Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes

Fluorescent cell tracking dyes, in combination with flow and image cytometry, are powerful tools with which to study the interactions and fates of ...

SciGro, Inc.

&#x672C;&#x671F;&#x4E13;&#x9898;&#xFF0C;&#x9898;&#x4E3A;&quot;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x3001;&quot;&#x6587;&#x7AE0;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#x4E00;&#x4E9B;&#x4F5C;&#x8005;&#x63A8;&#x5230;&#x6781;&#x9650;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x5728;&#x5176;&#x9886;&#x57DF;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x5728;&#x8FC7;&#x53BB;&#x5341;&#x5E74;&#x4E00;&#x76F4;&#x6269;&#x6563;&#x8303;&#x56F4;&#x5185;&#x7684;&#x5546;&#x7528;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#xFF0C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#xFF0C;&#x7528;&#x6765;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5230;&#x5B83;&#x4EEC;&#xFF0C;&#x4EEA;&#x5668;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x6B63;&#x5728;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x7EDF;&#x4E2D;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E2A;&#x4ECB;&#x7ECD;&#x6027;&#x7684;&#x4E3B;&#x9898;&#x95EE;&#x9898;&#x5E26;&#x6765;&#x7684;&#x4F18;&#x70B9;&#x548C;&#x4F7F;&#x7528; CFSE &#x548C; PKH26&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x65B0;&#x5174;&#x7684;&#x8303;&#x56F4;&#x6269;&#x5927;&#x53EF;&#x7528;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x91CF;&#x5B50;&#x70B9;&#x548C;&#x65B0;&#x7684; CellVue &#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x8367;&#x5149;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7684;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x901A;&#x5E38;&#x66F4;&#x591A;&#x7684;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x9002;&#x5F53;&#x7684;&#x65B9;&#x6CD5;&#x548C;&#x4EEA;&#x5668;&#x5B89;&#x88C5;&#x63A7;&#x4EF6;&#x548C;&#x53EF;&#x80FD;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x5206;&#x6790;&#x4E0E;&#x6566;&#x4FC3;&#x7ECF;&#x9A8C;&#x4E30;&#x5BCC;&#x7684;&#x8C03;&#x67E5;&#x5458;&#x7684;&#x76EE;&#x6807;&#xFF0C;&#x5305;&#x62EC;&#x6240;&#x6709;&#x5173;&#x952E;&#x4FE1;&#x606F;&#x548C;&#x63A7;&#x4EF6;&#x53D1;&#x5E03;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x6570;&#x636E;&#x65F6;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x4E86;&#x6218;&#x7565;&#xFF0C;&#x534F;&#x52A9;&#x7814;&#x7A76;&#x4EBA;&#x5458;&#x65B0;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x4F5C;&#x51FA;&#x660E;&#x667A;&#x7684;&#x51B3;&#x5B9A;&#xFF0C;&#x5BF9;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x54EA;&#x4E2A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C; reagent(s) &#x6700;&#x9002;&#x5408;&#x5176;&#x7279;&#x5B9A;&#x7684;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;&#x6240;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x5DF2;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728;&#x5F02;&#x6784;&#x73AF;&#x5883;&#x4E2D;&#x7684;&#x7279;&#x5B9A;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4EBA;&#x53E3;&#x7684;&#x547D;&#x8FD0;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426;&#x5728;&#x4F53;&#x5185;&#x6216;&#x4F53;&#x5916;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x76EE;&#x6807;&#x3002;&#x4E4B;&#x95F4;&#x5728;&#x6B64;&#x95EE;&#x9898;&#x4E2D;&#x627E;&#x5230;&#x7684;&#x8D21;&#x732E;&#x7684;&#x5171;&#x540C;&#x4E3B;&#x9898;&#x7684;&#x4E00;&#x4E9B;&#x5305;&#x62EC;&#x5982;&#x4F55;&#x5404;&#x79CD;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x7528;&#x4E8E;&#x8DDF;&#x8E2A; (i) &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#xFF0C;(&#x4E8C;) &#x76D1;&#x7BA1;&#x548C;&#x6548;&#x5E94;&#x5668;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x548C;&#x819C; (&#x4E09;) &#x8F6C;&#x8BA9;&#x548C;&#x6297;&#x539F;&#x63D0;&#x5448;&#x3002;&#x867D;&#x7136;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x53EA;&#x5360;&#x5C0F;&#x90E8;&#x5206;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x5927;&#x540D;&#x5355;&#x7684;&#x6E05;&#x695A;&#x5730;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x591A;&#x4E2A;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x8BD5;&#x5242;&#x548C;&#x591A;&#x4E2A;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x5F0F;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x89E3;&#x51B3;&#x590D;&#x6742;&#x7684;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x95EE;&#x9898;&#x7684;&#x65E5;&#x76CA;&#x589E;&#x957F;&#x8D8B;&#x52BF;&#x3002;

&#x8DDF;&#x8E2A; 2007&#x5E74;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF1A; &#x6269;&#x6563;&#x7684;&#x63A2;&#x5934;&#x548C;&#x5E94;&#x7528;&#x7A0B;&#x5E8F;&#x3002;

The articles in this thematic issue, entitled "Tracking Cell Proliferation and Function," illustrate some of the choices made by authors pushing the envelope for cell tracking applications in their areas of interest. Over the past decade there has been a proliferation in the range of commercially available probes for these studies, the capabilities of the instrumentation used to detect them, and in the biological systems being studied. This introductory to the thematic issue presents the advantages and limitations of the more commonly used probes such as CFSE and PKH26, as well as emerging probes that expand the range of fluorescence available, including quantum dots and the new CellVue dyes. Appropriate method and instrument setup controls and possible data analysis strategies are discussed with the goal of urging experienced investigators to include all critical information and controls when publishing their data and of aiding researchers new to cell tracking to make informed decisions on which cell tracking reagent(s) are best suited for their particular application. All cell tracking assays have the common goal of determining the fate of a particular cell population within a heterogeneous environment, whether in vivo or in vitro. Some of the common themes among the contributions found in this issue include how various probes are used to track (i) cell proliferation, (ii) regulatory and effector immune cell function and (iii) membrane transfer and antigen presentation. Although these represent only a small fraction of the large and growing list of applications for cell tracking, clearly illustrate the growing trend toward the use of multiple tracking reagents and multiple detection modalities to address complex biological questions.

Cell tracking 2007: a proliferation of probes and applications.

Les articles de ce num&eacute;ro th&eacute;matique, intitul&eacute;e &laquo; Suivi de la prolif&eacute;ration et de la fonction des cellules &raquo; illustrent certains des choix faits par les auteurs de repousser les limites pour la cellule de suivi des applications dans leurs domaines d&#39;int&eacute;r&ecirc;t. Ces dix derni&egrave;res ann&eacute;es, il y a eu une prolif&eacute;ration dans la gamme de sondes disponibles dans le commerce pour ces &eacute;tudes, les capacit&eacute;s de l&#39;instrumentation utilis&eacute;e pour les d&eacute;tecter et dans les syst&egrave;mes biologiques &eacute;tudi&eacute;s. Cette introduction &agrave; la question th&eacute;matique pr&eacute;sente les avantages et limites des plus couramment utilis&eacute; sondes comme CFSE et PKH26, ainsi que nouvelles sondes qui &eacute;largissent la gamme de fluorescence disponible, y compris les points quantiques et les nouveaux colorants CellVue. M&eacute;thode et instrument des contr&ocirc;les de configuration et analyse de donn&eacute;es possibles strat&eacute;gies sont discut&eacute;es dans le but d&#39;exhortant les enqu&ecirc;teurs chevronn&eacute;s afin d&#39;inclure tous les renseignements essentiels et les contr&ocirc;les lors de la publication de leurs donn&eacute;es appropri&eacute;es et d&#39;aider les nouveaux chercheurs &agrave; la cellule de suivi pour prendre des d&eacute;cisions &eacute;clair&eacute;es sur la cellule de suivi pr&eacute;senter est plus adapt&eacute;s pour leur application particuli&egrave;re. Des essais de suivi toutes les cellules ont un objectif commun consistant &agrave; d&eacute;terminer le sort d&#39;une population particuli&egrave;re de cellules au sein d&#39;un environnement h&eacute;t&eacute;rog&egrave;ne, que ce soit in vivo ou in vitro. Parmi les th&egrave;mes communs parmi les interventions dans ce probl&egrave;me comment diverses sondes sont utilis&eacute;es pour suivre la prolif&eacute;ration des cellules (i), (ii) r&eacute;glementation et effectrices des cellules immunitaires fonction et (iii) la membrane transfert et antig&egrave;ne pr&eacute;sentation. Bien qu&#39;ils repr&eacute;sentent seulement une petite fraction de la liste grandissante des applications pour le suivi de la cellule, illustrent bien la tendance croissante vers l&#39;utilisation de plusieurs r&eacute;actifs de suivi et les modalit&eacute;s de d&eacute;tection multiples pour r&eacute;pondre &agrave; des questions biologiques complexes.

Cellule de suivi de 2007 : une prolif&eacute;ration des sondes et des applications.

Die Artikel in dieser thematischen Ausgabe mit dem Titel &quot;Tracking Cell Proliferation und Funktion&quot; zeigen einige von den Entscheidungen der Autoren dr&uuml;ckend den Umschlag f&uuml;r Zelle &Uuml;berwachungsanwendungen in ihren Gebieten von Interesse. Im letzten Jahrzehnt gab es eine starke Zunahme im Bereich von kommerziell verf&uuml;gbaren Sonden f&uuml;r diese Studien, das die Funktionen des die Instrumentierung verwendet, um sie zu erkennen und in den biologischen Systemen untersucht. Diese einleitende zur thematischen Ausgabe pr&auml;sentiert die Vorteile und Einschr&auml;nkungen der mehr h&auml;ufig verwendeten Sonden wie CFSE und PKH26, sowie die aufstrebenden Sonden, die Ausweitung der Fluoreszenz verf&uuml;gbar, einschlie&szlig;lich Quantenpunkte und die neue CellVue-Farbstoffe. Geeignete Methode und Instrument-Setup-Steuerelemente und m&ouml;gliche Datenanalyse, Strategien mit dem Ziel von erfahrenen Ermittler dr&auml;ngen, alle wichtigen Informationen und Steuerelemente enthalten, bei Ver&ouml;ffentlichung ihrer Daten diskutiert werden, und der Forscher neue Beihilfe zur Verfolgung um fundierte Entscheidungen auf welche Zelle Verfolgung Zelle gegebe-eignen sich am besten f&uuml;r ihre spezielle Anwendung. Alle Zelle Verfolgung Proben haben das gemeinsame Ziel bestimmen das Schicksal einer bestimmten Zellpopulation innerhalb einer heterogenen Umgebung, ob in-vivo oder in vitro. Einige der gemeinsamen Themen unter den Beitr&auml;gen finden in dieser Ausgabe enthalten wie verschiedene Sonden verwendet werden, um (i) Zellproliferation, (Ii) aufsichtsrechtliche verfolgen und Effektor Immunzellen Funktion und (Iii) Membran &uuml;bertragen und Antigen-Pr&auml;sentation. Obwohl dies nur einen kleinen Bruchteil der gro&szlig;en und wachsenden Liste von Anwendungen f&uuml;r die Spurhaltung der Zelle darstellen, verdeutlichen Sie den wachsenden Trend zu mehrere Tracking-Reagenzien und mehrere Erkennung Modalit&auml;ten, komplexe biologische Fragen zu behandeln.

Zelle Tracking Tool 2007: eine Vielzahl von Sonden und Anwendungen.

Gli articoli in questo numero tematico, dal titolo &quot;Monitoraggio Cell proliferazione e funzione,&quot; illustrano alcune delle scelte compiute dagli autori spingendo la busta per cella tracking applicazioni nelle loro aree di interesse. Nell&#39;ultimo decennio c&#39;&egrave; stata una proliferazione nella gamma di sonde disponibili in commercio per questi studi, la funzionalit&agrave; della strumentazione utilizzata per individuarli e nei sistemi biologici in fase di studio. Questo introduttivo alla questione tematica presenta i vantaggi e limiti dei pi&ugrave; comunemente utilizzate sonde come dei e PKH26, cos&igrave; come emergenti sonde che espandono la gamma di fluorescenza disponibile, compresi i nuovi coloranti CellVue e punti quantici. Metodo e strumento Installazione controlli e analisi di dati possibili strategie sono discussi con l&#39;obiettivo di esortare gli investigatori esperti per includere tutte le informazioni critiche e controlli quando si pubblicano i dati del caso e di aiutare i ricercatori nuovi per cellulari tracking per prendere decisioni informate su quale cella di rilevamento contenuti nel reagente sono pi&ugrave; adatti per loro particolare applicazione. Tutti i dosaggi di rilevamento cell hanno l&#39;obiettivo comune di determinare il destino di una popolazione particolare cella all&#39;interno di un ambiente eterogeneo, sia in vivo che in vitro. Alcuni dei temi comuni tra i contributi trovati in questo problema includono come le varie sonde vengono utilizzate per tenere traccia della proliferazione cellulare (i), (ii) regolamentazione ed effettrici cellula immunitaria (iii) membrana e funzione di trasferimento e antigene presentazione. Anche se queste rappresentano solo una piccola frazione dell&#39;ampio e crescente elenco di applicazioni per il rilevamento a cella, illustrano chiaramente la crescente tendenza verso l&#39;uso di reagenti di rilevamento pi&ugrave; e pi&ugrave; modalit&agrave; di rilevamento per affrontare questioni complesse e biologiche.

Cellulare monitoraggio 2007: una proliferazione di sonde e applicazioni.

&#x300C;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;,&#x300D;&#x3068;&#x984C;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x306E;&#x4E3B;&#x984C;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306E;&#x8A18;&#x4E8B;&#x3092;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x3042;&#x308B;&#x5206;&#x91CE;&#x3067;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7528;&#x306E;&#x5C01;&#x7B52;&#x3092;&#x62BC;&#x3059;&#x4F5C;&#x8005;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x4F5C;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x9078;&#x629E;&#x80A2;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x904E;&#x53BB; 10 &#x5E74;&#x9593;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x306F;&#x3001;&#x305D;&#x308C;&#x3089;&#x3092;&#x691C;&#x51FA;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x6A5F;&#x5668;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5E02;&#x8CA9;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3068;&#x7814;&#x7A76;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x751F;&#x7269;&#x7CFB;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x304C;&#x3042;&#x3063;&#x305F;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x4E3B;&#x984C;&#x306E;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5165;&#x9580;&#x5229;&#x70B9;&#x3092;&#x63D0;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5236;&#x9650;&#x3088;&#x308A;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528; CFSE &#x3068; PKH26&#x3001;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x6D6E;&#x4E0A;&#x3057;&#x3066;&#x86CD;&#x5149;&#x91CF;&#x5B50;&#x30C9;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x65B0;&#x3057;&#x3044; CellVue &#x67D3;&#x6599;&#x3092;&#x542B;&#x3080;&#x5229;&#x7528;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x306E;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3002;&#x9069;&#x5207;&#x306A;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3068;&#x8A08;&#x6E2C;&#x5668;&#x306E;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x30A2;&#x30C3;&#x30D7; &#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x3068;&#x6226;&#x7565;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x91CD;&#x8981;&#x306A;&#x60C5;&#x5831;&#x3068;&#x30B3;&#x30F3;&#x30C8;&#x30ED;&#x30FC;&#x30EB;&#x306E;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x3092;&#x516C;&#x958B;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x542B;&#x3081;&#x308B;&#x7D4C;&#x9A13;&#x8C4A;&#x5BCC;&#x306A;&#x635C;&#x67FB;&#x3092;&#x4FC3;&#x3059;&#x76EE;&#x7684;&#x3067;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30C7;&#x30FC;&#x30BF;&#x89E3;&#x6790;&#x3068;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7814;&#x7A76;&#x8005;&#x306E;&#x652F;&#x63F4;&#x306E;&#x643A;&#x5E2F;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3069;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306B;&#x95A2;&#x3059;&#x308B;&#x60C5;&#x5831;&#x306B;&#x57FA;&#x3065;&#x3044;&#x305F;&#x610F;&#x601D;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3092;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x3059;&#x308B; reagent(s) &#x305D;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x6700;&#x9069;&#x3067;&#x3059;&#x3002;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x30A2;&#x30C3;&#x30BB;&#x30A4;&#x306E; in vivo &#x3084; in vitro &#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x3001;&#x7570;&#x6A5F;&#x7A2E;&#x6DF7;&#x5728;&#x74B0;&#x5883;&#x5185;&#x306E;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E;&#x904B;&#x547D;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3059;&#x308B;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x304C;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4ECA;&#x6708;&#x53F7;&#x306E;&#x8208;&#x5473;&#x6DF1;&#x3044;&#x8CA2;&#x732E;&#x5EA6;&#x306E;&#x9593;&#x3067;&#x306E;&#x5171;&#x901A;&#x306E;&#x30C6;&#x30FC;&#x30DE;&#x306E;&#x3044;&#x304F;&#x3064;&#x304B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x69D8;&#x3005; &#x306A;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6; (i) &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;, (ii) &#x898F;&#x5236;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x304A;&#x3088;&#x3073; (iii) &#x819C;&#x8EE2;&#x9001;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x306E;&#x30D7;&#x30EC;&#x30BC;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x3082;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x7D30;&#x80DE;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x5927;&#x304D;&#x304F;&#x3001;&#x6210;&#x9577;&#x30EA;&#x30B9;&#x30C8;&#x306E;&#x5C0F;&#x3055;&#x3044;&#x4E00;&#x90E8;&#x5206;&#x3060;&#x3051;&#x3092;&#x8868;&#x3059;&#x304C;&#x3001;&#x660E;&#x78BA;&#x306B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x8A66;&#x85AC;&#x3068;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x751F;&#x7269;&#x5B66;&#x7684;&#x8CEA;&#x554F;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3059;&#x308B;&#x8907;&#x6570;&#x306E;&#x691C;&#x51FA;&#x30E2;&#x30C0;&#x30EA;&#x30C6;&#x30A3;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306B;&#x5411;&#x304B;&#x3063;&#x3066;&#x6210;&#x9577;&#x3059;&#x308B;&#x50BE;&#x5411;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

