromo-2-d&#xE9;soxyuridine (BrdU) a d&#xE9;montr&#xE9; la prolif&#xE9;ration, et d&#x26;#39;un sous-ensemble de cellules BrdU-&#xE9;tiquet&#xE9;s ont &#xE9;galement &#xE9;t&#xE9; immunor&#xE9;actives pour soit gustducin ou PLC-b&#xEA;ta2, indiquant la diff&#xE9;renciation des cellules nouvellement g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9;es in vitro. Les cellules cultiv&#xE9;es &#xE9;galement pr&#xE9;sent&#xE9; des augmentations de calcium intracellulaire en r&#xE9;ponse aux stimuli du go&#xFB;t de plusieurs. Ces r&#xE9;sultats indiquent que les cellules gustatives des rats adultes peut &#xEA;tre g&#xE9;n&#xE9;r&#xE9; et maintenu dans les conditions d&#xE9;crites pendant au moins 2 mois. Ce syst&#xE8;me permettra &#xE0; d&#x26;#39;autres &#xE9;tudes des processus impliqu&#xE9;s dans la prolif&#xE9;ration, la diff&#xE9;renciation et la fonction de mammif&#xE8;res cellules r&#xE9;ceptrices du go&#xFB;t dans une pr&#xE9;paration in vitro.

Caract&#xE9;risation et &#xE0; long terme de maintenance des cellules gustatives de rat en culture

Geschmack-Zellen haben eine begrenzte Lebensdauer und sind aus einer Population Basale Zellen ersetzt, wobei die spezifischen Faktoren, die in diesen Prozess eingebunden nicht bekannt sind. Kurz- und langfristige Kulturen der anderen Sinneszellen haben Bem&uuml;hungen zu verstehen, die Proliferation, Differenzierung und Seneszenz beteiligt Signale erleichtert, doch nur wenige Studien haben erfolgreiche Prim&auml;rkultur Protokolle f&uuml;r Geschmack Zellen berichtet. Dar&uuml;ber hinaus haben keine Studien Proliferation und Differenzierung in-vitro gezeigt. In dieser Studie entwickelten wir eine in-vitro-Kultursystem zur Erhaltung und Ratte prim&auml;ren Geschmack Zellen f&uuml;r mehr als 2 Monate ohne Verlust der wichtige Molekulare und biochemische Funktionen zu nutzen. Gustducin, Phospholipase C-beta2 (PLC-beta2), T1R3, und T2R5-mRNA in den kultivierten Zellen durch Reverse Transkriptase-Polymerase-Kettenreaktion erkannt wurden. Western-Blot-Analyse zeigte Gustducin und PLC-beta2 Ausdruck in den gleichen Proben von Immunocytochemistry best&auml;tigt wurde. Kennzeichnung mit Bromo-2-Deoxyuridine (BrdU) zeigte Verbreitung und eine Teilmenge der BrdU-markierten Zellen wurden auch immunreaktivem f&uuml;r Gustducin oder PLC-beta2, angibt, Differenzierung der neu erzeugten Zellen in vitro. Kultivierte Zellen zeigte auch Erh&ouml;hungen der intrazellul&auml;re Kalzium in Reaktion auf verschiedene Reize der Geschmack. Diese Ergebnisse zeigen, dass Geschmack Zellen von Erwachsenen Ratten erzeugt und unter den beschriebenen Bedingungen f&uuml;r mindestens 2 Monate aufrechterhalten werden k&ouml;nnen. Dieses System erm&ouml;glicht weitere Studien &uuml;ber die Prozesse in der Proliferation, Differenzierung und Funktion der S&auml;ugetier-Geschmack Rezeptor Zellen in eine in-vitro-Vorbereitung.

Charakterisierung und langfristige Erhaltung der Ratte Geschmack Zellen in Kultur.

