Bereitstellung einer sinnvollen Umweltanreicherung und Messung von Speichel-Cortisol in Schweinen, die auf Lattenrost untergebracht sind

Zusammenfassung

Dieses Protokoll zeigt, wie schweinen, die in den verschiedenen Lebensphasen auf Lattenrostgehalten untergebracht sind, eine praktische sinnvolle Umweltanreicherung bietet und wie Speichelproben auf nicht-invasive Weise für die Messung von Cortisolkonzentrationen als Biomarker für akuten Stress.

Zusammenfassung

Da Schweinefleisch weltweit das am meisten konsumierte Fleisch ist, ist das Wohlergehen der Tiere in der Schweineindustrie zunehmend zu einem wichtigen öffentlichen Anliegen geworden, was einen erheblichen Druck von Kunden, Gesetzgebern und anderen Interessenträgern aussetzt, die Verwaltung zu ändern. das Wohlbefinden dieser Tiere zu verbessern. Mehrere Studien haben gezeigt, dass die Bereitstellung von Umweltanreicherung für Schweine es ihnen ermöglicht, ihr natürliches Verhalten auszudrücken, wie Zwiet Verwurzelung und Erkundung, sowie Nisten vor dem Abschrotten, und ist mit reduziertem Stress und verbesserter Produktion verbunden. und Wohlfahrt. Bei der Umweltanreicherung, wie z. B. der Art der Boden-, Entwässerungs- und Abwassersysteme, des Lebensstadiums der Schweine, des Materials sowie der hängemethode, der Höhe und der Lage innerhalb des Stifts sollten jedoch viele Überlegungen berücksichtigt werden. Ziel dieses Papiers ist es, (1) methodische Informationen darüber zu geben, wie Schweine, die in den verschiedenen Lebensphasen auf Lattenrosten untergebracht sind, eine relativ einfache und praktische sinnvolle Umweltanreicherung bieten können, und (2) zeigen, wie Speichelproben zur Messung von Cortisolkonzentrationen als Biomarker für akuten Stress gesammelt werden. Die Protokolle enthalten Informationen über die Verwendung von Jute, Baumwollseilen, Stroh in Regalen sowie kaubaren Silikonstäben als Umweltanreicherung in Stiften von Farrowing und Laktation, Entwöhnern und Finishern. Darüber hinaus wird die Verwendung von Baumwollseilen für eine nicht-invasive Speichelprobensammlung für die Cortisolkonzentrationsanalyse detailliert beschrieben. Die vorgelegten Protokolle sind für Fachleute relevant, die darauf abzielen, den Tierschutz sowohl in der Forschung als auch in der industriellen Schweinehaltung zu verbessern und zu überwachen.

Einleitung

Schweinefleisch ist das weltweit am meisten konsumierte Fleisch, wobei jährlich über 1,3 Milliarden Schweine aufgezogen und geschlachtet werden^1,2. In den letzten Jahren ist das Wohlergehen der Tiere in der Schweineindustrie zunehmend zu einem wichtigen öffentlichen Anliegen geworden, das von Kunden, Gesetzgebern und anderen Interessenträgern erheblichen Druck aussetzt, das Management zu ändern, um das Wohlergehen der diese Tiere. Mehrere Studien zeigten, dass die Ökologische Anreicherung von Schweinen mit reduziertem Stress und verbesserter Produktion und Wohlbefinden verbunden ist, da es den Schweinen ermöglicht, ihr natürliches Verhalten, wie Zwiet, das Verwurzeln und Erforschen, sowie das Nisten vor Farrowing^3,4,5,6,7.