2007 &#x8FFD;&#x8DE1;&#x30BB;&#x30EB;: &#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x30A2;&#x30D7;&#x30EA;&#x30B1;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3002;

&quot;&#xCD94;&#xC801; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;,&quot; &#xC790;&#xACA9;&#xC774;&#xC774; &#xC8FC;&#xC81C;&#xBCC4; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC0AC; &#xC791;&#xC131;&#xC790; &#xAD00;&#xC2EC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xC9C0;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC744; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBD09;&#xD22C;&#xB97C; &#xBC00;&#xACE0;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC120;&#xD0DD;&#xC758; &#xC77C;&#xBD80;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC9C0;&#xB09C; 10 &#xB144; &#xB3D9;&#xC548; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;, &#xADF8;&#xB4E4;&#xC744; &#xAC10;&#xC9C0; &#xD558;&#xB294; &#xB370; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xACC4;&#xCE21;&#xC758; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC5C5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC94;&#xC704; &#xBC0F; &#xACF5;&#xBD80; &#xD558;&#xB294; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC2DC;&#xC2A4;&#xD15C; &#xD655;&#xC0B0;&#xC774; &#xB418;&#xC5C8;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC8FC;&#xC81C;&#xC758; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xC18C;&#xAC1C; &#xC7A5;&#xC810;&#xC744; &#xC81C;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; CFSE&#xC640; PKH26, &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC2E0;&#xD765; &#xD615;&#xAD11; &#xC591;&#xC790; &#xC810; &#xB4E4;&#xACFC; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; CellVue &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558; &#xC5EC; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB294; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xC640; &#xAC19;&#xC740; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xB354; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C;&#xC758; &#xD55C;&#xACC4;. &#xBA54;&#xC11C;&#xB4DC; &#xBC0F; &#xC545;&#xAE30; &#xC124;&#xCE58; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864; &#xBC0F; &#xC804;&#xB7B5; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xB370;&#xC774;&#xD130;&#xB97C; &#xAC8C;&#xC2DC;&#xD560; &#xB54C; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4; &#xBC0F; &#xCEE8;&#xD2B8;&#xB864;&#xC744; &#xD3EC;&#xD568; &#xD558;&#xB3C4;&#xB85D; &#xACBD;&#xD5D8;&#xB41C; &#xC870;&#xC0AC;&#xB97C; &#xCD09;&#xAD6C; &#xD558;&#xB294; &#xBAA9;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC124;&#xBA85; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xB370;&#xC774;&#xD130; &#xBD84;&#xC11D; &#xC801;&#xC808; &#xD558; &#xACE0; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC6D0;&#xC740; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xD0C8;&#xCD9C;&#xC758; &#xD734;&#xB300;&#xD3F0; &#xCD94;&#xC801; &#xCD94;&#xC801; &#xC140;&#xC5D0; &#xC815;&#xBCF4;&#xD1B5;&#xB41C; &#xACB0;&#xC815;&#xC744; &#xB0B4;&#xB9B4;&#xC744; reagent(s)&#xB294; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xD2B9;&#xC815; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC5D0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC801;&#xD569; &#xD55C;. &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140; &#xCD94;&#xC801; &#xBD84;&#xC11D; &#xC2E4;&#xD5D8; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC870;&#xAC74; &#xB610;&#xB294; &#xC0DD;&#xCCB4; &#xC678;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xAE30;&#xC885; &#xD658;&#xACBD; &#xB0B4;&#xC5D0;&#xC11C; &#xD2B9;&#xC815; &#xC140;&#xC758; &#xC6B4;&#xBA85;&#xC744; &#xACB0;&#xC815; &#xD558;&#xB294; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB97C;&#xAC00;&#xC9C0;&#xACE0;. &#xC774; &#xBB38;&#xC81C;&#xC5D0; &#xAE30;&#xC5EC; &#xC911; &#xACF5;&#xD1B5; &#xC8FC;&#xC81C; &#xAC19;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xCD94;&#xC801; (i) &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, (ii) &#xADDC;&#xC81C;&#xC640; &#xC774;&#xD399;&#xD130; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xBC0F; (iii) &#xB9C9; &#xC804;&#xC1A1; &#xBC0F; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD504;&#xB808;&#xC820;&#xD14C;&#xC774;&#xC158;. &#xBE44;&#xB85D; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC140; &#xCD94;&#xC801; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xD070; &#xC131;&#xC7A5; &#xD558; &#xACE0; &#xC788;&#xB294; &#xBAA9;&#xB85D;&#xC758; &#xADF9;&#xD788; &#xC77C;&#xBD80;&#xC5D0; &#xB300;&#xD45C;, &#xBA85;&#xD655; &#xD558; &#xAC8C; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xCD94;&#xC801; &#xC2DC; &#xC57D; &#xBC0F; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xC0DD;&#xBB3C; &#xD559;&#xC801; &#xC9C8;&#xBB38;&#xC744; &#xD574;&#xACB0; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD574; &#xC5EC;&#xB7EC; &#xD0D0;&#xC9C0; modalities&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC73C;&#xB85C; &#xC99D;&#xAC00; &#xCD94;&#xC138;&#xB97C; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.

2007 &#xCD94;&#xC801; &#xC140;: &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; &#xBC0F; &#xC751;&#xC6A9; &#xD504;&#xB85C;&#xADF8;&#xB7A8;&#xC758; &#xD655;&#xC0B0;.

Los art&iacute;culos en este n&uacute;mero tem&aacute;tico, titulado &quot;Seguimiento de proliferaci&oacute;n y funci&oacute;n de la c&eacute;lula,&quot; ilustran algunas de las decisiones tomadas por los autores empujando la envolvente para aplicaciones en sus &aacute;reas de inter&eacute;s de rastreo de la c&eacute;lula. En la &uacute;ltima d&eacute;cada ha habido una proliferaci&oacute;n en la gama de sondas comercialmente disponibles para estos estudios, las capacidades de la instrumentaci&oacute;n utilizada para su detecci&oacute;n y en los sistemas biol&oacute;gicos en estudio. Esta introducci&oacute;n a la cuesti&oacute;n tem&aacute;tica presenta las ventajas y limitaciones de los m&aacute;s com&uacute;nmente utilizan sondas como CFSE y PKH26, as&iacute; como nuevas sondas que ampl&iacute;an la gama de fluorescencia disponible, incluyendo puntos cu&aacute;nticos y los nuevos tintes de CellVue. Controles de configuraci&oacute;n de instrumento y m&eacute;todo y an&aacute;lisis de datos se examinan estrategias con el objetivo de instar a los investigadores experimentados para incluir toda la informaci&oacute;n cr&iacute;tica y controles al publicar sus datos apropiados y de ayudar a los nuevos investigadores para seguimiento para tomar decisiones informadas sobre qu&eacute; c&eacute;lula de seguimiento de la c&eacute;lula reagent(s) son los m&aacute;s adecuados para su aplicaci&oacute;n particular. Estudios de seguimiento de c&eacute;lulas todas tienen el objetivo com&uacute;n de determinar el destino de una poblaci&oacute;n celular particular dentro de un entorno heterog&eacute;neo, tanto in vivo como in vitro. Algunos de los temas comunes entre las contribuciones encontradas este tema incluyen c&oacute;mo varios sondeos se utilizan para la proliferaci&oacute;n de la c&eacute;lula (i), (ii) la regulaci&oacute;n de la pista y efectoras inmunes celulares funci&oacute;n y (iii) membrana transferencia y ant&iacute;geno presentaci&oacute;n. Aunque estos representan s&oacute;lo una peque&ntilde;a fracci&oacute;n de la gran y creciente lista de aplicaciones para el seguimiento de la c&eacute;lula, ilustran claramente la tendencia creciente hacia el uso de reactivos de seguimiento m&uacute;ltiples y m&uacute;ltiples modalidades de detecci&oacute;n para abordar cuestiones biol&oacute;gicas complejas.

C&eacute;lula de seguimiento 2007: una proliferaci&oacute;n de sondas y aplicaciones.

Flow cytometric analyses of immune cell proliferation, differentiation, and function are limited by the number of different fluorochromes that can be resolved simultaneously. Additional colors to expand functional analytic capability will facilitate higher dimensional analyses of heterogeneous cell populations by basic and clinical scientists. Our aim in these studies was to evaluate CellVue Claret, a fluorescent, far-red emitting, membrane intercalating dye (excitation maximum: 655 nm, emission maximum 677 nm), as an alternative and/or complementary probe to PKH26 and CFSE(1) for polychromatic studies of immune cell proliferation and function. Using a BD FACSCalibur and human peripheral blood mononuclear cells (PBMCs) from 8 different donors (2 donors studied twice), we compared CellVue Claret with the two most commonly used visible-emitting proliferation dyes, PKH26 and CFSE, in terms of: (1) compatibility with 7-Amino-actinomycin D (7-AAD) as a viability marker; (2) effect of dye labeling on lymphocyte viability; and (3) the proliferative response of CD3+ T lymphocytes from 0-96 hours as assessed by dilution of each of the 3 cell tracking dyes in cultures stimulated with anti-CD3 plus IL-2. Post-labeling recoveries and viabilities were similar for all 3 dyes, with modestly higher initial staining intensities and coefficients of variation for CellVue Claret than for CFSE or PKH26. Lymphocyte viabilities in stimulated or unstimulated cultures were also unaffected by choice of dye. Proliferative responses of viable CD3+ lymphocytes were comparable for all three dyes, whether results were reported as Proliferative Fraction (percent of cells that had divided one or more times) or as Precursor Frequency (percent of parent population that had gone on to proliferate in response to anti-CD3 plus IL-2). In summary, T cell proliferation analysis using CellVue Claret gives results equivalent to those obtained with PKH26 or CFSE, expanding the choice of proliferation dyes suitable for use in high dimensional polychromatic studies on flow cytometers with far red (633 nm-658 nm) excitation capabilities.

CellVue Claret, a new far-red dye, facilitates polychromatic assessment of immune cell proliferation.

&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4EEA;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3001; &#x5206;&#x5316;&#x3001; &#x548C;&#x51FD;&#x6570;&#x53EF;&#x4EE5;&#x540C;&#x65F6;&#x89E3;&#x51B3;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C; fluorochromes &#x7684;&#x6570;&#x91CF;&#x53D7;&#x5230;&#x9650;&#x5236;&#x3002;&#x5176;&#x4ED6;&#x7684;&#x989C;&#x8272;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x6269;&#x5927;&#x529F;&#x80FD;&#x89E3;&#x6790;&#x80FD;&#x529B;&#xFF0C;&#x5C06;&#x6709;&#x52A9;&#x4E8E;&#x9AD8;&#x4E09;&#x7EF4;&#x5206;&#x6790;&#x7684;&#x57FA;&#x7840;&#x4E0E;&#x4E34;&#x5E8A;&#x79D1;&#x5B66;&#x5BB6;&#x5F02;&#x6784;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x5728;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7814;&#x7A76;&#x7684;&#x76EE;&#x7684;&#x662F;&#x8BC4;&#x4EF7; CellVue &#x5E72;&#x7EA2;&#x8461;&#x8404;&#x9152;&#x3001; &#x8367;&#x5149;&#x3001; &#x8FDC;&#x7EA2;&#x7684;&#x53D1;&#x5149;&#xFF0C;&#x819C;&#x63D2;&#x5C42;&#x67D3;&#x6599; &#xFF08;&#x6700;&#x5927;&#x52B1;&#x78C1;&#xFF1A; 655 nm&#x3001; &#x53D1;&#x5C04;&#x6700;&#x9AD8; 677 nm&#xFF09;&#xFF0C;&#x4E3A; PKH26 &#x548C; CFSE(1) &#x591A;&#x8272;&#x7814;&#x7A76;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x66FF;&#x4EE3;&#x548C;/&#x6216;&#x8F85;&#x52A9;&#x63A2;&#x9488;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528; BD FACSCalibur &#x548C;&#x4EBA;&#x7C7B;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x8840;&#x6DB2;&#x5916;&#x5468;&#x8840;&#x5355;&#x4E2A;&#x6838;&#x7EC6;&#x80DE; (&#x5916;&#x5468;&#x8840;) &#x4ECE; 8 &#x4E0D;&#x540C;&#x6350;&#x52A9;&#x8005; &#xFF08;2 &#x6350;&#x52A9;&#x8005;&#x5B66;&#x4E60;&#x4E24;&#x6B21;&#xFF09;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x4E0E;&#x4E24;&#x4E2A;&#x6700;&#x5E38;&#x7528;&#x53EF;&#x89C1;&#x53D1;&#x5149;&#x6269;&#x6563;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; PKH26 &#x548C; CFSE&#xFF0C;&#x76F8;&#x6BD4; CellVue &#x5E72;&#x7EA2;&#x8461;&#x8404;&#x9152;&#x7684;&#x89D2;&#x5EA6;&#xFF1A; &#xFF08;1&#xFF09; &#x517C;&#x5BB9;&#x4F5C;&#x4E3A;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x7684;&#x6807;&#x8BB0; &#xFF1B; &#x653E;&#x7EBF;&#x83CC; 7-&#x6C28;&#x57FA;-&#x7D20; D &#xFF08;7-&#x53CD;&#x503E;&#x9500;&#x534F;&#x5B9A; &#x300B;&#xFF09;(2) &#x5F71;&#x54CD;&#x7684;&#x67D3;&#x6599;&#x6807;&#x8BB0;&#x5BF9;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6D3B;&#x529B; &#xFF1B;(3) CD3 + T &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x53CD;&#x5E94;&#xFF0C;&#x4ECE; 0-96 &#x5C0F;&#x65F6;&#x7531;&#x7A00;&#x91CA;&#x7684;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7684; 3 &#x5355;&#x5143;&#x8BC4;&#x4F30;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x6587;&#x5316;&#x523A;&#x6FC0;&#x6297; CD3 &#x52A0;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2&#x3002;&#x6240;&#x6709; 3 &#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x5C0F;&#x5E45;&#x4E0A;&#x6DA8;&#x521D;&#x6B65;&#x67D3;&#x8272;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x4E0E; CellVue &#x5E72;&#x7EA2;&#x8461;&#x8404;&#x9152;&#x6BD4; CFSE &#x6216; PKH26 &#x7684;&#x53D8;&#x5F02;&#x7CFB;&#x6570;&#x4E3A;&#x7C7B;&#x4F3C; post-labeling &#x7684;&#x6062;&#x590D;&#x548C;&#x4E0A;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x3002;&#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x523A;&#x6FC0;&#x6216;&#x9759;&#x6001;&#x6587;&#x5316;&#x4E0A;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x4E5F;&#x53D7;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x9009;&#x62E9;&#x3002;&#x53EF;&#x884C; CD3 + &#x6DCB;&#x5DF4;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x4E09;&#x4E2A;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; &#x76F8;&#x82E5;&#xFF0C;&#x662F;&#x5426;&#x589E;&#x6B96;&#x5206;&#x6570; (%&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#xFF0C;&#x5206;&#x88C2;&#x4E86;&#x4E00;&#x6B21;&#x6216;&#x591A;&#x6B21;) &#x6216;&#x524D;&#x4F53;&#x9891;&#x7387; &#xFF08;&#x7236;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E00;&#x76F4;&#x6301;&#x7EED;&#x6269;&#x6563;&#x54CD;&#x5E94;&#x6297; CD3 &#x52A0;&#x767D;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4ECB;&#x7D20;-2%&#xFF09; &#x4F5C;&#x4E3A;&#x7ED3;&#x679C;&#x4F5C;&#x4E86;&#x6C47;&#x62A5;&#x3002;&#x603B;&#x4E4B;&#xFF0C;&#x4F7F;&#x7528; CellVue &#x5E72;&#x7EA2;&#x8461;&#x8404;&#x9152;&#x7ED9;&#x7ED3;&#x679C;&#x76F8;&#x5F53;&#x4E8E;&#x90A3;&#x4E9B;&#x4E0E; PKH26 &#x6216; CFSE&#xFF0C;&#x83B7;&#x5F97;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x5206;&#x6790;&#x6269;&#x5927;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x9009;&#x62E9;&#x67D3;&#x6599;&#x9002;&#x5408;&#x5728;&#x9AD8;&#x4E09;&#x7EF4;&#x6D41;&#x8FDC;&#x7EA2;&#x8272; &#xFF08;633 nm 658 nm&#xFF09; &#x6FC0;&#x52B1;&#x529F;&#x80FD;&#x4E0E; cytometers &#x591A;&#x8272;&#x7814;&#x7A76;&#x4E2D;&#x4F7F;&#x7528;&#x3002;

CellVue &#x7EA2;&#x8461;&#x8404;&#x9152;&#xFF0C;&#x4E00;&#x79CD;&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x8FDC;&#x7EA2;&#x67D3;&#x6599;&#xFF0C;&#x4FBF;&#x4E8E;&#x591A;&#x8272;&#x8BC4;&#x4F30;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;