Gusto le cellule hanno una durata limitata e sono sostituite da una popolazione di cellule basali, anche se non sono ben noti gli specifici fattori coinvolti in questo processo. Colture a breve e a lungo termine di altre cellule sensoriali hanno facilitato gli sforzi per capire i segnali coinvolti nella proliferazione, differenziazione e senescenza, ma alcuni studi hanno riportato successo coltura primaria protocolli per le cellule del gusto. Inoltre, studi hanno dimostrato proliferazione e la differenziazione in vitro. In questo studio, abbiamo sviluppato un sistema di coltura in vitro per mantenere e utilizzare cellule del gusto primario ratto per pi&ugrave; di 2 mesi senza perdere le caratteristiche principali di molecolare e biochimiche. Gustducin, fosfolipasi C-beta2 (PLC-beta2), T1R3, e T2R5 mRNA sono stati rilevati nelle cellule coltivate da reverse transcriptase-polymerase chain reaction. Analisi Western blot ha dimostrato gustducin e PLC-beta2 espressione nei campioni stessi, che &egrave; stato confermato da immunocytochemistry. Etichettatura con bromo-2-deoxyuridine (BrdU) dimostrato proliferazione, e un sottoinsieme di marcato con BrdU cellule erano anche immunoreattive per gustducin o PLC-beta2, che indica la differenziazione di cellule appena generate in vitro. Cellule in coltura esposte anche aumento di calcio intracellulare in risposta a diversi stimoli di gusto. Questi risultati indicano che le cellule del gusto da ratti adulti possono essere generate e mantenute nelle condizioni descritte per almeno 2 mesi. Questo sistema permetter&agrave; ulteriori studi dei processi coinvolti nella proliferazione, differenziazione e funzione di cellule recettore gusto dei mammiferi in una preparazione in vitro.

Caratterizzazione e la manutenzione a lungo termine delle cellule del gusto ratto in coltura.

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&#xB9DB; &#xC140; &#xC81C;&#xD55C; &#xB41C; &#xC218;&#xBA85; &#xC788;&#xACE0;&#xC774; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC694;&#xC18C;&#xB294; &#xC798; &#xC54C;&#xB824;&#xC838; &#xC788;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xAE30;&#xC800; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB2E4;&#xB978; &#xAC10;&#xAC01; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xB2E8;&#xAE30; &#xBC0F; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xBB38;&#xD654; &#xD655;&#xC0B0;, &#xBD84;&#xD654;, &#xB178;&#xD654;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xC2E0;&#xD638;&#xB97C; &#xC774;&#xD574; &#xD558;&#xB294; &#xB178;&#xB825;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4;&#xB294; &#xC544;&#xC9C1; &#xBA87; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB9DB; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC131;&#xACF5;&#xC801;&#xC778; &#xC8FC; &#xBB38;&#xD654; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;. &#xB610;&#xD55C;, &#xC544;&#xB2C8; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC0F; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654; &#xC785;&#xC99D;. &#xC774; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C;&#xB294; &#xCCB4; &#xC678; &#xBB38;&#xD654; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C;&#xC744; &#xC720;&#xC9C0; &#xD558; &#xACE0; &#xD0A4; &#xBD84;&#xC790; &#xBC0F; &#xC0DD; &#xD654; &#xD655; &#xC801;&#xC778; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xC783;&#xC9C0; &#xC54A;&#xACE0; 2 &#xAC1C;&#xC6D4; &#xC774;&#xC0C1; &#xC950; &#xC8FC; &#xB9DB; &#xC140; &#xD65C;&#xC6A9;&#xC744; &#xAC1C;&#xBC1C; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. Gustducin, phospholipase C-beta2 (PLC-beta2) &#xB418;&#xC5B4;, T2R5 mRNA &#xC5ED;&#xC804;&#xC0AC; &#xC911; &#xD569; &#xD6A8;&#xC18C; &#xC5F0;&#xC1C4; &#xBC18;&#xC751;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xAC10;&#xC9C0; &#xB410;&#xB2E4;. &#xC11C;&#xCABD; &#xC624; &#xC810; &#xBD84;&#xC11D;&#xC5D0;&#xB294; gustducin&#xC640; immunocytochemistry&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD655;&#xC778; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4; &#xB3D9;&#xC77C;&#xD55C; &#xC0D8;&#xD50C;&#xC5D0;&#xC11C; PLC-beta2 &#xC2DD; &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD588;&#xB2E4;. &#xBE0C;&#xB85C; &#xBAA8;-2-deoxyuridine&#xB85C; (BrdU) &#xC2DC;&#xC5F0; &#xD655;&#xC0B0;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; BrdU &#xD45C;&#xC2DC; &#xB41C; &#xC140;&#xC758; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC740; &#xB610;&#xD55C; gustducin &#xB610;&#xB294; PLC-beta2, &#xC0C8;&#xB85C; &#xC0DD;&#xC131; &#xB41C; &#xC138;&#xD3EC; &#xCCB4; &#xC678; &#xBD84;&#xD654;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0B4;&#xB294; immunoreactive. &#xACBD;&#xC791;&#xB41C; &#xD55C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB294; &#xB610;&#xD55C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xB9DB; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC73C;&#xB85C; &#xC138;&#xD3EC;&#xB0B4; &#xCE7C;&#xC298;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC804;&#xC2DC;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xACB0;&#xACFC; &#xC131;&#xC778; &#xC950;&#xC758; &#xB9DB; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0DD;&#xC131; &#xBC0F; &#xCD5C;&#xC18C; 2 &#xAC1C;&#xC6D4;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC124;&#xBA85; &#xB41C; &#xC870;&#xAC74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC720;&#xC9C0; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xB354; &#xD655;&#xC0B0;, &#xCC28;&#xBCC4;&#xD654;, &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xCCB4; &#xC678; &#xC900;&#xBE44;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD3EC;&#xC720;&#xB958; &#xB9DB; &#xC218;&#xC6A9; &#xCCB4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xAD00;&#xB828; &#xB41C; &#xD504;&#xB85C;&#xC138;&#xC2A4;&#xC758; &#xC5F0;&#xAD6C; &#xD558;&#xBA74;.