Schweine gelten als intelligente Tiere und haben eine sehr neugierige Natur; Wenn also keine geeignete Umgebung vorgesehen ist, zeigen Schweine wahrscheinlich stereotypes Verhalten und direktes manipulatives Sozialverhalten gegenüber Stiftgefährten, was zu Schwanzbissen sowie anderen Verletzungen und^Stress8^,9führen kann. Daher wird die Bereitstellung einer sinnvollen Umweltanreicherung von Fachleuten empfohlen, und in einigen Ländern sogar durch Verordnungen und Rechtsvorschriften, wie die Richtlinie 2008/120/EG 5 des Europäischen^Rates,auferlegt.

Die Bereitstellung einer sinnvollen Umweltanreicherung kann eine Herausforderung darstellen; es sollte die natürlichen Verhaltensbedürfnisse der Schweine in jeder Phase ihres Lebens erfüllen und praktische und technische Einschränkungen berücksichtigen. Vor dem Farrowing ist die Bereitstellung von Nistmaterial mit einer kürzeren Farrowing-Dauer sowie einer höheren Überlebensrate der neugeborenen Ferkel während des Farrowings und während der gesamten Stillzeit verbunden. Darüber hinaus wird in freien Stiften mit Umweltanreicherung das mütterliche Verhalten verbessert, sowie die kognitive Leistungsfähigkeit und Gewichtszunahme der Ferkel^{3,10,11,12,13}. Nach der Entwöhnung kann das Gruppieren von Schweinen (Entwöhnern, Wachsenden oder Finishern) aus verschiedenen Würfen oder Stiften stressig sein und aggressiv gegenüber anderen Stiftsverwandten verursachen, was zu Verletzungen^14,15führen kann. Daher kann die Bereitstellung einer sinnvollen Umweltanreicherung beim Mischen unbekannter Schweine potenziell das Auftreten unerwünschten Verhaltens reduzieren, das aus Frustration und Aggressivität oder Umleitung des Verwurzelungsverhaltens resultiert.

Gemäß der Richtlinie 2008/120/EG des Rates der Europäischen Union (2001/93/EG) ist es erforderlich, dass Schweine dauerhaften Zugang zu einer ausreichenden Menge an Material haben, um ordnungsgemäße Untersuchungs- und Manipulationstätigkeiten wie Stroh, Heu, Holz, Sägemehl, Pilzkompost, Torf oder eine Mischung aus diesen^5,6. Die Verwendung dieser Materialien kann jedoch auf vielen Landwirtschaftlichen unüberschaubar sein, da sie zu einer Verstopfung der Entwässerungs- und Abwassersysteme führen kann, insbesondere in Betrieben mit Lattenrost. Dennoch können Landwirte gemäß der EU-Richtlinie alternative Anreicherungsmaterialien bereitstellen, solange sie es den Schweinen ermöglichen, ordnungsgemäße Untersuchungs- und Manipulationstätigkeiten durchzuführen.

Mangelnde Anreicherung der Umwelt kann möglicherweise zu Frustration und Stress führen³, die die hypothalamische Hypophyse Nebennieren (HPA) Achse aktivieren kann. Bei Schweinen, sowie bei Menschen und anderen Tieren, Stress führt in der Regel zur Sekretion von adrenocorticotropen Hormon (ACTH) aus der Hypophyse. ACTH bindet an seine Rezeptoren an der Nebennierenrinde und stimuliert die Nebennierenfreisetzung des Glukokortikoids Cortisol, das als wichtiger Biomarker für Stress gilt und in Blut, Urin, Speichel und Haar gemessen werden kann. Speichelcortisol ist ein Marker für akuten Stress, da es seine biologisch aktive Konzentration im Blut reflektiert⁴. Es hat den Vorteil einer nicht-invasiven Probenentnahme, ohne Umgang mit den Tieren, mit Hilfe von Baumwollseilen, die als Umweltanreicherung bereitgestellt werden^16,17. Haarcortisol wird als Marker für chronischen Stress verwendet, da Cortisol im Laufe der Zeit im Haar ansammelt und extrahiert und gemessen werden kann^18,19; jedoch erfordert es die Handhabung von Tieren, die Anzahl der wiederholten Probenahmen wird durch die Haarwachstumsrate begrenzt, und die Analyse ist umständlicher, da sie einen langen Extraktionsprozess erfordert. Dennoch können sowohl Speichel als auch Haarcortisol ergänzende Informationen für den Tierschutz liefern.