Analyses des flux par cytom&eacute;trie en flux de la prolif&eacute;ration des cellules immunitaires, la diff&eacute;renciation et la fonction sont limit&eacute;s par le nombre des fluorochromes diff&eacute;rents qui peuvent &ecirc;tre r&eacute;solus en m&ecirc;me temps. Couleurs suppl&eacute;mentaires pour augmenter la capacit&eacute; analytique fonctionnelle facilitera sup&eacute;rieurs analyses dimensionnelles des populations de cellules h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes de chercheurs fondamentaux et cliniciens. Notre but dans ces &eacute;tudes &eacute;tait d&#39;&eacute;valuer CellVue Claret, une &eacute;mission fluorescente, rouge sombre, membrane intercalant colorant (excitation maximale : 655 nm, &eacute;mission maximale 677 nm), comme une sonde alternative et/ou compl&eacute;mentaire &agrave; PKH26 et CFSE(1) pour des &eacute;tudes polychromes de la prolif&eacute;ration des cellules immunitaires et la fonction. En utilisant un BD FACSCalibur et p&eacute;riph&eacute;riques humains de sang cellules mononucl&eacute;aires (PBMC) de 8 diff&eacute;rents donateurs (2 donneurs a &eacute;tudi&eacute; deux fois), nous avons compar&eacute; Claret de CellVue avec les deux plus couramment utilis&eacute;s visible &eacute;mettant prolif&eacute;ration colorants, PKH26 et CFSE, en termes de: (1) compatibilit&eacute; avec 7-Amino-l&#39;actinomycine D (7-AAD) comme marqueur de viabilit&eacute; ; (2) l&#39;effet de colorant l&#39;&eacute;tiquetage sur la viabilit&eacute; des lymphocytes ; et (3) la r&eacute;ponse prolif&eacute;rative des lymphocytes T CD3 + de 0 &agrave; 96 heures tel qu&#39;&eacute;valu&eacute; par dilution de chacun de la cellule 3 suivi de colorants dans les cultures stimul&eacute;e avec anti-CD3, plus IL-2. Post-Labeling les recouvrements et les viabilit&eacute;s &eacute;taient similaires pour tous les 3 colorants, avec des intensit&eacute;s de coloration initiales l&eacute;g&egrave;rement plus &eacute;lev&eacute;es et des coefficients de variation pour CellVue Claret que CFSE ou PKH26. Viabilit&eacute;s lymphocytes stimul&eacute;s ou non stimul&eacute;es cultures &eacute;taient &eacute;galement affect&eacute;es par le choix du colorant. Des r&eacute;actions de prolif&eacute;ration des lymphocytes CD3 + viables &eacute;taient comparables pour les trois colorants, si les r&eacute;sultats ont &eacute;t&eacute; pr&eacute;sent&eacute;s sous forme de Fraction prolif&eacute;rative (pourcentage de cellules qui avaient divis&eacute; une ou plusieurs fois) ou comme pr&eacute;curseurs de fr&eacute;quence (% de la population parente qui avait continu&eacute; &agrave; prolif&eacute;rer en r&eacute;ponse aux anti-CD3 et IL-2). En r&eacute;sum&eacute;, l&#39;analyse de prolif&eacute;ration des lymphocytes T &agrave; l&#39;aide de Claret de CellVue donne des r&eacute;sultats &eacute;quivalents &agrave; ceux obtenus avec le PKH26 ou CFSE, &eacute;largir le choix de la prolif&eacute;ration des colorants adapt&eacute; aux hautes &eacute;tudes polychromatiques dimensionnelles sur les cytom&egrave;tres de flux avec des capacit&eacute;s d&#39;excitation rouges sombre (633 nm-658 nm).

CellVue Claret, un nouveau colorant rouge sombre, facilite l&#39;&eacute;valuation polychromatique de prolif&eacute;ration de cellules immunitaires.

Flie&szlig;en Cytometric Analysen von Immunzellen Proliferation, Differenzierung und Funktion werden durch die Anzahl der verschiedenen Fluorochromen begrenzt, die gleichzeitig gel&ouml;st werden k&ouml;nnen. Zus&auml;tzliche Farben erweitern analytic Funktionsf&auml;higkeit werden h&ouml;here dimensionale Analysen der heterogenen Zelle Bev&ouml;lkerungen von Grundlagenforschung und der klinischen Wissenschaftlern erleichtern. Unser Ziel in diesen Studien war, CellVue Claret, ein Neonlicht, dunkelrote ausgeben, Membran intercalating Farbstoff zu bewerten (maximale Erregung: 655 nm, Emission maximale 677 nm), als eine alternative und/oder erg&auml;nzenden Sonde, PKH26 und CFSE(1) f&uuml;r polychromatischen Studien der immun Zellproliferation und Funktion. Mit einem BD FACSCalibur und menschlichen peripheren MONONUKLE&Auml;RE Zellen (PBMCs) von 8 verschiedenen Gebern (2 Spender studierte zweimal) Blut, wir gegen&uuml;ber CellVue Claret die zwei am h&auml;ufigsten verwendeten sichtbaren ausgebende Verbreitung Farbstoffe, PKH26 und CFSE, in Bezug auf: (1) Kompatibilit&auml;t mit 7-Amino-Actinomycin D (7-AAD) als Marker Lebensf&auml;higkeit; (2) Wirkung der Farbstoff Beschriftung auf Lymphozyten Lebensf&auml;higkeit; und (3) die proliferative Antwort von CD3 + T-Lymphozyten von 0-96 Stunden durch Verd&uuml;nnung von jedem der 3 Zelle Verfolgung beurteilten Farbstoffe in Kulturen mit Anti-CD3 plus Il angeregt. Post-Labeling Einziehungen und k&uuml;nstliche waren f&uuml;r alle 3 Farbstoffe, mit geringf&uuml;gig h&ouml;here anf&auml;ngliche F&auml;rbung Intensit&auml;ten und Variationskoeffizienten f&uuml;r CellVue Claret als CFSE oder PKH26. Lymphozyte k&uuml;nstliche stimuliert oder ab Kulturen waren auch durch Wahl der Farbstoff unber&uuml;hrt. Proliferative Reaktionen von lebensf&auml;higen CD3 + Lymphozyten waren f&uuml;r alle drei Farbstoffe, vergleichbar, ob Ergebnisse gemeldet wurden, als Proliferative Bruch (Prozent der Zellen, die einmal oder mehrmals geteilt hatten) oder als Vorl&auml;ufer-Frequenz (Prozent der &uuml;bergeordneten Bev&ouml;lkerung, die auf gegangen waren, als Reaktion auf Anti-CD3 plus Il vermehren). Zusammenfassend, T-Zell-Vermehrung-Analyse mit CellVue Claret gibt Ergebnisse gleichwertig mit PKH26 oder CFSE, erzielten Farbstoffe erweitern die Wahl der Verbreitung geeignet f&uuml;r den Einsatz in hoch dimensionalen polychromatischen Studien zu flie&szlig;en Cytometers mit weit rot (633 nm-658 nm)-Erregung-Funktionen.

CellVue Claret, einen neuen dunkelrote Farbstoff erleichtert polychromatischen Bewertungder immun Zellproliferation.

Analisi cytometric flusso di proliferazione delle cellule immunitarie, la differenziazione e la funzione sono limitate dal numero dei fluorocromi diversi che possono essere risolte simultaneamente. Colori aggiuntivi per espandere la capacit&agrave; analitica funzionale faciliter&agrave; l&#39;analisi dimensionale superiore delle popolazioni delle cellule eterogenee da scienziati di base e clinici. Il nostro obiettivo in questi studi &egrave; stato di valutare CellVue Claret, un&#39;emissione fluorescente, far-red, membrana intercalando colorante (eccitazione massima: 655 nm, emissione massima 677 nm), come una sonda alternativa o complementare per PKH26 e CFSE(1) per policromatici studi di proliferazione delle cellule immunitarie e funzione. Utilizzando un BD FACSCalibur e periferico umano sangue cellule mononucleate (PBMCs) da 8 diversi donatori (2 donatori ha studiati due volte), abbiamo confrontato CellVue Claret con i due pi&ugrave; comunemente usati che emettono visibile proliferazione coloranti, PKH26 e CFSE, in termini di: (1) compatibilit&agrave; con 7-Amino-actinomicina D (7-AAD) come un indicatore di redditivit&agrave;; (2) effetto di tintura etichettatura sulla redditivit&agrave; dei linfociti; e (3) la risposta proliferativa dei linfociti CD3 + T da 0-96 ore come valutato mediante diluizione di ciascuna cella 3 monitoraggio dei coloranti nelle culture stimolata con anti-CD3 plus IL-2. Post-Labeling recuperi e viabilit&agrave; erano simili per tutti i 3 coloranti, con intensit&agrave; di colorazione iniziale pi&ugrave; modestamente elevate e coefficienti di variazione per CellVue Claret rispetto per CFSE o PKH26. Viabilit&agrave; dei linfociti stimolati o sia culture erano anche influenzata dalla scelta di colorante. Risposte proliferative dei linfociti CD3 + vitali erano paragonabili per tutti e tre i coloranti, se i risultati sono stati segnalati come frazione proliferativa (percentuale di cellule che avevano diviso una o pi&ugrave; volte) o come precursore di frequenza (per cento della popolazione del padre che aveva continuato a proliferare in risposta all&#39;anti-CD3 plus IL-2). In sintesi, analisi di proliferazione delle cellule T utilizzando CellVue Claret d&agrave; risultati equivalenti a quelli ottenuti con PKH26 o CFSE, ampliando la scelta di proliferazione coloranti adatto all&#39;utilizzo in alti studi policromatici dimensionali su citometri a flusso con capacit&agrave; di eccitazione lontano rossa (633 nm-658 nm).

CellVue Claret, un nuovo colorante far-red, facilita la valutazione policromo di proliferazione delle cellule immunitarie.

&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3001;&#x5206;&#x5316;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x89E3;&#x6790;&#x306F;&#x3001;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x89E3;&#x6C7A;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x5225;&#x306E;&#x87A2;&#x5149;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x6570;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5236;&#x9650;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6A5F;&#x80FD;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x80FD;&#x529B;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x8FFD;&#x52A0;&#x306E;&#x8272;&#x306F;&#x3088;&#x308A;&#x9AD8;&#x3044;&#x6B21;&#x5143;&#x89E3;&#x6790;&#x57FA;&#x790E;&#x3068;&#x81E8;&#x5E8A;&#x306E;&#x79D1;&#x5B66;&#x8005;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CellVue &#x3092;&#x767A;&#x5149;&#x86CD;&#x5149;&#x3001;&#x9060;&#x3001;&#x30AF;&#x30E9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x584A;&#x72B6;&#x8272;&#x7D20;&#x819C;&#x3092;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x7814;&#x7A76;&#x3067;&#x79C1;&#x9054;&#x306E;&#x76EE;&#x6A19;&#x3060;&#x3063;&#x305F; &#xFF08;&#x6700;&#x5927;&#x52B1;&#x8D77;: 655 nm&#x3001;&#x6392;&#x51FA;&#x6700;&#x5927; 677 nm&#xFF09;&#x3001;PKH26 &#x3068; CFSE(1) &#x3092;&#x4EE3;&#x66FF;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x88DC;&#x5B8C;&#x3057;&#x5408;&#x3046;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x591A;&#x8272;&#x7814;&#x7A76;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x3002;BD FACSCalibur &#x3068;&#x3072;&#x3068;&#x672B;&#x68A2;&#x8840;&#x5358;&#x6838;&#x7403; (Pbmc) (2 &#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x306F;&#x52C9;&#x5F37; 2 &#x56DE;) 8 &#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x30C9;&#x30CA;&#x30FC;&#x304B;&#x3089;&#x3001;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x7528;&#x8A9E;&#x3092; 2 &#x3064;&#x6700;&#x3082;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x3055;&#x308C;&#x308B;&#x53EF;&#x8996;&#x767A;&#x5149;&#x5897;&#x6B96;&#x67D3;&#x6599;&#x3001;PKH26 &#x3068; CFSE&#x3001;CellVue &#x30AF;&#x30E9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3092;&#x6BD4;&#x8F03;&#x3057;&#x305F;: (1) &#x306E;&#x4E92;&#x63DB;&#x6027; 7 &#x30A2;&#x30DF;&#x30CE; &#x30A2;&#x30AF;&#x30C1;&#x30CE;&#x30DE;&#x30A4;&#x30B7;&#x30F3; D (7 AAD) &#x3092;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x30DE;&#x30FC;&#x30AB;&#x30FC;; &#x3068;&#x3057;&#x3066;(2) &#x8272;&#x7D20;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x751F;&#x5B58;&#x7387;&#x306B;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x52B9;&#x679C;;(3) CD3 + T &#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x53CD;&#x5FDC;&#x8FFD;&#x8DE1; 3 &#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x306E;&#x5E0C;&#x91C8;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3068;&#x3057;&#x3066; 0 96 &#x6642;&#x9593;&#x304B;&#x3089;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x6587;&#x5316;&#x3067;&#x6297; CD3 &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9; IL-2 &#x3067;&#x523A;&#x6FC0;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;Post-labeling &#x30FB; &#x30EA;&#x30AB;&#x30D0;&#x30EA;&#x3068;&#x597D;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x67D3;&#x6599; CFSE &#x307E;&#x305F;&#x306F; PKH26 &#x3088;&#x308A; CellVue &#x30AF;&#x30E9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x5909;&#x52D5;&#x4FC2;&#x6570;&#x3068;&#x63A7;&#x3048;&#x3081;&#x306A;&#x9AD8;&#x3044;&#x521D;&#x671F;&#x67D3;&#x8272;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306E;&#x985E;&#x4F3C;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x3002;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x597D;&#x523A;&#x6FC0;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x7121;&#x523A;&#x6FC0;&#x6587;&#x5316;&#x306F;&#x307E;&#x305F;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5F71;&#x97FF;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;.&#x7D50;&#x679C;&#x5897;&#x6B96;&#x5272;&#x5408; (&#x30D1;&#x30FC;&#x30BB;&#x30F3;&#x30C8;&#x306E; 1 &#x56DE;&#x4EE5;&#x4E0A;&#x304C;&#x5206;&#x304B;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;) &#x3084;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570; (&#x6297; CD3 &#x30D7;&#x30E9;&#x30B9; IL-2 &#x306B;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3067;&#x5897;&#x6B96;&#x3059;&#x308B;&#x884C;&#x3063;&#x3066;&#x3044;&#x305F;&#x89AA;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3;&#x306E; &#xFF05;&#xFF09; &#x3068;&#x3057;&#x3066;&#x5831;&#x544A;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x304B;&#x3069;&#x3046;&#x304B;&#x73FE;&#x5B9F;&#x7684;&#x306A; CD3 &#x967D;&#x6027;&#x30EA;&#x30F3;&#x30D1;&#x7403;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306F;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E; 3 &#x3064;&#x306E;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x5339;&#x6575;&#x3060;&#x3063;&#x305F;&#x3002;CellVue &#x30AF;&#x30E9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x306F; PKH26 &#x307E;&#x305F;&#x306F; CFSE&#x3001;&#x5F97;&#x3089;&#x308C;&#x305F;&#x3082;&#x306E;&#x3068;&#x540C;&#x7B49;&#x306E;&#x7D50;&#x679C;&#x3092;&#x4E0E;&#x3048;&#x308B;&#x306B;&#x3088;&#x308B; T &#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x6982;&#x8981;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x9078;&#x629E;&#x80A2;&#x3092;&#x62E1;&#x5927;&#x4F7F;&#x7528; cytometers &#x9060;&#x8D64; (633 nm 658 nm) &#x52B1;&#x8D77;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x6301;&#x3064;&#x9AD8;&#x6B21;&#x5143;&#x591A;&#x8272;&#x7814;&#x7A76;&#x306B;&#x9069;&#x3057;&#x305F;&#x67D3;&#x6599;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