&#xD2B9;&#xC131;&#xD654; &#xBC0F; &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0; &#xC788;&#xB294; &#xC950; &#xB9DB; &#xC140;&#xC758; &#xC7A5;&#xAE30;&#xC801;&#xC778; &#xC720;&#xC9C0; &#xAD00;&#xB9AC;.

Las c&#xE9;lulas del gusto tienen una vida &#xFA;til limitada y son reemplazadas por una poblaci&#xF3;n de c&#xE9;lulas basales, aunque los factores espec&#xED;ficos que intervienen en este proceso no son bien conocidos. A corto y largo plazo las culturas de otras c&#xE9;lulas sensoriales han facilitado los esfuerzos para comprender las se&#xF1;ales implicadas en la proliferaci&#xF3;n, diferenciaci&#xF3;n y la senectud, sin embargo, pocos estudios han informado de &#xE9;xito los protocolos de cultivo primario de las c&#xE9;lulas gustativas. Por otra parte, ning&#xFA;n estudio ha demostrado tanto en la proliferaci&#xF3;n y diferenciaci&#xF3;n in vitro. En este estudio, hemos desarrollado un sistema de cultivo in vitro para mantener y utilizar las c&#xE9;lulas primarias de rata gusto de m&#xE1;s de 2 meses sin perder las principales caracter&#xED;sticas moleculares y bioqu&#xED;micos. Gustducin, la fosfolipasa C-beta2 (PLC-beta2), T1R3, T2R5 y mRNA se detect&#xF3; en las c&#xE9;lulas cultivadas mediante la reacci&#xF3;n en cadena de la polimerasa-transcriptasa. Western blot demostr&#xF3; la expresi&#xF3;n gustducin y el PLC-beta2 en las mismas muestras, lo cual fue confirmado por inmunocitoqu&#xED;mica. Etiquetado con bromo-2-desoxiuridina (BrdU) demostraron la proliferaci&#xF3;n, y un subconjunto de c&#xE9;lulas BrdU marcado tambi&#xE9;n fueron inmunorreactivas para cualquiera gusducina o PLC beta2, indicando la diferenciaci&#xF3;n de las c&#xE9;lulas reci&#xE9;n generadas in vitro. Las c&#xE9;lulas cultivadas tambi&#xE9;n se presentaron aumento en el calcio intracelular en respuesta a los est&#xED;mulos del gusto de varios. Estos resultados indican que las c&#xE9;lulas gustativas de ratas adultas se puede generar y mantenido bajo las condiciones descritas por lo menos 2 meses. Este sistema permitir&#xE1; realizar m&#xE1;s estudios sobre los procesos implicados en la proliferaci&#xF3;n, diferenciaci&#xF3;n y funci&#xF3;n de mam&#xED;feros, c&#xE9;lulas receptoras del gusto de una preparaci&#xF3;n in vitro.

Hakan Ozdener

Monell Chemical Senses Center

Isolation and Culture of Human Fungiform Taste Papillae Cells