Ziel dieses Papiers ist es, methodische Informationen darüber zu liefern, wie Schweine, die in verschiedenen Lebensphasen auf Lattenrost untergebracht sind(Farrowing und Stillen, Entwöhner zu Finishern) und (2) zu demonstrieren, wie man nicht-invasiv Speichelproben für die Messung von Cortisolkonzentrationen sammelt, als Biomarker für akuten Stress.

Protokoll

Das Studienprotokoll wurde vom Institutional Animal Care and Use Committee der Hebräischen Universität (MD-16-14754-2) ethisch genehmigt. Die Studie wurde 2017 am Lahav Animal Research Institute und der Hebräischen Universität Jerusalem, Israel, durchgeführt.

1. Umweltanreicherungsprotokoll während der Wartezeit und Der Stillzeit

ANMERKUNG: In dieser Studie wurden Sauen in Farrowing-/Laktationsstiften untergebracht, die für eine begrenzte Zeit von 3-5 Tagen vor dem erwarteten Abflugdatum und bis zu 10 Tagen nach dem Abschleppen zurückgehalten wurden; danach wurden die Einfangstäbe entfernt, um den freien Verkehr und die Interaktion zwischen der Sau und ihren Ferkeln zu ermöglichen (siehe Abbildung 1A). Das folgende Protokoll eignet sich jedoch auch für herkömmliche Farrowing-Kisten, in denen die Sau über die gesamte Laktationszeit zurückgehalten wird.

1. Hängen Sie die Anreicherungsmaterialien (Jute- und Baumwollseile) in den Farrowing-Stift, bevor die Sau hineingezogen wird, um das nistenartige Verhalten der Sauen vor dem Farrowing zu ermöglichen.
2. Für jeden Farrowing-Stift/Kiste zwei Jutestücke (20 cm breit, ein Meter lang) und zwei Stücke mit 100% natürlichen, ungefärbten Baumwollseilen (2-3 cm Durchmesser), jeweils etwa einen Meter lang, zubereiten.
3. Binden Sie die Jute- und Baumwollseile (doppelter Handknoten) an die Stifte/Kistenstangen, wie in Abbildung 1dargestellt, von der Mitte aus, so dass die beiden freien Enden jedes Stücks zum Boden gehängt werden können. Die Höhe der Jute- und Baumwollseile sollte nur niedriger sein als die Schulter der Sauen, während ihre freien Enden knapp über dem Boden liegen(Abbildung 1B-C).
4. Sauen interessieren sich typischerweise für Jute- und Baumwollseile; sie ziehen und kauen es oft. Ersetzen oder nachfüllen Sie daher Materialien, wenn sie verschmutzt oder fertig sind.
   HINWEIS: In dieser Studie wurden Materialien alle 4-5 Tage überprüft und bei Bedarf ersetzt oder wieder aufgefüllt.
5. Nach der Geburt der Ferkel die Jute- und Baumwollseile aufhängen, damit sie sowohl für die Sau als auch für ihre Ferkel an einem sicheren Ort erreichbar sind. In der Regel, wenn die Materialien für beide erreichbar sind, nachahmern Ferkel ihre Muttern von einem sehr frühen Alter.
   HINWEIS: Zusätzlich kann geschreddertes Papier auch als Umweltanreicherung für die Farrowing-Sauen und Ferkel auf Lattenrost bereitgestellt werden. Die Verträglichkeit der Entwässerungs- und Abwassersysteme sollte jedoch im jeweiligen Betrieb kritisch geprüft werden.