CellVue &#x30AF;&#x30E9;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x9060;&#x8D64;&#x8272;&#x306E;&#x67D3;&#x6599;&#x306F;&#x3001;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x591A;&#x8272;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x5BB9;&#x6613;&#x306B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xD750;&#xB984; cytometric &#xBD84;&#xC11D; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;, &#xBD84;&#xD654;, &#xBC0F; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xD574;&#xACB0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xB2E4;&#xB978; &#xD615;&#xAD11;&#xC758; &#xC218;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC81C;&#xD55C; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAE30;&#xB2A5; &#xBD84;&#xC11D; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5; &#xD558;&#xB824;&#xBA74; &#xCD94;&#xAC00; &#xC0C9;&#xC0C1; &#xAE30;&#xBCF8; &#xBC0F; &#xC784;&#xC0C1; &#xACFC;&#xD559;&#xC790; &#xB4E4;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xB2E4;&#xB978; &#xC720;&#xD615;&#xC758; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xB192;&#xC740; &#xCC28;&#xC6D0; &#xBD84;&#xC11D;&#xC744; &#xCD09;&#xC9C4; &#xD55C;&#xB2E4;. &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xBAA9;&#xD45C;&#xB294; CellVue Claret, &#xD615;&#xAD11;, &#xC9C0;&#xAE08; &#xBC29;&#xCD9C;, &#xC5FC;&#xB8CC; intercalating &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778;&#xC744; &#xD3C9;&#xAC00; &#xD588;&#xB2E4; (&#xC5EC;&#xAE30; &#xCD5C;&#xB300;: 655 nm, &#xBC29;&#xCD9C; &#xCD5C;&#xB300; 677 nm), &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xACFC; &#xD568;&#xC218;&#xC758; &#xC0C9;&#xCC44; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB300;&#xCCB4; &#xB610;&#xB294; &#xBCF4;&#xC644; &#xD504;&#xB85C;&#xBE0C; pkh26&#xC640; CFSE(1)&#xB85C;. (2 &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xACF5;&#xBD80; &#xB450; &#xBC88;) 8 &#xB2E4;&#xB978; &#xAE30;&#xC99D;&#xC790; &#xB85C;&#xBD80;&#xD130; &#xB2E8; &#xC138;&#xD3EC; (PBMCs)&#xB97C; &#xD608;&#xC561; BD FACSCalibur &#xADF8;&#xB9AC;&#xACE0; &#xC778;&#xAC04;&#xC758; &#xC8FC;&#xBCC0; &#xC7A5;&#xCE58;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xCE21;&#xBA74;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB450; &#xAC00;&#xC9C0; &#xAC00;&#xC7A5; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB418;&#xB294; &#xD45C;&#xC2DC; &#xBC1C;&#xAD11; &#xD655;&#xC0B0; &#xC5FC;&#xB8CC;, PKH26 &#xBC0F; CFSE, CellVue Claret&#xC5D0; &#xBE44;&#xD574;: &#xC0DD;&#xC874; &#xB9C8;&#xCEE4;&#xB85C;; 7-&#xC544;&#xBBF8;&#xB178; &#xC545;&#xD2F0;&#xB178;&#xB9C8;&#xC774;&#xC2E0; d (7-AAD) (1) &#xD638;&#xD658;&#xC131; (2) &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; &#xC0DD;&#xC874;;&#xC5D0; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD6A8;&#xACFC; (3) &#xCD94;&#xC801; 3 &#xC140;&#xC758; &#xAC01;&#xAC01;&#xC758; &#xD76C;&#xC11D;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xD3C9;&#xAC00; 0-96 &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;&#xC11C; CD3 + T &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC18;&#xC751; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xBB38;&#xD654; &#xC548;&#xD2F0; CD3 &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC640; &#xC790;&#xADF9;. Post-labeling &#xBCF5;&#xAD6C; &#xBC0F; viabilities &#xACB8;&#xC190; &#xD558; &#xAC8C; &#xB354; &#xB192;&#xC740; &#xCD08;&#xAE30; &#xCC29; &#xC0C9; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC0F; CFSE &#xB610;&#xB294; PKH26 &#xBCF4;&#xB2E4; CellVue Claret&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBCC0;&#xB3D9; &#xACC4;&#xC218;&#xC640; &#xBAA8;&#xB4E0; 3 &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC720;&#xC0AC; &#xD588;&#xB2E4;. &#xB9BC;&#xD504; &#xAD6C; viabilities &#xC790;&#xADF9; &#xB610;&#xB294; unstimulated &#xBB38;&#xD654;&#xC5D0;&#xB3C4; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xC120;&#xD0DD;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC601;&#xD5A5;&#xC744; &#xBC1B;&#xB294; &#xD588;&#xB2E4;. &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; CD3 + &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC751;&#xB2F5; &#xD588;&#xB2E4; &#xBAA8;&#xB450; &#xC138; &#xAC00;&#xC9C0; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xBE44;&#xAD50; &#xACB0;&#xACFC; &#xC804;&#xC870; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; (&#xC548;&#xD2F0;-CD3 &#xD50C;&#xB7EC;&#xC2A4; &#xC77C;&#xB9AC;&#xB178;&#xC774;-2&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C;&#xC73C;&#xB85C; &#xACA9; &#xC99D;&#xC5D0; &#xAC14;&#xB2E4; &#xBD80;&#xBAA8; &#xC778;&#xAD6C;&#xC758; &#xD37C;&#xC13C;&#xD2B8;) &#xB610;&#xB294; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBD84;&#xC218; (1 &#xD68C; &#xC774;&#xC0C1; &#xBD84;&#xD560; &#xD588;&#xB2E4; &#xC140; %)&#xC73C;&#xB85C; &#xBCF4;&#xACE0; &#xB418;&#xC5C8;&#xB2E4;. &#xC694;&#xC57D; &#xD558;&#xC790;&#xBA74;, CellVue Claret &#xC81C;&#xACF5; &#xACB0;&#xACFC; &#xC5BB;&#xC740; PKH26 &#xB610;&#xB294; CFSE, &#xB3D9;&#xC77C;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD655;&#xC0B0; &#xBD84;&#xC11D; &#xD750;&#xB984; cytometers&#xAE4C;&#xC9C0; &#xB808;&#xB4DC; (633 nm 658 nm) &#xC5EC;&#xAE30; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xB192;&#xC740; &#xCC28;&#xC6D0; &#xC0C9;&#xCC44; &#xC5F0;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC801;&#xD569; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD655;&#xC0B0;&#xC758; &#xD655;&#xB300;.

CellVue Claret, &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC9C0;&#xAE08; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC758; &#xC0C9;&#xCC44; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC6A9;&#xC774; &#xD558; &#xAC8C; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

An&aacute;lisis de citometr&iacute;a de flujo de funci&oacute;n, diferenciaci&oacute;n y proliferaci&oacute;n celular inmune est&aacute;n limitados por el n&uacute;mero de diferentes fluorocromos que pueden resolverse simult&aacute;neamente. Colores adicionales para ampliar la capacidad anal&iacute;tica funcional facilitar&aacute; mayor an&aacute;lisis dimensionales de poblaciones heterog&eacute;neas de la c&eacute;lula por cient&iacute;ficos b&aacute;sicos y cl&iacute;nicos. Nuestro objetivo en estos estudios fue evaluar CellVue Claret, una emisi&oacute;n fluorescente, far-red, membrana intercalando tinte (excitaci&oacute;n m&aacute;xima: 655 nm, emisi&oacute;n m&aacute;xima 677 nm), como una sonda alternativa y/o complementaria a PKH26 y CFSE(1) para estudios pol&iacute;cromas de proliferaci&oacute;n celular inmune y funci&oacute;n. Usando una BD FACSCalibur y humano perif&eacute;rico de la sangre c&eacute;lulas mononucleares (PBMCs) de 8 diferentes donantes (2 donantes estudiaron dos veces), comparamos CellVue Claret con los dos m&aacute;s utilizados visible emiten proliferaci&oacute;n tintes, PKH26 y CFSE, en t&eacute;rminos de: (1) compatibilidad con 7-Amino-Actinomicina D (7-AAD) como un marcador de viabilidad; (2) efecto de tinte etiquetado sobre viabilidad de linfocito; y (3) la respuesta proliferativa de linfocitos T CD3 + de 0-96 horas, seg&uacute;n lo determinado por diluci&oacute;n de cada una de la celda 3 seguimiento tintes en cultivos estimulada con anti-CD3 y IL-2. Post-Labeling recuperaciones y viabilidades fueron similares para todos 3 tintes, con intensidades de coloraci&oacute;n iniciales modestamente m&aacute;s altas y coeficientes de variaci&oacute;n para CellVue Claret que CFSE o PKH26. Viabilidades de linfocitos en culturas sin estimular o estimuladas tambi&eacute;n fueron afectadas por la opci&oacute;n del tinte. Respuesta proliferativa de linfocitos CD3 + viables fueron comparable para todos los tres tintes, si los resultados se informaron como fracci&oacute;n proliferativa (porcentaje de c&eacute;lulas que dividieron una o m&aacute;s veces) o como Precursor de frecuencia (porcentaje de la poblaci&oacute;n de padres que hab&iacute;a ido a proliferan en respuesta a anti-CD3 y IL-2). En Resumen, an&aacute;lisis de proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T con CellVue Claret da resultados equivalentes a las obtenidas con PKH26 o CFSE, ampliando la elecci&oacute;n de la proliferaci&oacute;n tintes conveniente para el uso en altos estudios policrom&aacute;ticos dimensionales en cit&oacute;metros de flujo con mucho rojas capacidades de excitaci&oacute;n (633 nm-658 nm).

CellVue Claret, un nuevo tinte far-red, facilita la evaluaci&oacute;n de pol&iacute;croma de proliferaci&oacute;n celular inmune.

&#x5F53;&#x4EE3;&#x6570;&#x5B57;&#x4EEA;&#x8868;&#x7684;&#x5230;&#x6765;&#x52A0;&#x5F3A;&#x4E86;&#x6F5C;&#x529B;&#x548C;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x5141;&#x8BB8;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x89E3;&#x5256;&#x7684;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x4E9A;&#x7FA4;&#x548C;&#x5176;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x590D;&#x6742;&#x6027;&#x3002;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5982; PKH26 &#x548C; cfse &#x6807;&#x8BB0;&#x6807;&#x7B7E;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4F7F;&#x7528;&#x4E00;&#x76F4;&#x662F;&#x91CD;&#x8981;&#x7684;&#x89C2;&#x5BDF;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x529F;&#x80FD;&#xFF0C;&#x4F46;&#x5176;&#x53EF;&#x89C1;&#x53D1;&#x5C04;&#x7279;&#x6027;&#x9650;&#x5236;&#x4E86;&#x8FD9;&#x7C7B;&#x5206;&#x6790;&#x8BBE;&#x8BA1;&#x3002;&#x968F;&#x7740;&#x591A;&#x53C2;&#x6570;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x9700;&#x6C42;&#x52A0;&#x5267;&#xFF0C;&#x4F1A;&#x53D8;&#x5F97;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x91CD;&#x8981;&#xFF0C;&#x5229;&#x7528;&#x5E7F;&#x6CDB;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x8BD5;&#x5242;&#x4F18;&#x5316;&#x8367;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5E76;&#x63D0;&#x4F9B;&#x7075;&#x6D3B;&#x5730;&#x4F7F;&#x7528;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x8367;&#x5149;-&#x6297;&#x4F53;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x7684;&#x4E09;&#x4E2A;&#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x819C;&#x67D3;&#x6599;&#x3001; CellVue &#x85B0;&#x8863;&#x8349;&#x3001; &#x6885;&#x82B1; CellVue &#x548C; CellVue NIR780 &#xFF1B; &#x8BC4;&#x4EF7;&#x62A5;&#x544A;&#x4E0E;&#x8367;&#x5149;&#x6392;&#x653E;&#x7D2B;&#xFF0C;&#x8FDC;&#x7EA2;&#x548C;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x6CE2;&#x957F;&#x533A;&#x57DF;&#xFF0C;&#x5206;&#x522B;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x8BD5;&#x5242;&#x662F;&#x4F5C;&#x7528;&#x7684;&#x7C7B;&#x4F3C;&#x4E8E; PKH26 &#x548C; CFSE &#x7B49;&#x65E2;&#x5B9A;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x3001; &#x819C;&#x7A33;&#x5B9A;&#x6027;&#x3001; &#x6700;&#x4F73;&#x6D53;&#x5EA6;&#x548C;&#x7F3A;&#x4E4F;&#x5BF9;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x3002;CellVue &#x67D3;&#x6599;&#x7136;&#x800C;&#xFF0C;&#x8868;&#x73B0;&#x51FA;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x5149;&#x8C31;&#x7279;&#x5F81;&#xFF0C;&#x6BD4;&#x73B0;&#x6709;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#xFF0C;&#x5E76;&#x5229;&#x7528;&#x540E;&#x6240;&#x589E;&#x52A0;&#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x5668;&#x7EB3;&#x5165;&#x5546;&#x4E1A;&#x4E0A;&#x53EF;&#x7528;&#x4EEA;&#x5668; &#xFF1B;&#x4ECE;&#x800C;&#x5141;&#x8BB8;&#x6807;&#x8BB0;&#x533A;&#x57DF;&#x4EBA;&#x53E3;&#x4E2D;&#x4F46;&#x662F;&#x9891;&#x8C31;&#x7684;&#x6D4B;&#x91CF;&#x3002;

&#x65B0;&#x578B;&#x7684;&#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x67D3;&#x6599;&#x3002;

The advent of contemporary digital instrumentation has enhanced both the potential and the complexity of flow cytometric experiments, allowing for the detailed dissection of immune cell subsets and their functions. The use of cell tracking labels such as PKH26 and CFSE has been important in observing such cellular functions, but their visible emission characteristics have limited the design of such analyses. As the demand for multiparametric flow cytometry intensifies, it will become increasingly important to utilize a broader range of cell tracking reagents to optimize the measurement of fluorescence signals and to provide flexibility in the use of commercially available fluorochrome - antibody combinations. We report on the evaluation of three lipophilic membrane dyes, CellVue Lavender, CellVue Plum and CellVue NIR780; with fluorescence emissions in the violet, far-red and near infrared wavelength regions, respectively. These reagents are similar to established tracking dyes such as PKH26 and CFSE in terms of staining procedure, membrane stability, optimal concentration, and lack of effect on cellular proliferation. The CellVue dyes however, exhibit different spectral characteristics than existing tracking compounds, and capitalize upon the increased number of lasers incorporated into commercially available instrumentation; thus permitting measurement of labeled populations in underexploited regions of the spectrum.

Novel lipophilic tracking dyes for monitoring cell proliferation.

L&#39;av&egrave;nement de l&#39;instrumentation num&eacute;rique contemporaine a renforc&eacute; le potentiel et la complexit&eacute; des exp&eacute;riences de cytom&eacute;trie en flux, permettant la dissection d&eacute;taill&eacute;e des sous-ensembles de cellules immunitaires et leurs fonctions. L&#39;utilisation de la cellule de suivi des labels tels que PKH26 et CFSE a &eacute;t&eacute; importante dans l&#39;observation de ces fonctions cellulaires, mais leurs caract&eacute;ristiques d&#39;&eacute;mission visibles ont limit&eacute; la conception de telles analyses. La demande de la cytom&eacute;trie en flux multiparam&eacute;trique s&#39;intensifie, il deviendra plus en plus important d&#39;utiliser un plus large &eacute;ventail de cellule suivi r&eacute;actifs pour optimiser la mesure de signaux de fluorescence et d&#39;offrir une certaine souplesse dans l&#39;utilisation des disponible dans le commerce fluorochrome - combinaison d&#39;anticorps. Nous rapportons sur l&#39;&eacute;valuation des trois colorants lipophiles membrane CellVue lavande, prune de CellVue et CellVue NIR780 ; avec l&#39;&eacute;mission de fluorescence dans le violet, le rouge sombre et pr&egrave;s des r&eacute;gions de longueur d&#39;onde infrarouge, respectivement. Ces r&eacute;actifs sont semblables aux colorants de suivi &eacute;tablis tels que PKH26 et CFSE en termes de proc&eacute;dure, stabilit&eacute; de la membrane, concentration optimale et absence d&#39;effet sur la prolif&eacute;ration cellulaire de la coloration. Les colorants CellVue Toutefois, pr&eacute;sentent des caract&eacute;ristiques spectrales diff&eacute;rentes que les compos&eacute;s de suivi existants et tirer profit de l&#39;augmentation du nombre de lasers incorpor&eacute;s dans des instruments disponibles dans le commerce ; ce qui permet la mesure des populations marqu&eacute;es dans les r&eacute;gions sous-exploit&eacute;es du spectre.

Suivi lipophiles nouveaux colorants pour surveiller la prolif&eacute;ration cellulaire.

Das Aufkommen der zeitgen&ouml;ssische digitale Instrumentierung wurde das Potential und die Komplexit&auml;t der flie&szlig;en Cytometric Experimente, zulassend die detaillierte Pr&auml;paration der Immunzellen Teilmengen und deren Funktionen verbessert. Die Verwendung der Zelle, die Verfolgung von Labels wie PKH26 und CFSE war schon bei der Beobachtung solcher Zellfunktionen wichtig, aber ihre Eigenschaften sichtbar Emission haben das Design der solche Analysen beschr&auml;nkt. Die Nachfrage nach multiparametric Durchflusszytometrie intensiviert, wird es immer wichtiger, eine breitere Palette von Zelle, die Verfolgung von Reagenzien, die Messung der Fluoreszenzsignale zu optimieren und Flexibilit&auml;t bei der Verwendung von handels&uuml;blichen Fluorochrom - Antik&ouml;rper-Kombinationen nutzen wird. Wir berichten &uuml;ber die Bewertung der drei lipophile Membran-Farbstoffe, CellVue Lavendel, CellVue Plum und CellVue NIR780; mit Fluoreszenz-Emissionen in violett, dunkelrote und nahe Infrarot-Wellenl&auml;ngenbereichen beziehungsweise. Diese Reagenzien sind vergleichbar mit etablierten Verfolgung Farbstoffe wie PKH26 und CFSE in Bezug auf die F&auml;rbung, Verfahren, Membran Stabilit&auml;t, optimalen Konzentration und mangelnde Wirkung auf zellul&auml;re Vermehrung. Die CellVue-Farbstoffe jedoch weisen unterschiedliche spektrale Merkmale als vorhandenen Nachverfolgung Verbindungen und profitieren von der erh&ouml;hten Anzahl der Laser in handels&uuml;blichen Instrumentierung aufgenommen; so dass die Messung der beschrifteten Populationen in genutzten Regionen des Spektrums.

Neuartige lipophile Verfolgung Farbstoffe zur &Uuml;berwachung der Zellproliferation.

L&#39;avvento della strumentazione digitale contemporanea ha migliorato sia il potenziale e la complessit&agrave; degli esperimenti cytometric di flusso, consentendo per la dissezione dettagliata dei sottoinsiemi di cellule immunitarie e le loro funzioni. L&#39;uso della cella rilevamento etichette come PKH26 e CFSE &egrave; stato importante nell&#39;osservazione di tali funzioni cellulari, ma le loro caratteristiche di emissione visibile hanno limitato la progettazione di tali analisi. Come intensifica la domanda di citometria a flusso multiparametrica, diventer&agrave; sempre pi&ugrave; importante di utilizzare una pi&ugrave; ampia gamma di cellulari tracking reagenti per ottimizzare la misura di segnali di fluorescenza e per fornire la flessibilit&agrave; nell&#39;uso del fluorocromo commercialmente disponibile - combinazioni di anticorpo. Riportiamo sulla valutazione di tre coloranti membrana lipofile, CellVue lavanda, prugna CellVue e CellVue NIR780; con emissioni di fluorescenza in viola, far-red e vicino a regioni di lunghezza d&#39;onda infrarossa, rispettivamente. Questi reagenti sono simili ai coloranti di rilevamento stabilito quali PKH26 e CFSE in termini di colorazione procedura, stabilit&agrave; di membrana, la concentrazione ottimale e mancanza di effetto sulla proliferazione cellulare. I coloranti CellVue tuttavia, esibiscono le caratteristiche spettrali differenti rispetto a composti di monitoraggio esistente e capitalizzare sull&#39;aumento del numero dei laser incorporato nella strumentazione disponibile in commercio; permettendo cos&igrave; la misurazione delle popolazioni etichette in regioni sottoutilizzate dello spettro.

Romanzo rilevamento lipofile coloranti per il controllo della proliferazione cellulare.

&#x73FE;&#x4EE3;&#x7684;&#x306A;&#x30C7;&#x30B8;&#x30BF;&#x30EB;&#x8A08;&#x88C5;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3068;&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x3068;&#x305D;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x90ED;&#x6E05;&#x3092;&#x3067;&#x304D;&#x308B;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x3001;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x306E;&#x8907;&#x96D1;&#x3055;&#x3092;&#x9AD8;&#x3081;&#x305F;&#x3002;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB; PKH26 &#x3084; CFSE &#x306A;&#x3069;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x306F;&#x3001;&#x3053;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306A;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x89B3;&#x5BDF;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x91CD;&#x8981;&#x3055;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x304C;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x53EF;&#x8996;&#x767A;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x89E3;&#x6790;&#x306E;&#x8A2D;&#x8A08;&#x9650;&#x3089;&#x308C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x7A81;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x7528;&#x9700;&#x8981;&#x304C;&#x6FC0;&#x5316;&#x3059;&#x308B;&#x306B;&#x3064;&#x308C;&#x3066;&#x3001;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x8A66;&#x85AC;&#x86CD;&#x5149;&#x4FE1;&#x53F7;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x6700;&#x9069;&#x5316;&#x3057;&#x3001;&#x5E02;&#x8CA9;&#x87A2;&#x5149;&#x8272;&#x7D20; - &#x6297;&#x4F53;&#x306E;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3067;&#x306E;&#x67D4;&#x8EDF;&#x6027;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5E83;&#x3044;&#x7BC4;&#x56F2;&#x3092;&#x5229;&#x7528;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x307E;&#x3059;&#x307E;&#x3059;&#x91CD;&#x8981;&#x306B;&#x306A;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306F; 3 &#x3064;&#x306E;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x819C;&#x67D3;&#x6599;&#x3001;CellVue &#x30E9;&#x30D9;&#x30F3;&#x30C0;&#x30FC;&#x3001;CellVue &#x30D7;&#x30E9;&#x30E0;&#x3001;CellVue NIR780 &#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x30EC;&#x30DD;&#x30FC;&#x30C8;;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x3001;&#x9060;&#x3068;&#x8D64;&#x5916;&#x6CE2;&#x9577;&#x9818;&#x57DF;&#x306B;&#x8FD1;&#x3044;&#x86CD;&#x5149;&#x306E;&#x6392;&#x51FA;&#x91CF;&#x3068;&#x305D;&#x308C;&#x305E;&#x308C;&#x3002;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x306F;&#x3001;&#x30D7;&#x30ED;&#x30B7;&#x30FC;&#x30B8;&#x30E3;&#x3001;&#x819C;&#x5B89;&#x5B9A;&#x6027;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x53CA;&#x307C;&#x3059;&#x5F71;&#x97FF;&#x306E;&#x6B20;&#x5982;&#x306E;&#x6C5A;&#x640D;&#x306E;&#x9762;&#x3067;&#x78BA;&#x7ACB;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x67D3;&#x6599; CFSE PKH26 &#x306A;&#x3069;&#x306B;&#x4F3C;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;CellVue &#x67D3;&#x6599;&#x306F;&#x3001;&#x305F;&#x3060;&#x3057;&#x3001;&#x65E2;&#x5B58;&#x306E;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x5316;&#x5408;&#x7269;&#x3088;&#x308A;&#x306E;&#x5206;&#x5149;&#x7279;&#x6027;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x3001;&#x5E02;&#x8CA9;&#x306E;&#x30A4;&#x30F3;&#x30B9;&#x30C8;&#x30EB;&#x30E1;&#x30F3;&#x30C6;&#x30FC;&#x30B7;&#x30E7;&#x30F3;&#x306B;&#x7D44;&#x307F;&#x8FBC;&#x307E;&#x308C;&#x308B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x306E;&#x6570;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x306B;&#x751F;&#x304B;&#x3059;;&#x3053;&#x306E;&#x30B9;&#x30DA;&#x30AF;&#x30C8;&#x30EB;&#x306E;&#x4E16;&#x7D00;&#x306E;&#x5730;&#x57DF;&#x3067;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EB;&#x4ED8;&#x3051;&#x3055;&#x308C;&#x305F;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3092;&#x8A31;&#x53EF;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x65B0;&#x898F;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x8272;&#x7D20;&#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x3002;

&#xD604;&#xB300; &#xB514;&#xC9C0;&#xD138; &#xACC4;&#xCE21;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604; &#xAC00;&#xB2A5;&#xC131; &#xBC0F; &#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569; &#xBC0F; &#xD574;&#xB2F9; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC758; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xD574; &#xBD80;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218; &#xC788;&#xB3C4;&#xB85D; &#xD750;&#xB984; cytometric &#xC2E4;&#xD5D8;&#xC758; &#xBCF5;&#xC7A1;&#xC131;&#xC744; &#xAC15;&#xD654; &#xD588;&#xB2E4;. &#xC140; &#xB77C;&#xBCA8; PKH26 &#xB4F1;&#xACFC; CFSE &#xCD94;&#xC801; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xAD00;&#xCC30; &#xAC19;&#xC740; &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5;&#xC5D0; &#xC911;&#xC694; &#xD55C; &#xB418;&#xC5C8;&#xC9C0;&#xB9CC; &#xADF8;&#xB4E4;&#xC758; &#xBCF4;&#xC774;&#xB294; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD2B9;&#xC131; &#xAC19;&#xC740; &#xBD84;&#xC11D;&#xC758; &#xB514;&#xC790;&#xC778; &#xC81C;&#xD55C;. Multiparametric cytometry&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC218;&#xC694;&#xAC00; &#xAC15;&#xB82C; &#xD558; &#xAC8C;, &#xADF8;&#xAC83;&#xC740; &#xC810;&#xC810; &#xB354; &#xCD94;&#xC801; &#xC2DC; &#xC57D; &#xD615;&#xAD11; &#xC2E0;&#xD638; &#xCE21;&#xC815;&#xC744; &#xCD5C;&#xC801;&#xD654; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C1;&#xC6A9; &#xD615;&#xAD11; &#xC0C9;&#xC18C;-&#xC870;&#xD569; &#xD56D; &#xCCB4;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC5D0; &#xC720;&#xC5F0;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558;&#xB294; &#xC140;&#xC758; &#xAD11;&#xBC94;&#xC704; &#xD55C; &#xBC94;&#xC704;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558;&#xB294; &#xAC83;&#xC774; &#xC911;&#xC694; &#xB420; &#xAC83;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC; CellVue &#xB77C;&#xBCA4;&#xB354;, CellVue &#xB9E4; &#xD654;&#xC640; CellVue NIR780; &#xC138; &#xBE14;&#xB808;&#xBBF8;&#xC26C; &#xB9C9; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xD3C9;&#xAC00; &#xB300; &#xD55C; &#xBCF4;&#xACE0;&#xC11C; &#xC9C0;&#xAE08; &#xBCF4;&#xB77C; &#xBE5B;&#xACFC; &#xC801;&#xC678;&#xC120; &#xD30C;&#xC7A5; &#xC601;&#xC5ED; &#xADFC;&#xCC98; &#xD615;&#xAD11; &#xBC30;&#xAE30; &#xAC00;&#xC2A4;&#xC640; &#xD568;&#xAED8; &#xAC01;&#xAC01;. &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0;&#xB294; &#xC808;&#xCC28;, &#xB9C9; &#xC548;&#xC815;&#xC131;, &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xB18D;&#xB3C4; &#xBC0F; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC5D0; &#xBBF8;&#xCE58;&#xB294; &#xC601;&#xD5A5;&#xC758; &#xBD80;&#xC871;&#xC758; &#xAD00;&#xC810;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xC2DC; &#xC57D; PKH26, CFSE &#xB4F1; &#xC124;&#xB9BD;&#xB41C; &#xCD94;&#xC801; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xBE44;&#xC2B7;&#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xADF8;&#xB7EC;&#xB098; CellVue &#xC5FC;&#xB8CC; &#xAE30;&#xC874; &#xCD94;&#xC801; &#xD654;&#xD569;&#xBB3C; &#xBCF4;&#xB2E4; &#xB2E4;&#xB978; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xD558; &#xACE0; &#xC0C1;&#xC5C5;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC774;&#xC6A9; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xACC4;&#xCE21;;&#xC5D0; &#xD1B5;&#xD569; &#xD558;&#xB294; &#xB808;&#xC774;&#xC800;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xC218;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD22C;&#xC790; &#xB530;&#xB77C;&#xC11C; &#xC2A4;&#xD399;&#xD2B8;&#xB7FC;&#xC758; underexploited &#xC601;&#xC5ED;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14;&#xC774; &#xC9C0;&#xC815; &#xB41C; &#xC778;&#xAD6C; &#xCE21;&#xC815; &#xD5C8;&#xC6A9;.

&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xAE30; &#xC704;&#xD55C; &#xC18C;&#xC124; &#xBE14;&#xB808;&#xBBF8;&#xC26C; &#xCD94;&#xC801; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC785;&#xB2C8;&#xB2E4;.

La llegada de instrumentaci&oacute;n digital contempor&aacute;neo ha mejorado tanto el potencial y la complejidad de los experimentos de citometr&iacute;a de flujo, permitiendo la disecci&oacute;n detallada de subconjuntos de c&eacute;lulas inmunitarias y sus funciones. El uso de sellos como PKH26 y CFSE de seguimiento de la c&eacute;lula ha sido importante en la observaci&oacute;n de las funciones celulares, pero sus caracter&iacute;sticas de emisi&oacute;n visible han limitado el dise&ntilde;o de esos an&aacute;lisis. Mientras se intensifica la demanda de citometr&iacute;a de flujo multiparam&eacute;trico, llegar&aacute; a ser cada vez m&aacute;s importante utilizar una amplia gama de reactivos para optimizar la medida de se&ntilde;ales de fluorescencia y para proporcionar flexibilidad en el uso de fluorocromo comercialmente disponible - combinaciones de anticuerpo de seguimiento de la c&eacute;lula. Divulgamos sobre la evaluaci&oacute;n de tres tintes de membrana lipof&iacute;lico, CellVue lavanda, ciruela de CellVue y CellVue NIR780; con las emisiones de la fluorescencia en la violeta, far-red y cerca de las regiones de longitud de onda infrarroja, respectivamente. Estos reactivos son similares a los tintes de seguimiento establecido como PKH26 y CFSE en t&eacute;rminos de procedimiento, estabilidad de la membrana, concentraci&oacute;n &oacute;ptima y la falta de efecto sobre la proliferaci&oacute;n celular de la coloraci&oacute;n. Los tintes de CellVue sin embargo, exhiben caracter&iacute;sticas espectrales diferentes que los compuestos actuales de seguimiento y capitalizan el creciente n&uacute;mero de l&aacute;seres incorporado en instrumentaci&oacute;n comercialmente disponible; lo que permite la medici&oacute;n de las poblaciones etiquetadas en regiones poco explotadas del espectro.

Tintes de novela lipof&iacute;lico seguimiento para el control de la proliferaci&oacute;n celular.

&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FFD;&#x8E2A;&#x8BD5;&#x5242;&#x7B49;&#x7EFF;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x86CB;&#x767D;&#x6807;&#x8BB0;&#x67D3;&#x6599; CFSE &#x548C;&#x7EA2;&#x8272;&#x8367;&#x5149;&#x4EB2;&#x8102;&#x6027;&#x819C;&#x67D3;&#x6599; PKH26 &#x901A;&#x5E38;&#x7528;&#x4E8E;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x54CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5F02;&#x6784;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7FA4;&#x4F53;&#x3002;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x8BD5;&#x5242;&#x7EC6;&#x80DE;&#x67D3;&#x8272;&#x9C9C;&#x8273;&#x7684;&#x5747;&#x8D28;&#x8367;&#x5149;&#xFF0C;&#x5973;&#x513F;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x5206;&#x88C2;&#x8FC7;&#x7A0B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x4E4B;&#x95F4;&#x8FDB;&#x884C;&#x4E86;&#x5206;&#x533A;&#x3002;&#x56E0;&#x4E3A;&#x5973;&#x513F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x8367;&#x5149;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x5927;&#x7EA6;&#x51CF;&#x5C11;&#x4E86;&#x4E00;&#x534A;&#xFF0C;&#x6BCF;&#x4E2A;&#x53F8;&#x540E;&#xFF0C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x76F8;&#x5BF9;&#x4E8E;&#x5176;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x5728;&#x67D3;&#x8272;&#x65F6;&#x7684;&#x5F3A;&#x5EA6;&#x63D0;&#x4F9B;&#x5B83;&#x7ECF;&#x5386;&#x4E86;&#x591A;&#x5C11;&#x90E8;&#x95E8;&#x6709;&#x5173;&#x7684;&#x4FE1;&#x606F;&#x3002;&#x5728;&#x6BCF;&#x4E00;&#x4EE3;&#x4EBA;&#x7684;&#x5973;&#x513F;&#x77E5;&#x9053;&#x53D1;&#x751F;&#x4E86;&#x591A;&#x5C11;&#x6B21;&#x5206;&#x88C2;&#x548C;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x76F8;&#x5BF9;&#x6570;&#x91CF;&#xFF0C;&#x5176;&#x4E2D;&#x4E00;&#x4E2A;&#x53EF;&#x4EE5;&#x80CC;-&#x8BA1;&#x7B97;&#x53BB;&#x7684;&#x589E;&#x6B96;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x539F;&#x59CB;&#x4EBA;&#x53E3; &#xFF08;&#x5373;&#x523A;&#x6FC0;&#x65F6;&#x5728;&#x573A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#xFF09; &#x4E2D;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x6570;&#x76EE;&#x3002;&#x4F7F;&#x7528;&#x6B64;&#x4FE1;&#x606F;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x8BA1;&#x7B97;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x7EC6;&#x80DE;&#x9891;&#x7387;&#x548C;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x7684;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x6297;&#x539F;&#x6269;&#x5F20;&#x6216;&#x611F;&#x5174;&#x8DA3;&#x7684;&#x6709;&#x4E1D;&#x5206;&#x88C2;&#x539F;&#x3002;&#x540C;&#x65F6;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x786E;&#x5B9A;&#x8868;&#x578B;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x4EE5;&#x53CA;&#x4ED6;&#x4EEC;&#x7684;&#x80FD;&#x529B;&#x8981;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x6297;&#x539F;&#x6216;&#x5408;&#x6210;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#xFF0C;&#x63D0;&#x4F9B;&#x66F4;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x54CD;&#x5E94;&#x6297;&#x539F;&#xFF0C;&#x800C;&#x4E0D;&#x4EC5;&#x4EC5;&#x662F;&#x6548;&#x5E94;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6240;&#x6709;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x8868;&#x5F81;&#x3002;&#x5728;&#x540C;&#x65F6;&#x5206;&#x6790;&#x7279;&#x5B9A;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x548C; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x7684;&#x591A;&#x53C2;&#x6570;&#x6D41;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x5B9E;&#x9A8C;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x53D1;&#x73B0;&#x53EA;&#x6709;&#x5927;&#x7EA6;&#x4E00;&#x534A;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#xFF0C;&#x5C55;&#x793A;&#x7279;&#x5B9A;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x5230;&#x6D41;&#x611F;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x4E5F;&#x5230;&#x5904;&#x53EF;&#x89C1;&#xFF0C;&#x67D3;&#x6599;&#x7A00;&#x91CA;&#x6CD5;&#x6765;&#x8861;&#x91CF;&#x548C; IFNgamma &#x5408;&#x6210;&#x6297;&#x539F;&#x7684;&#x56DE;&#x5E94;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x671F;&#x671B;&#x65B0;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4ECE;&#x7D2B;&#x5230;&#x7ED3;&#x5408;&#x8D8A;&#x6765;&#x8D8A;&#x591A;&#x7684;&#x6FC0;&#x5149;&#x5668;&#x548C;&#x63A2;&#x6D4B;&#x5668;&#x5BF9;&#x5F53;&#x4EE3;&#x6D41; cytometers&#xFF0C;&#x8FDB;&#x4E00;&#x6B65;&#x6269;&#x5927;&#x8FD9;&#x79CD;&#x505A;&#x6CD5;&#x7684;&#x6548;&#x7528;&#x8868;&#x5F81;&#x590D;&#x6742;&#x9A71;&#x52A8;&#x6297;&#x539F;&#x514D;&#x75AB;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x8FD1;&#x7EA2;&#x5916;&#x53D1;&#x5149;&#x7684;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x5230;&#x6765;&#x3002;

&#x7528;&#x6D41;&#x5F0F;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x6297;&#x539F;&#x9A71;&#x52A8;&#x54CD;&#x5E94;&#xFF1A; &#x67D3;&#x6599;&#x7A00;&#x91CA;&#x6CD5;&#x76D1;&#x6D4B;&#x6269;&#x6563;&#x3002;

Cell-tracking reagents such as the green-fluorescent protein labeling dye CFSE and the red-fluorescent lipophilic membrane dye PKH26 are commonly used to monitor cell proliferation by flow cytometry in heterogeneous cell populations responding to immune stimuli. Both reagents stain cells with a bright homogeneous fluorescence, which is partitioned between daughter cells during each cell division. Because daughter cell fluorescence intensities are approximately halved after each division, the intensity of a cell relative to its intensity at the time of staining provides information about how many divisions it has undergone. Knowing how many rounds of division have occurred and the relative number of cells in each daughter generation, one can back-calculate the number of cells in the original population (i.e., cells present at the time of stimulus) that went on to respond by proliferating. Using this information, the precursor cell frequencies and extent of expansion to a specific antigen or mitogen of interest can be calculated. Concurrently, the phenotype of the cells can be determined, as well as their ability to bind antigen or synthesize cytokines, providing more detailed characterization of all cells responding to the antigen, not just effector cells. In multiparameter flow cytometric experiments to simultaneously analyze antigen-specific tetramer binding, cytokine production and T-cell proliferation, we found that only approximately half of the cells that exhibited specific binding to influenza tetramer also proliferated, as measured by dye dilution, and synthesized IFNgamma in response to antigen. We expect the advent of new cell tracking dyes emitting from the violet to the near infrared combined with the increasing number of lasers and detectors on contemporary flow cytometers to further expand the usefulness of this approach to characterization of complex antigen-driven immunological responses.