2. Umweltanreicherungsprotokoll für Entwöhner (wenn Stroh nicht geliefert werden kann)

HINWEIS: In dieser Studie wurden nach der Entwöhnung alle zwei Würfe in einem Stift von Entwöhnern gruppiert. Optimalerweise sollten Gruppen bis zur Schlachtung statisch bleiben, ohne neue Stiftgefährten in den Stift zu mischen oder einzuführen, um hierarchiebezogene Kämpfe und Verletzungen zu vermeiden. Die Platzzulage im Gehege war gemäß der Richtlinie 2008/120/EG des Europäischen Rates und den israelischen Rechtsvorschriften mit etwa 20 Schweinen pro Gruppe und 0,3^m2 freier Bodenfläche pro Schwein vorgesehen. Aus technischen Gründen konnte Stroh nicht für Entwöhner bereitgestellt werden, auch nicht in Regalen. Wenn Stroh zur Verfügung gestellt werden kann, verwenden Sie das Finisher-Protokoll von der Entwöhnung bis zur Schlachtung, wie in Protokollabschnitt 3 beschrieben.

1. Für jeden Stift, bereiten Sie einen Meter lange Stücke von 100% natürlichen, ungefärbten Baumwollseilen, 2-3 cm Im Durchmesser; mindestens ein Stück pro 10 Schweine. Binden Sie die Baumwollseile an eine Kette, die von der Decke oder an einen hängenden Pfahl gehängt (um sie von der Wand zu distanzieren), wie in Abbildung 2Bgezeigt.
   1. Positionieren Sie die Seile vorzugsweise in der Mitte des "aktiven" Bereichs des Stifts, in der Nähe des Zubringers und der Trinker, und weit von der Stiftwand (wie in Abbildung 2A) gekennzeichnet, um einen 360°-Zugang zu ermöglichen, der aggressives Verhalten aufgrund von wettkampf.
2. Hängen Sie die Seile in einer Höhe, die es den Schweinen ermöglicht, sie mit dem Mund leicht zu erreichen. In der Regel sollte der Knoten niedriger sein als die Schulter der Schweine, während die freien Enden der Seile direkt über dem Boden liegen sollten, ohne ihn zu berühren (Abbildung 2).
3. Seile ersetzen oder nachfüllen, wenn sie verschmutzt oder fertig sind.
   HINWEIS: In dieser Studie wurden Materialien alle 4-5 Tage überprüft und bei Bedarf ersetzt oder wieder aufgefüllt.
4. Zusätzlich zu den Baumwollseilen, bieten Kausilikonstäbe oder ähnliche Kaugeräte (Abbildung 2). Das verwendete Gerät (siehe Materialtabelle) enthält vier Kaustäbe, mit denen mindestens vier Schweine gleichzeitig mit dem Gerät interagieren können. Stellen Sie ein Gerät für 10 bis 15 Schweine zur Verfügung.
5. Hängen Sie das Kaugerät mit einer Kette von der Decke (im Kit enthalten), um das Gerät schwingenbewegung zu ermöglichen; dies erhöht die Aktivität und Herausforderung für die Schweine und ermöglicht auch mehr Schweine auf einmal teilnehmen.
   1. Positionieren Sie das Gerät in der Mitte des aktiven Bereichs des Stifts, weit von den Wänden des Stifts entfernt, um 360° Zugriff zu ermöglichen, was aggressives Verhalten aufgrund von Wettbewerb verhindern soll. Das Ende der Silikonstäbe sollte in einer Höhe von 10 bis 20 cm über dem Boden liegen.
6. Wechseln Sie die Silikonstäbe, wenn sie fertig oder verschmutzt sind.
   HINWEIS: In dieser Studie müssen Silikonstäbe nur gewechselt werden, wenn sie von den Stiften der Entwöhner in die Stifte der Finisher verschoben werden.