Tracking antigen-driven responses by flow cytometry: monitoring proliferation by dye dilution.

Cellule suivi r&eacute;actifs tels que la teinture d&#39;&eacute;tiquetage de prot&eacute;ine verte fluorescente CFSE et le colorant rouge fluorescente lipophiles membrane PKH26 sont couramment pour surveiller la prolif&eacute;ration cellulaire par cytom&eacute;trie de flux dans des populations de cellules h&eacute;t&eacute;rog&egrave;nes en r&eacute;ponse &agrave; des stimuli immunitaires. Les deux r&eacute;actifs tachent les cellules avec une fluorescence homog&egrave;ne brillante, qui se r&eacute;partit entre les cellules filles lors de chaque division cellulaire. Parce que les intensit&eacute;s de fluorescence des cellules filles sont r&eacute;duites de moiti&eacute; environ apr&egrave;s chaque division, l&#39;intensit&eacute; d&#39;une cellule par rapport &agrave; son intensit&eacute; au moment de la coloration fournit des informations sur les divisions combien elle a subi. Sachant combien de tours de division ont eu lieu et le nombre relatif de cellules dans chaque g&eacute;n&eacute;ration de fille, on peut dos-calculer le nombre de cellules dans la population d&#39;origine (c&#39;est-&agrave;-dire, des cellules pr&eacute;sentes au moment de la relance) qui se passait &agrave; r&eacute;pondre en prolif&eacute;rant. &Agrave; l&#39;aide de ces informations, les fr&eacute;quences cellule pr&eacute;curseur et la mesure de l&#39;expansion &agrave; un antig&egrave;ne sp&eacute;cifique ou un mitog&egrave;ne d&#39;int&eacute;r&ecirc;t peuvent &ecirc;tre calcul&eacute;es. Parall&egrave;lement, le ph&eacute;notype des cellules peut &ecirc;tre d&eacute;termin&eacute;, ainsi que leur capacit&eacute; &agrave; lier l&#39;antig&egrave;ne ou de synth&eacute;tiser les cytokines, fournissant plus de caract&eacute;risation de toutes les cellules en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;antig&egrave;ne, non seulement effecteur cellules. Dans les exp&eacute;riences de cytom&eacute;trie en flux flux multiparam&eacute;trique d&#39;analyser simultan&eacute;ment liaison antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques t&eacute;tram&egrave;re, de la production de cytokines et de prolif&eacute;ration des lymphocytes T, nous avons constat&eacute; que seulement environ la moiti&eacute; des cellules qui pr&eacute;sentaient une liaison sp&eacute;cifique &agrave; t&eacute;tram&egrave;re de grippe aussi se sont multipli&eacute;s, tel que mesur&eacute; par la dilution de la teinture et synth&eacute;tis&eacute; IFNgamma en r&eacute;ponse &agrave; l&#39;antig&egrave;ne. Nous attendons l&#39;arriv&eacute;e de la nouvelle cellule suivi colorants &eacute;mettant de la violette &agrave; l&#39;infrarouge proche, combin&eacute; avec le nombre croissant de lasers et d&eacute;tecteurs sur les cytom&egrave;tres contemporaine afin de d&eacute;velopper davantage l&#39;utilit&eacute; de cette approche &agrave; la caract&eacute;risation des complexes r&eacute;ponses immunologiques pilot&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne.

Suivi des r&eacute;ponses ax&eacute;es sur l&#39;antig&egrave;ne par cytom&eacute;trie en flux : surveiller la prolif&eacute;ration par dilution de la teinture.

Nachverfolgung von Zelle Reagenzien wie der gr&uuml;n-fluoreszierende Protein Kennzeichnung Farbstoff CFSE und der lipophile Membran rot-fluoreszierender Farbstoff PKH26 werden h&auml;ufig Zellproliferation &uuml;berwachen durch Durchflusszytometrie in heterogenen Zelle Bev&ouml;lkerungen auf immun Reize reagieren. Beide Reagenzien Beflecken Zellen mit einer hellen homogene Fluoreszenz, die bei jeder Zellteilung Tochterzellen aufgeteilt ist. Weil Tochter Zelle Fluoreszenz Intensit&auml;t nach jeder Teilung etwa halbiert werden, informiert die Intensit&auml;t einer Zelle relativ zu seiner Intensit&auml;t zum Zeitpunkt der F&auml;rbung &uuml;ber wie viele Divisionen, die sie durchgemacht hat. Zu wissen, wie viele Runden der Division aufgetreten sind und die relative Anzahl der Zellen in jeder Tochter-Generation, kann man zur&uuml;ck-die Anzahl der Zellen in der urspr&uuml;nglichen Bev&ouml;lkerung (d.h. Zellen, die im Zeitpunkt der Anregung) berechnen, die ging auf, reagieren mit wuchernden. Mithilfe dieser Informationen k&ouml;nnen die Vorl&auml;ufer Zellh&auml;ufigkeiten und Ausma&szlig; der Ausdehnung auf ein spezifisches Antigen oder Mitogen Interesse berechnet werden. Gleichzeitig kann der Ph&auml;notyp der Zellen bestimmt werden, ebenso wie ihre F&auml;higkeit zu synthetisieren Cytokine, die detailliertere Charakterisierung aller Zellen, die Reaktion auf das Antigen, nicht nur Effektor Zellen oder Antigen binden. Multiparameter flie&szlig;en Cytometric Experimente gleichzeitig Antigen-spezifische Tetramer Bindung, Cytokine Produktion und T-Zellproliferation analysieren fanden wir, dass nur etwa die H&auml;lfte der Zellen, die spezifische Bindung an Grippe Tetramer ausgestellt auch vermehren, gemessen an Farbstoff Verd&uuml;nnung und IFNgamma Reaktion auf Antigen synthetisiert. Wir erwarten, dass das Aufkommen der neuen Zelle Farbstoffe ausgeben von der violett zum Nahen Infrarot mit der steigenden Zahl von Lasern und Detektoren auf zeitgen&ouml;ssische flie&szlig;en Cytometers kombiniert werden, um die N&uuml;tzlichkeit dieses Ansatzes zur Charakterisierung von komplexen Antigen-gesteuerten Immunreaktionen weiter verfolgen.

Tracking von Antigen-gesteuerte Reaktionen durch Durchflusszytometrie: &Uuml;berwachung der Verbreitung von Farbstoff-Verd&uuml;nnung.

Cella-rilevamento reagenti come la tintura di etichettatura della proteina verde fluorescente CFSE e il colorante rosso fluorescente lipofile membrana PKH26 vengono comunemente utilizzati per monitorare la proliferazione cellulare tramite flusso cytometry in popolazioni di cellule eterogenee risponde agli stimoli del sistema immunitario. Entrambi i reagenti si colorano di cellule con una brillante fluorescenza omogenea, che &egrave; diviso tra cellule della figlia durante ogni divisione cellulare. Perch&eacute; l&#39;intensit&agrave; di fluorescenza cellula figlia sono approssimativamente dimezzato dopo ogni divisione, l&#39;intensit&agrave; di una cella rispetto alla sua intensit&agrave; al momento della colorazione fornisce informazioni su quante divisioni ha subito. Sapendo quanti turni di divisione si sono verificati e il relativo numero di celle in ogni generazione figlia, uno indietro-calcolare il numero di cellule della popolazione originale (cio&egrave;, cellule presenti al momento dello stimolo) che &egrave; andato a rispondere con la proliferazione. Utilizzando queste informazioni, le frequenze delle cellule precursore e la misura dell&#39;espansione di un antigene specifico o mitogene di interesse pu&ograve; essere calcolati. Contemporaneamente, il fenotipo delle cellule pu&ograve; essere determinato, cos&igrave; come la loro capacit&agrave; di legare l&#39;antigene o sintetizzare citochine, fornendo dettagliate caratterizzazione di tutte le cellule che rispondono all&#39;antigene, non solo effettrici cellule. In esperimenti di multiparametrico flusso cytometric di analizzare simultaneamente associazione antigene-specifiche tetramero, produzione di citochine e proliferazione delle cellule T, abbiamo scoperto che anche solo circa la met&agrave; delle cellule che esposto il legame specifico di tetramero influenza proliferavano, come misurato dalla diluizione della tintura e sintetizzato IFN in risposta all&#39;antigene. Ci aspettiamo che l&#39;avvento della nuova cella tracking coloranti che emettono dal viola al vicino infrarosso combinato con il crescente numero di laser e rivelatori su citometri a flusso contemporaneo per espandere ulteriormente l&#39;utilit&agrave; di questo approccio alla caratterizzazione di complesse antigene-driven risposte immunologiche.

Rilevamento delle risposte antigene-driven in citometria a flusso: monitoraggio proliferazione di diluizione della tintura.

&#x7D30;&#x80DE;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x8A66;&#x85AC;&#x7DD1;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x30BF;&#x30F3;&#x30D1;&#x30AF;&#x8CEA;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x67D3;&#x6599; CFSE &#x306A;&#x3069;&#x3001;&#x89AA;&#x6CB9;&#x6027;&#x819C;&#x8D64;&#x8272;&#x86CD;&#x5149;&#x8272;&#x7D20; PKH26 &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x514D;&#x75AB;&#x523A;&#x6FC0;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7570;&#x7A2E;&#x7D30;&#x80DE;&#x96C6;&#x56E3;&#x306E;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x3067;&#x3042;&#x308A;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4E21;&#x65B9;&#x306E;&#x8A66;&#x85AC;&#x7D30;&#x80DE;&#x3068;&#x5404;&#x7D30;&#x80DE;&#x5206;&#x88C2;&#x306B;&#x304A;&#x3051;&#x308B;&#x5A18;&#x7D30;&#x80DE;&#x9593;&#x5206;&#x5272;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x660E;&#x308B;&#x3044;&#x5747;&#x4E00;&#x306A;&#x86CD;&#x5149;&#x67D3;&#x8272;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x5A18;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x86CD;&#x5149;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306F;&#x7D04;&#x5404;&#x90E8;&#x9580;&#x5F8C;&#x534A;&#x6E1B;&#x3067;&#x3059;&#x306E;&#x3067;&#x3001;&#x305D;&#x306E;&#x6642;&#x306E;&#x67D3;&#x8272;&#x5F37;&#x5EA6;&#x3068;&#x76F8;&#x5BFE;&#x7684;&#x306B;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x5F37;&#x5EA6;&#x306F;&#x305D;&#x308C;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x90E8;&#x9580;&#x306B;&#x3064;&#x3044;&#x3066;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x90E8;&#x9580;&#x306E;&#x3069;&#x306E;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x30E9;&#x30A6;&#x30F3;&#x30C9;&#x304C;&#x767A;&#x751F;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x308B;&#x3068;&#x3001;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x76F8;&#x5BFE;&#x6570;&#x5A18;&#x4E16;&#x4EE3;&#x3054;&#x3068;&#x306B;&#x77E5;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x306F;&#x3001;1 &#x3064;&#x5F8C;&#x308D; - &#x7D30;&#x80DE;&#x5897;&#x6B96;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x884C;&#x3063;&#x305F;&#x5143;&#x306E;&#x4EBA;&#x53E3; &#xFF08;&#x3059;&#x306A;&#x308F;&#x3061;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x523A;&#x6FC0;&#x6642;&#x306B;&#x5B58;&#x5728;&#xFF09; &#x306E;&#x6570;&#x8A08;&#x7B97;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x60C5;&#x5831;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x3001;&#x524D;&#x99C6;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x983B;&#x5EA6;&#x3068;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x306F;&#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x6297;&#x539F;&#x3078;&#x306E;&#x5C55;&#x958B;&#x306E;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x30DE;&#x30A4;&#x30C8;&#x30B8;&#x30A7;&#x30F3;&#x95A2;&#x5FC3;&#x306E;&#x8A08;&#x7B97;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x7D50;&#x5408;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x7D30;&#x80DE;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x3059;&#x3079;&#x3066;&#x306E;&#x30BB;&#x30EB;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3059;&#x308B;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x3092;&#x5408;&#x6210;&#x3059;&#x308B;&#x80FD;&#x529B;&#x3060;&#x3051;&#x3067;&#x306A;&#x304F;&#x3001;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x8868;&#x73FE;&#x578B;&#x3092;&#x6C7A;&#x5B9A;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C7;&#x30A3;&#x30F3;&#x30B0;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x304A;&#x3088;&#x3073; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x540C;&#x6642;&#x306B;&#x5206;&#x6790;&#x3059;&#x308B;&#x30DE;&#x30EB;&#x30C1;&#x30D1;&#x30E9; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC; &#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x5B9F;&#x9A13;&#x3067;&#x306F;, &#x7279;&#x5B9A;&#x306E;&#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9; &#x30A4;&#x30F3;&#x30D5;&#x30EB;&#x30A8;&#x30F3;&#x30B6; 4 &#x91CF;&#x4F53;&#x3078;&#x5C55;&#x793A;&#x3057;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x306E;&#x307F;&#x7D04;&#x534A;&#x5206;&#x3082;&#x3001;&#x8272;&#x7D20;&#x5E0C;&#x91C8;&#x6CD5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x6E2C;&#x5B9A;&#x3057;&#x305F;&#x3088;&#x3046;&#x306B;&#x5897;&#x6B96;&#x3057;&#x3001;IFNgamma &#x6297;&#x539F;&#x306B;&#x5BFE;&#x3059;&#x308B;&#x53CD;&#x5FDC;&#x3067;&#x5408;&#x6210;&#x3092;&#x767A;&#x898B;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x65B0;&#x3057;&#x3044;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x67D3;&#x6599;&#x304B;&#x3089;&#x30D0;&#x30A4;&#x30AA;&#x30EC;&#x30C3;&#x30C8;&#x8907;&#x96D1;&#x306A;&#x6297;&#x539F;&#x99C6;&#x52D5;&#x306E;&#x514D;&#x75AB;&#x5B66;&#x7684;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x7279;&#x6027;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306B;&#x3053;&#x306E;&#x30A2;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30C1;&#x306E;&#x6709;&#x7528;&#x6027;&#x3092;&#x3055;&#x3089;&#x306B;&#x62E1;&#x5927;&#x3059;&#x308B;&#x30EC;&#x30FC;&#x30B6;&#x30FC;&#x3068;&#x73FE;&#x4EE3;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x3067;&#x691C;&#x51FA;&#x5668;&#x306E;&#x5897;&#x52A0;&#x6570;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x8FD1;&#x8D64;&#x5916;&#x767A;&#x5149;&#x306E;&#x51FA;&#x73FE;&#x3092;&#x671F;&#x5F85;&#x3057;&#x3066;&#x3044;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x306B;&#x3088;&#x308B;&#x6297;&#x539F;&#x99C6;&#x52D5;&#x306B;&#x3088;&#x308A;&#x5FDC;&#x7B54;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;: &#x8272;&#x7D20;&#x5E0C;&#x91C8;&#x306B;&#x3088;&#x3063;&#x3066;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xB179;&#xC0C9; &#xD615;&#xAD11; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC5FC;&#xB8CC; CFSE &#xAC19;&#xC740; &#xC140; &#xCD94;&#xC801; &#xC2DC; &#xC57D; &#xBC0F; &#xB808;&#xB4DC; &#xD615;&#xAD11; &#xBE14;&#xB808;&#xBBF8;&#xC26C; &#xB9C9; &#xC5FC;&#xB8CC; pkh26&#xB294; cytometry &#xBA74;&#xC5ED; &#xC790;&#xADF9;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xC720;&#xD615;&#xC774; &#xB2E4;&#xB978; &#xC138;&#xD3EC; &#xC778;&#xAD6C;&#xC5D0; &#xC758;&#xD574; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xC744; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC73C;&#xB85C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC2DC; &#xC57D; &#xAC01; &#xC138;&#xD3EC; &#xBD84;&#xC5F4; &#xB3D9;&#xC548; &#xB538; &#xC138;&#xD3EC; &#xC0AC;&#xC774; &#xBD84;&#xD560; &#xB418;&#xC5B4; &#xC788;&#xB294; &#xBC1D;&#xC740; &#xADE0;&#xC9C8; &#xD615;&#xAD11;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC744; &#xC5BC;&#xB8E9;. &#xB538; &#xC138;&#xD3EC; &#xD615;&#xAD11; &#xB18D;&#xB3C4; &#xC57D; &#xAC01; &#xBD80;&#xBB38; &#xD6C4; &#xC808;&#xBC18; &#xAC00;&#xAE4C;&#xC774; &#xB5A8;&#xC5B4;&#xC84C;&#xB2E4;, &#xB54C;&#xBB38;&#xC5D0; &#xC5BC;&#xB8E9;&#xC774; &#xC9C0;&#xB294; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xAE30;&#xC900;&#xC73C;&#xB85C; &#xC140;&#xC758; &#xAC15;&#xB3C4; &#xACAA;&#xACE0; &#xC788;&#xB2E4; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB9CE;&#xC740; &#xBD80;&#xBB38;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xAC01; &#xB538; &#xC138;&#xB300;&#xC5D0; &#xC0AC;&#xB2E8;&#xC758; &#xC5BC;&#xB9C8;&#xB098; &#xB9CE;&#xC740; &#xB77C;&#xC6B4;&#xB4DC; &#xBC1C;&#xC0DD; &#xD588; &#xACE0; &#xC0C1;&#xB300; &#xC140; &#xC218;&#xB97C; &#xC54C;&#xBA74;, &#xD558;&#xB098; &#xBC31;-&#xACC4;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4; &#xC140;&#xC774; &#xD655;&#xC0B0; &#xD558; &#xC5EC; &#xC751;&#xB2F5; &#xD588;&#xB2E4; (&#xC989;, &#xC138;&#xD3EC; &#xC790;&#xADF9;&#xC758; &#xC2DC;&#xAC04;&#xC5D0;) &#xC6D0;&#xB798; &#xC778;&#xAD6C; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC815;&#xBCF4;&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC;, &#xC804;&#xC870; &#xC138;&#xD3EC; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xBC0F; &#xD2B9;&#xC815; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xD655;&#xC7A5;&#xC758; &#xC815;&#xB3C4; &#xB610;&#xB294; &#xAD00;&#xC2EC; &#xBB3C;&#xC9C8; &#xACC4;&#xC0B0;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0;, &#xD45C;&#xD604; &#xD615; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xD558;&#xAC70;&#xB098; cytokines, &#xC790;&#xC138;&#xD55C; &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xBFD0; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC5D0; &#xC751;&#xB2F5; &#xD558;&#xB294; &#xBAA8;&#xB4E0; &#xC140;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD558; &#xACE0; &#xD569;&#xC131; &#xD558;&#xB294; &#xB2A5;&#xB825; &#xBFD0;&#xB9CC; &#xC544;&#xB2C8;&#xB77C; &#xD655;&#xC778;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; tetramer &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, cytokine &#xC0DD;&#xC0B0; &#xBC0F; T-&#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD;&#xC744; &#xB3D9;&#xC2DC;&#xC5D0; &#xBD84;&#xC11D; &#xD558;&#xB294; multiparameter &#xD750;&#xB984; cytometric &#xC2E4;&#xD5D8;, &#xC778;&#xD50C;&#xB8E8;&#xC5D4;&#xC790; tetramer &#xD2B9;&#xC815; &#xBC14;&#xC778;&#xB529;&#xC744; &#xC804;&#xC2DC; &#xC140;&#xB9CC; &#xC57D; &#xC808;&#xBC18;&#xB3C4; &#xD655;&#xC0B0;, &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD76C;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xCE21;&#xC815; &#xD558; &#xACE0; &#xD56D; &#xC6D0;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC751;&#xB2F5;&#xC5D0;&#xC11C; IFNgamma &#xD569;&#xC131; &#xCC3E;&#xC558;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xB294; &#xBCF4;&#xB77C;&#xC0C9;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB354; &#xBCF5;&#xC7A1; &#xD55C; &#xD56D; &#xC6D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xBA74;&#xC5ED; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; &#xD2B9;&#xC131;&#xC744;&#xC774; &#xC811;&#xADFC; &#xBC29;&#xBC95;&#xC758; &#xC720;&#xC6A9;&#xC131;&#xC744; &#xD655;&#xC7A5;&#xC744; &#xB808;&#xC774;&#xC800; &#xBC0F; &#xAC80;&#xCD9C;&#xAE30; cytometers &#xD604;&#xB300; &#xD750;&#xB984;&#xC5D0;&#xC758; &#xC99D;&#xAC00; &#xD568;&#xAED8; &#xADFC;&#xCC98; &#xC801;&#xC678;&#xC120;&#xC744; &#xBC29;&#xCD9C; &#xD558;&#xB294; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xCD94;&#xC801; &#xD558;&#xB294; &#xC0C8;&#xB85C;&#xC6B4; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xCD9C;&#xD604;&#xC744; &#xAE30;&#xB300; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Cytometry &#xD56D; &#xC6D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xC751;&#xB2F5; &#xCD94;&#xC801;: &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD76C;&#xC11D; &#xD558; &#xC5EC; &#xD655;&#xC0B0;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

Reactivos de la c&eacute;lula de seguimiento como el tinte de etiquetado de la prote&iacute;na verde fluorescente CFSE y el tinte rojo fluorescente lipof&iacute;lico membrana PKH26 se usan para controlar la proliferaci&oacute;n celular mediante citometr&iacute;a de flujo en poblaciones celulares heterog&eacute;neas a responder a los est&iacute;mulos inmunes. Ambos reactivos ti&ntilde;en las c&eacute;lulas con un brillante fluorescencia homog&eacute;neo, que se reparte entre las c&eacute;lulas hijas durante cada divisi&oacute;n celular. Porque la intensidad de fluorescencia de c&eacute;lula hija se reduce a la mitad aproximadamente despu&eacute;s de cada divisi&oacute;n, la intensidad de una c&eacute;lula en relaci&oacute;n con su intensidad en el momento de la coloraci&oacute;n proporciona informaci&oacute;n sobre cu&aacute;ntas divisiones que ha sufrido. Saber cu&aacute;ntas rondas de divisi&oacute;n han producido y el n&uacute;mero relativo de c&eacute;lulas en cada generaci&oacute;n de hija, uno puede detr&aacute;s-calcular el n&uacute;mero de c&eacute;lulas en la poblaci&oacute;n original (es decir, c&eacute;lulas presentes en el momento de est&iacute;mulo) que pas&oacute; a responder por la proliferaci&oacute;n. Con esta informaci&oacute;n, el precursor celular frecuencias y grado de expansi&oacute;n para un ant&iacute;geno espec&iacute;fico o mit&oacute;geno de inter&eacute;s se pueden calcular. Al mismo tiempo, puede determinarse el fenotipo de las c&eacute;lulas, as&iacute; como su capacidad para enlazar el ant&iacute;geno o sintetizar citoquinas, proporcionando que m&aacute;s detallada caracterizaci&oacute;n de todas las c&eacute;lulas en respuesta al ant&iacute;geno, generador de efectos no s&oacute;lo las c&eacute;lulas. En experimentos de citometr&iacute;a flujo multipar&aacute;metro para analizar simult&aacute;neamente la uni&oacute;n espec&iacute;fica de ant&iacute;geno tetr&aacute;mero, producci&oacute;n de citoquinas y proliferaci&oacute;n de c&eacute;lulas T, se encontr&oacute; que s&oacute;lo aproximadamente la mitad de las c&eacute;lulas que exhiben la uni&oacute;n espec&iacute;fica a tetr&aacute;mero de gripe tambi&eacute;n proliferaron, medida por diluci&oacute;n del colorante y sintetiza IFNgamma en respuesta al ant&iacute;geno. Esperamos la llegada de la nueva c&eacute;lula de seguimiento tintes emitiendo desde el violeta en el infrarrojo cercano, combinado con el creciente n&uacute;mero de l&aacute;seres y detectores en cit&oacute;metros de flujo contempor&aacute;neo para ampliar a&uacute;n m&aacute;s la utilidad de este enfoque a la caracterizaci&oacute;n de respuestas inmunol&oacute;gicas basadas en ant&iacute;geno complejas.

Seguimiento de las respuestas basadas en ant&iacute;geno mediante citometr&iacute;a de flujo: control de proliferaci&oacute;n por diluci&oacute;n de tinte.

&#x5728;&#x672C;&#x7CFB;&#x5217;&#x7684;&#x7B2C;&#x4E8C;&#x7248;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x63CF;&#x8FF0;&#x4E86;&#x4F7F;&#x7528;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x4E0E;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x8BD5;&#x5242;&#x548C;&#x4F20;&#x7EDF;&#x9707;&#x64BC;&#x534F;&#x8BAE;&#x6765;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#x7A0B;&#x5EA6;&#x76F8;&#x7ED3;&#x5408;&#x7684;&#x67D3;&#x6599;&#x548C;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027; CD8(+) T &#x7EC6;&#x80DE;&#x5206;&#x6CCC;&#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x3002;&#x5C24;&#x5176;&#x662F;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x8BF4;&#x660E;&#x4E86;&#x5982;&#x4F55;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x67D3;&#x6599;&#x8367;&#x5149;&#x914D;&#x7F6E;&#x6587;&#x4EF6;&#x53EF;&#x7528;&#x4E8E;&#x786E;&#x5B9A;&#x5728; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x6C60;&#x80FD;&#x591F;&#x7ED1;&#x5B9A;&#x56DB;&#x805A;&#x4F53;&#x3001; &#x7EC6;&#x80DE;&#x56E0;&#x5B50;&#x7684;&#x5408;&#x6210;&#x3001; &#x63A5;&#x53D7;&#x6297;&#x539F;&#x9A71;&#x52A8;&#x7684;&#x6269;&#x6563;&#xFF0C;&#x6216;&#x6267;&#x884C;&#x8FD9;&#x4E9B;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5404;&#x79CD;&#x7EC4;&#x5408;&#x7684;&#x4E0D;&#x540C;&#x5B50;&#x96C6;&#x7684;&#x524D;&#x4F53;&#x9891;&#x7387;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x5F02;&#x6027;&#x589E;&#x6B96;&#x6027;&#x53CD;&#x5E94;&#x7684;&#x5206;&#x6790;&#x8868;&#x793A;&#x53EA;&#x662F;&#x5F88;&#x591A;&#x7684;&#x51FD;&#x6570;&#xFF0C;&#x53EF;&#x4EE5;&#x4F7F;&#x7528;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x67D3;&#x6599;&#x7684;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x8FDB;&#x884C;&#x76D1;&#x6D4B;&#x5E76;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x672F;&#x4E4B;&#x4E00;&#x3002;&#x5728;&#x8FD9;&#x7B2C;&#x4E09;&#x7248;&#x4E2D;&#xFF0C;&#x6211;&#x4EEC;&#x5904;&#x7406;&#x7ED3;&#x5408;&#x5176;&#x4ED6;&#x8868;&#x578B;&#x4E24;&#x79CD;&#x4E0D;&#x540C;&#x7684;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x67D3;&#x6599;&#x65F6;&#x8981;&#x8003;&#x8651;&#x7684;&#x95EE;&#x9898;&#x548C;&#x53EF;&#x884C;&#x6027;&#x63A2;&#x9488;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6548;&#x5E94;&#x6D3B;&#x52A8;&#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x529F;&#x80FD;&#x7684;&#x8BC4;&#x4F30;&#x3002;&#x6211;&#x4EEC;&#x603B;&#x7ED3;&#x7684;&#x5173;&#x952E;&#x7279;&#x5F81;&#x548C;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x86CB;&#x767D;&#x548C;&#x819C;&#x6807;&#x8BB0;&#x67D3;&#x6599;&#x4E4B;&#x95F4;&#x7684;&#x5DEE;&#x5F02;&#xFF0C;&#x8BA8;&#x8BBA;&#x6700;&#x4F73;&#x7684;&#x67D3;&#x8272;&#x6D53;&#x5EA6;&#x6D4B;&#x5B9A;&#x548C;&#x4E3A;&#x8FD9;&#x4E24;&#x79CD;&#x67D3;&#x6599;&#x7C7B;&#x578B;&#x63D0;&#x4F9B;&#x8BE6;&#x7EC6;&#x7684;&#x8D34;&#x6807;&#x534F;&#x8BAE;&#x3002;&#x793A;&#x4F8B;&#x8DDF;&#x8E2A;&#x7684;&#x4E24;&#x4E2A;&#x989C;&#x8272;&#x5355;&#x5143;&#x683C;&#x7684;&#x4F18;&#x52BF; (a) &#x72EC;&#x7ACB;&#x7684;&#x53EF;&#x884C;&#x6548;&#x5E94;&#x4E0E;&#x76EE;&#x6807;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x4E00;&#x79CD;&#x76F4;&#x63A5;&#x7684;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x68C0;&#x6D4B;&#x65B9;&#x6CD5;&#x679A;&#x4E3E;&#x548C; (b) &#x540C;&#x65F6;&#x76D1;&#x6D4B;&#x7684;&#x6548;&#x5E94;&#x548C;&#x76D1;&#x7BA1;&#x7684; T &#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x53CD;&#x5E94;&#x63D0;&#x4F9B;&#x534F;&#x8BAE;&#x7684;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3002;

&#x8DDF;&#x8E2A;&#x514D;&#x75AB;&#x7EC6;&#x80DE;&#x589E;&#x6B96;&#x548C;&#x7EC6;&#x80DE;&#x6BD2;&#x4F7F;&#x7528;&#x6D41;&#x5F0F;&#x7EC6;&#x80DE;&#x7684;&#x6F5C;&#x529B;&#x3002;

In the second edition of this series, we described the use of cell tracking dyes in combination with tetramer reagents and traditional phenotyping protocols to monitor levels of proliferation and cytokine production in antigen-specific CD8(+) T cells. In particular, we illustrated how tracking dye fluorescence profiles could be used to ascertain the precursor frequencies of different subsets in the T-cell pool that are able to bind tetramer, synthesize cytokines, undergo antigen-driven proliferation, and/or carry out various combinations of these functional responses.Analysis of antigen-specific proliferative responses represents just one of many functions that can be monitored using cell tracking dyes and flow cytometry. In this third edition, we address issues to be considered when combining two different tracking dyes with other phenotypic and viability probes for the assessment of cytotoxic effector activity and regulatory T-cell functions. We summarize key characteristics of and differences between general protein- and membrane-labeling dyes, discuss determination of optimal staining concentrations, and provide detailed labeling protocols for both dye types. Examples of the advantages of two-color cell tracking are provided in the form of protocols for (a) independent enumeration of viable effector and target cells in a direct cytotoxicity assay and (b) simultaneous monitoring of proliferative responses in effector and regulatory T cells.

Tracking immune cell proliferation and cytotoxic potential using flow cytometry.

Dans la deuxi&egrave;me &eacute;dition de cette s&eacute;rie, nous avons d&eacute;crit l&#39;utilisation de la cellule de suivi des colorants en combinaison avec le t&eacute;tram&egrave;re r&eacute;actifs et les protocoles traditionnels ph&eacute;notypage pour surveiller les niveaux de la prolif&eacute;ration et la production de cytokines dans les cellules T CD8 sp&eacute;cifiques de l&#39;antig&egrave;ne. En particulier, nous montre comment le colorant fluorescence profils de suivi pourrait &ecirc;tre utilis&eacute; pour d&eacute;terminer les fr&eacute;quences de pr&eacute;curseur des diff&eacute;rents sous-ensembles dans le pool de cellules T qui sont capables de lier le t&eacute;tram&egrave;re, synth&eacute;tiser les cytokines, subissent une prolif&eacute;ration pilot&eacute;e par l&#39;antig&egrave;ne, ou &agrave; proc&eacute;der &agrave; diverses combinaisons de ces r&eacute;ponses fonctionnelles.Analyse des r&eacute;actions de prolif&eacute;ration antig&egrave;ne-sp&eacute;cifiques repr&eacute;sente une des nombreuses fonctions qui peuvent &ecirc;tre surveill&eacute;es &agrave; l&#39;aide de la cellule de suivi des colorants et cytom&eacute;trie en flux. Dans cette troisi&egrave;me &eacute;dition, nous abordons les questions devant &ecirc;tre examin&eacute;es lors de la combinaison de deux colorants suivi diff&eacute;rente avec autres ph&eacute;notypique et viabilit&eacute; des sondes pour l&#39;&eacute;valuation de l&#39;activit&eacute; effectrices cytotoxiques et les fonctions de cellules T r&eacute;gulatrices. Nous r&eacute;sumons caract&eacute;ristiques cl&eacute;s d&#39;et les diff&eacute;rences entre les colorants g&eacute;n&eacute;ral-marquage prot&eacute;ine et membrane, discuter la d&eacute;termination des concentrations optimales de coloration et fournir des protocoles d&eacute;taill&eacute;s de marquage pour les deux types de colorant. Exemples des avantages des deux couleurs de cellule de suivi sont fournis sous la forme de protocoles pour l&#39;&eacute;num&eacute;ration b ind&eacute;pendante d&#39;effecteur viable et cellules cibles dans un essai de cytotoxicit&eacute; directe et de surveillance (b) simultan&eacute;e des r&eacute;ponses prolif&eacute;ratives effecteur et les lymphocytes T r&eacute;gulateurs.

Suivi de la prolif&eacute;ration des cellules immunitaires et potentiel cytotoxique utilisant l&#39;&eacute;coulement cytometry.

In der zweiten Auflage dieser Serie beschrieben wir die Verwendung von Zelle tracking Farbstoffe in Kombination mit Tetramer Reagenzien und traditionellen pathologies Protokolle zur &Uuml;berwachung der Verbreitung und Cytokine Produktion in Antigen-spezifische CD8(+) T-Zellen. Insbesondere dargestellt wir, wie Farbstoff Fluoreszenz &Uuml;berwachungsprofile verwendet werden k&ouml;nnte, um die Vorl&auml;ufer-Frequenzen der verschiedenen Untergruppen in den T-Zell-Pool zu ermitteln, das Tetramer zu binden, synthetisieren Cytokine, Antigen-gesteuerte Vermehrung zu unterziehen bzw. verschiedene Kombinationen dieser funktionale Antworten durchf&uuml;hren k&ouml;nnen.Analyse der Antigen-spezifische proliferative Antworten ist nur eine von vielen Funktionen, die mithilfe der Zelle Verfolgung Farbstoffe &uuml;berwacht werden k&ouml;nnen und Durchflusszytometrie. In dieser dritten Auflage wir behandeln Fragen, die bei der Kombination von zwei verschiedenen Tracking-Farbstoffen mit andere ph&auml;notypische und Lebensf&auml;higkeit Sonden f&uuml;r die Bestimmung der Aktivit&auml;t der zytotoxischen Effektor und regulatorische T-Zell-Funktionen. Wir zusammenzufassen ma&szlig;geblichen Merkmale und Unterschiede zwischen allgemeine Protein - und Membran-Kennzeichnung Farbstoffe, Bestimmung der optimalen F&auml;rbung Konzentrationen zu diskutieren und bieten detaillierte Kennzeichnung Protokolle f&uuml;r beide Farbstoff-Typen. Beispiele f&uuml;r die Vorteile des zwei-Farben-Zelle verfolgen werden in Form von Protokollen f&uuml;r (a) unabh&auml;ngige Aufz&auml;hlung von lebensf&auml;higen Effektor und Zielzellen in eine direkte Zytotoxizit&auml;t-Assay und (b) gleichzeitige &Uuml;berwachung proliferative Reaktionen in der Effektor und regulatorischen T-Zellen bereitgestellt.

Verfolgung immun Zellproliferation und zytotoxischen Potenzial mit Hilfe der Durchflusszytometrie.

Nella seconda edizione di questa serie, abbiamo descritto l&#39;uso della cella tracking coloranti in combinazione con i reagenti tetramero e fenotipi tradizionali protocolli per monitorare i livelli di proliferazione e produzione di citochine nelle cellule cellule T antigene-specifiche. In particolare, abbiamo illustrato come colorante fluorescenza profili di rilevamento potrebbero essere utilizzato per verificare le frequenze precursore di diversi sottoinsiemi del pool di cellule T che sono in grado di associare tetramero, sintetizzare citochine, subiscono la proliferazione antigene-driven o effettuare diverse combinazioni di queste risposte funzionali.Analisi delle risposte proliferative antigene-specifiche rappresenta solo una delle tante funzioni che possono essere monitorate utilizzando coloranti di rilevamento della cella e citometria a fluiscono. In questa terza edizione, risoluzione dei problemi da considerare quando si combinano due coloranti di rilevamento differenti con altri fenotipica e redditivit&agrave; sonde per la valutazione delle attivit&agrave; effettrici citotossiche e regolamentazione funzioni delle cellule T. Riassumere le caratteristiche chiave di e le differenze tra coloranti generale - e membrana-contrassegno della proteina, discutere la determinazione delle concentrazioni di colorazione ottimale e fornire dettagliati protocolli d&#39;etichettatura per entrambi i tipi di tintura. Esempi dei vantaggi della cellula di due colori di rilevamento vengono forniti sotto forma di protocolli per l&#39;enumerazione (a) indipendente di vitali effettrici e cellule bersaglio in un saggio di citotossicit&agrave; diretta e (b) simultaneo monitoraggio delle risposte proliferative effettrici e cellule T regolatorie.

Rilevamento di proliferazione delle cellule immunitarie e citotossico mediante citometria a flusso.

&#x3053;&#x306E;&#x30B7;&#x30EA;&#x30FC;&#x30BA;&#x306E;&#x7B2C; 2 &#x7248;&#x3067;&#x306F;&#x3001;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0; &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC;&#x8A66;&#x85AC;&#x304A;&#x3088;&#x3073;&#x5897;&#x6B96;&#x306E;&#x30EC;&#x30D9;&#x30EB;&#x3092;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x4F1D;&#x7D71;&#x7684;&#x306A;&#x30D5;&#x30A7;&#x30CE;&#x30BF;&#x30A4;&#x30D4;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x3068;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3066;&#x67D3;&#x6599;&#x3068;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x3060;&#x308D;&#x3046;&#x3053;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x7523;&#x751F;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x4F7F;&#x7528;&#x3092;&#x8AAC;&#x660E;&#x3057;&#x307E;&#x3057;&#x305F;&#x3002;&#x7279;&#x306B;&#x3001;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x8272;&#x7D20;&#x86CD;&#x5149;&#x30D7;&#x30ED;&#x30D5;&#x30A1;&#x30A4;&#x30EB; &#x30C6;&#x30C8;&#x30E9;&#x30DE;&#x30FC; &#x30D0;&#x30A4;&#x30F3;&#x30C9;&#x3001;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30AB;&#x30A4;&#x30F3;&#x5408;&#x6210;&#x3001;&#x6297;&#x539F;&#x99C6;&#x52D5;&#x5897;&#x6B96;&#x3092;&#x53D7;&#x3051;&#x308B;&#x3001;&#x307E;&#x305F;&#x306F;&#x3053;&#x308C;&#x3089;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x5FDC;&#x7B54;&#x306E;&#x3055;&#x307E;&#x3056;&#x307E;&#x306A;&#x7D44;&#x307F;&#x5408;&#x308F;&#x305B;&#x3092;&#x904B;&#x3076;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059; T &#x7D30;&#x80DE;&#x30D7;&#x30FC;&#x30EB;&#x5185;&#x306E;&#x5225;&#x306E;&#x30B5;&#x30D6;&#x30BB;&#x30C3;&#x30C8;&#x306E;&#x524D;&#x99C6;&#x4F53;&#x306E;&#x5468;&#x6CE2;&#x6570;&#x3092;&#x78BA;&#x8A8D;&#x3059;&#x308B;&#x305F;&#x3081;&#x306B;&#x4F7F;&#x7528;&#x65B9;&#x6CD5;&#x3092;&#x793A;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6297;&#x539F;&#x7279;&#x7570;&#x7684;&#x5897;&#x6B96;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E;&#x89E3;&#x6790;&#x306F; 1 &#x3064;&#x3060;&#x3051;&#x306E;&#x7D30;&#x80DE;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3059;&#x308B;&#x67D3;&#x6599;&#x3092;&#x4F7F;&#x7528;&#x3057;&#x3066;&#x76E3;&#x8996;&#x3059;&#x308B;&#x3053;&#x3068;&#x304C;&#x3067;&#x304D;&#x307E;&#x3059;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8; &#x30E1;&#x30FC;&#x30BF;&#x30FC;&#x3001;&#x591A;&#x304F;&#x306E;&#x6A5F;&#x80FD;&#x3092;&#x8868;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x3053;&#x306E;&#x7B2C; 3 &#x7248;&#x3001;&#x6211;&#x3005; 2 &#x3064;&#x306E;&#x7570;&#x306A;&#x308B;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x306E;&#x67D3;&#x6599;&#x306F;&#x4ED6;&#x5F62;&#x8CEA;&#x3068;&#x7D50;&#x5408;&#x3059;&#x308B;&#x3068;&#x304D;&#x306B;&#x8003;&#x616E;&#x3059;&#x308B;&#x554F;&#x984C;&#x306B;&#x5BFE;&#x51E6;&#x3057;&#x3001;&#x751F;&#x5B58;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x6027;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x6D3B;&#x6027;&#x3068;&#x898F;&#x5236;&#x306E; T &#x7D30;&#x80DE;&#x6A5F;&#x80FD;&#x306E;&#x8A55;&#x4FA1;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30FC;&#x30D6;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x6211;&#x3005; &#x306E;&#x4E3B;&#x8981;&#x306A;&#x7279;&#x5FB4;&#x3068;&#x86CB;&#x767D;&#x8CEA;-&#x819C;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x4E00;&#x822C;&#x7684;&#x306A;&#x67D3;&#x6599;&#x306E;&#x9055;&#x3044;&#x3092;&#x8981;&#x7D04;&#x3001;&#x6700;&#x9069;&#x67D3;&#x8272;&#x6FC3;&#x5EA6;&#x306E;&#x5B9A;&#x91CF;&#x3092;&#x8A71;&#x3057;&#x5408;&#x3046;&#x3001;&#x8A73;&#x7D30;&#x306A;&#x30E9;&#x30D9;&#x30EA;&#x30F3;&#x30B0; &#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x4E21;&#x65B9;&#x8272;&#x7D20;&#x306E;&#x7A2E;&#x985E;&#x3092;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;&#x4F8B; 2 &#x8272;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x30C8;&#x30E9;&#x30C3;&#x30AD;&#x30F3;&#x30B0;&#x306E;&#x5229;&#x70B9;&#x306E;&#x30D7;&#x30ED;&#x30C8;&#x30B3;&#x30EB;&#x306E;&#x5F62;&#x5F0F;&#x3067;&#x5B9F;&#x884C;&#x53EF;&#x80FD;&#x306A;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x6A19;&#x7684;&#x7D30;&#x80DE;&#x306B;&#x76F4;&#x63A5;&#x7D30;&#x80DE;&#x6BD2;&#x6027;&#x306E;&#x8A66;&#x91D1; (a) &#x72EC;&#x7ACB;&#x3057;&#x305F;&#x5217;&#x6319;&#x3068;&#x30A8;&#x30D5;&#x30A7;&#x30AF;&#x30BF;&#x30FC;&#x3068;&#x5236;&#x5FA1;&#x6027; T &#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x53CD;&#x5FDC;&#x306E; &#xFF08;b&#xFF09; &#x540C;&#x6642;&#x76E3;&#x8996;&#x306E;&#x305F;&#x3081;&#x63D0;&#x4F9B;&#x3055;&#x308C;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#x514D;&#x75AB;&#x7D30;&#x80DE;&#x306E;&#x5897;&#x6B96;&#x3068;&#x30D5;&#x30ED;&#x30FC;&#x30B5;&#x30A4;&#x30C8;&#x30E1;&#x30C8;&#x30EA;&#x30FC;&#x3092;&#x7528;&#x3044;&#x305F;&#x7D30;&#x80DE;&#x50B7;&#x5BB3;&#x306E;&#x53EF;&#x80FD;&#x6027;&#x3092;&#x8FFD;&#x8DE1;&#x3057;&#x307E;&#x3059;&#x3002;

&#xC774; &#xC2DC;&#xB9AC;&#xC988;&#xC758; &#xB450; &#xBC88;&#xC9F8; &#xBC84;&#xC804;&#xC5D0;&#xC11C; &#xCD94;&#xC801; tetramer &#xC2DC; &#xC57D; &#xBC0F; &#xD655;&#xC0B0;&#xC758; &#xC218;&#xC900;&#xC744; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD558;&#xB294; &#xC804;&#xD1B5;&#xC801;&#xC778; &#xD615;&#xC9C8; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C; &#xD568;&#xAED8; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xBC0F; cytokine &#xC0DD;&#xC0B0; CD8(+) T &#xC138;&#xD3EC; &#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC138;&#xD3EC;&#xC758; &#xC0AC;&#xC6A9;&#xC744; &#xC124;&#xBA85; &#xD588;&#xC2B5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xD2B9;&#xD788;, &#xC6B0;&#xB9AC; &#xCD94;&#xC801; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xD615;&#xAD11; &#xD504;&#xB85C;&#xD544; &#xC218; &#xC6A9;&#xB3C4; tetramer &#xBC14;&#xC778;&#xB529;, cytokines&#xC744; &#xD569;&#xC131;, &#xD56D; &#xC6D0; &#xAE30;&#xBC18; &#xD655;&#xC0B0; &#xBC1B; &#xB2E4; &#xB610;&#xB294; &#xC774;&#xB7EC;&#xD55C; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xB2E4;&#xC591; &#xD55C; &#xC870;&#xD569;&#xC744; &#xC218;&#xD589; &#xC218; &#xC788;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xD480;&#xC5D0; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xD558;&#xC704; &#xC9D1;&#xD569;&#xC758; &#xC804;&#xC870; &#xC8FC;&#xD30C;&#xC218; &#xD655;&#xC778;&#xC744; &#xBCF4;&#xC5EC; &#xC90D;&#xB2C8;&#xB2E4;.&#xD56D; &#xC6D0; &#xD2B9;&#xC815; &#xC99D;&#xC2DD; &#xC751;&#xB2F5;&#xC758; &#xBD84;&#xC11D; &#xC140; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xCD94;&#xC801;&#xC744; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1;&#xD560; &#xC218; &#xC788;&#xB294; &#xD750;&#xB984; cytometry &#xB9CE;&#xC740; &#xAE30;&#xB2A5; &#xC911; &#xD558;&#xB098;&#xB97C; &#xB098;&#xD0C0;&#xB0C5;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xC774; &#xC81C; 3 &#xD310;&#xC5D0;&#xC11C; &#xC6B0;&#xB9AC;&#xAC00; &#xB2E4;&#xB978; phenotypic&#xACFC; &#xB450; &#xAC1C;&#xC758; &#xC11C;&#xB85C; &#xB2E4;&#xB978; &#xCD94;&#xC801; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xB97C; &#xACB0;&#xD569; &#xC2DC;&#xD0AC; &#xB54C; &#xACE0;&#xB824;&#xD574; &#xC57C; &#xD560; &#xBB38;&#xC81C;&#xB97C; &#xD574;&#xACB0; &#xD558; &#xACE0; &#xC0DD;&#xC874; cytotoxic effector &#xD65C;&#xB3D9; &#xBC0F; &#xADDC;&#xC815; &#xD558;&#xB294; T &#xC138;&#xD3EC; &#xAE30;&#xB2A5; &#xD3C9;&#xAC00; &#xC870;&#xC0AC;. &#xC6B0;&#xB9AC;&#xC758; &#xC8FC;&#xC694; &#xD2B9;&#xC9D5; &#xBC0F; &#xC77C;&#xBC18;&#xC801;&#xC778; &#xB2E8;&#xBC31;&#xC9C8; &#xBC0F; &#xBA64;&#xBE0C;&#xB808;&#xC778; &#xB77C;&#xBCA8; &#xC5FC;&#xB8CC;&#xC758; &#xCC28;&#xC774;&#xC810;&#xC744; &#xC694;&#xC57D; &#xCD5C;&#xC801;&#xC758; &#xC5BC;&#xB8E9; &#xB18D;&#xB3C4;&#xC758; &#xACB0;&#xC815; &#xD1A0;&#xB860; &#xD558; &#xACE0; &#xB450; &#xC5FC;&#xB8CC; &#xC885;&#xB958;&#xC5D0; &#xB300; &#xD55C; &#xC0C1;&#xC138;&#xD55C; &#xB808;&#xC774;&#xBE14; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC744; &#xC81C;&#xACF5; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;. &#xB450; &#xC0C9; &#xC140; &#xCD94;&#xC801;&#xC758; &#xC7A5;&#xC810;&#xC758; &#xC608;&#xB294; &#xAC00;&#xB2A5;&#xD55C; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xC9C1;&#xC811;&#xC801;&#xC778; &#xC138;&#xD3EC; &#xB3C5;&#xC131; &#xBD84;&#xC11D; &#xACB0;&#xACFC;&#xC5D0;&#xC11C; &#xB300;&#xC0C1; &#xC140;&#xC758; () &#xB3C5;&#xB9BD; &#xC5F4;&#xAC70; &#xBC0F; &#xC774;&#xD399;&#xD130;&#xC640; &#xADDC;&#xC81C; T &#xC138;&#xD3EC;&#xC5D0; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC18;&#xC751;&#xC758; (b) &#xB3D9;&#xC2DC; &#xBAA8;&#xB2C8;&#xD130;&#xB9C1; &#xD504;&#xB85C;&#xD1A0;&#xCF5C;&#xC758; &#xD615;&#xD0DC;&#xB85C; &#xC81C;&#xACF5; &#xB429;&#xB2C8;&#xB2E4;.

&#xBA74;&#xC5ED; &#xC138;&#xD3EC; &#xC99D;&#xC2DD; &#xBC0F; cytotoxic &#xC7A0;&#xC7AC;&#xB825; cytometry&#xB97C; &#xC0AC;&#xC6A9; &#xD558; &#xC5EC; &#xCD94;&#xC801; &#xD569;&#xB2C8;&#xB2E4;.

En la segunda edici&oacute;n de esta serie, describimos el uso de tintes en combinaci&oacute;n con reactivos de tetr&aacute;mero y protocolos de fenotipado tradicionales para controlar los niveles de proliferaci&oacute;n y producci&oacute;n de citoquinas en linfocitos T CD8 ant&iacute;geno espec&iacute;ficos de seguimiento de la c&eacute;lula. En particular, nos ilustra c&oacute;mo tinte fluorescencia perfiles de seguimiento podr&iacute;a usarse para determinar las frecuencias de precursor de diferentes subconjuntos en la piscina de c&eacute;lulas T que son capaces de enlazar tetr&aacute;mero, sintetizar citoquinas, someterse a la proliferaci&oacute;n de ant&iacute;geno-conducido o realizar varias combinaciones de estas respuestas funcionales.An&aacute;lisis de respuestas proliferativas ant&iacute;geno-espec&iacute;fica representa s&oacute;lo una de muchas funciones que pueden controlarse utilizando tintes de seguimiento de la c&eacute;lula y citometr&iacute;a de flujo. En esta tercera edici&oacute;n, abordamos cuestiones a considerar cuando se combinan dos tintes de seguimiento diferentes con otros fenot&iacute;pica y sondas de viabilidad para la evaluaci&oacute;n de la actividad citot&oacute;xica efectoras y funciones de c&eacute;lulas T reguladoras. Resumimos las caracter&iacute;sticas clave de y diferencias entre tintes general prote&iacute;na y membrana-etiquetado, discutir la determinaci&oacute;n de las concentraciones &oacute;ptimas de tinci&oacute;n y proporcionar protocolos detallados de etiquetado para ambos tipos de tinte. Ejemplos de las ventajas del seguimiento de la c&eacute;lula de dos colores se encuentran en forma de protocolos de enumeraci&oacute;n (a) independiente de viable efectoras y c&eacute;lulas diana en un ensayo de citotoxicidad directa y seguimiento (b) simult&aacute;nea de respuestas proliferativas en efectoras y c&eacute;lulas T reguladoras.

Katharine A. Muirhead

SciGro, Inc.

Optimized Staining and Proliferation Modeling Methods for Cell Division Monitoring using Cell Tracking Dyes