3. Umweltanreicherungsprotokoll für Finisher

HINWEIS: Wenn Stroh während des gesamten Zeitraums zur Verfügung gestellt werden kann, beginnen Sie, dieses Protokoll von der Entwöhnung bis zur Schlachtung zu verwenden, anstatt nur in den Stiften der Finisher.

1. Stellen Sie jeden Stift mit Stroh in einem Regal, in einem aufgehängten Netz oder in einem Turm zur Verfügung, wie in Abbildung 2Cdargestellt. Wenn in solchen Geräten zur Verfügung gestellt, sind nur kleine Mengen des Strohs für die Schweine auf einer Zeit zur Verfügung, und der größte Teil davon wird gekaut. Daher kann diese Anreicherung auf Lattenrostböden verwendet werden, wenn Stroh nicht als Bettzeug zur Verfügung gestellt werden kann.
   HINWEIS: In dieser Studie wurde Stroh in kommerziellen Regalen geliefert (Abbildung 2C).
2. Hängen Sie die Strohregale in einer Höhe, die für alle Schweine erreichbar ist, in der Regel knapp unterhalb der Schulterebene. Befestigen Sie sie an der Wand mit dem einfachsten Zugang für so viele Schweine wie möglich, vorzugsweise innerhalb des "aktiven Bereichs". Stellen Sie sicher, dass die Racks ordnungsgemäß und sicher an der Wand befestigt sind, um Gerätebruch und Verletzungen zu vermeiden.
3. Stellen Sie sicher, dass die Regale am Anfang vollständig mit Stroh gefüllt sind; eine zusätzliche kleine Menge an frischem Stroh kann alle 1-3 Tage hinzugefügt werden. Alternativ nachfüllen, wenn das Rack leer ist, in der Regel alle 7-10 Tage.
   HINWEIS: Langes Stroh ist besser als gehacktes Stroh, um die Aggressivität in der Gruppe zu reduzieren und die Verhaltensbedürfnisse von Schweinen für die Verwurzelung und Erforschung^{von 20}zu erfüllen.
4. Falls zutreffend, sollten Sie eine Sammelwanne oder eine Matte unter das Rack legen, wenn der Boden vergittert ist, um zu vermeiden, dass Stroh gestreut wird und die Entwässerungs- und Abwassersysteme blockiert wird (Abbildung 2C). Da Stroh für Schweine hauptsächlich zur Erfüllung ihres Verwurzelungs- und Erkundungsverhaltens vorgesehen ist, kann eine Matte das Vorhandensein von freiem Stroh am Boden erkunden.
5. Zusätzlich zum Stroh, bieten Kaugeräte, wie in Abschnitt 2 beschrieben.
6. Wenn Baumwollseile für die Speichelsammlung verwendet werden, wie im nächsten Abschnitt beschrieben, lassen Sie die Seile in den Stiften nach der Speichelsammlung, als zusätzliche Bereicherung. Andere Baumwollseile können ebenfalls zur Verfügung gestellt werden, wie in Abschnitt 2 beschrieben.

4. Speichelprobensammlung zur Cortisolkonzentrationsanalyse

HINWEIS: Dieser Abschnitt enthält Informationen darüber, wie man als Biomarker für akuten Stress nicht-invasiv Speichel für die Cortisolkonzentrationsanalyse sammelt; Speichelproben können jedoch auch zur Analyse anderer Biomarker und sogar zum Screening potenzieller Krankheitserreger verwendet werden. Darüber hinaus sollte Haarcortisol gegebenenfalls gemessen werden.

1. Planen Sie Speichelprobefür die gleiche Zeit des Tages, um Voreingenommenheit zu vermeiden, da sich die Cortisolsekretion im Laufe des Tages aufgrund des physiologischen zirkadianen Rhythmus oder durch Fütterung²¹ändert. Die Probenahme ist in der Regel vor der Fütterung einfacher, vorzugsweise vor der zweiten Fütterung des Tages.
2. Verwenden Sie ungefärbtes, 100% Baumwollseil (2-3 cm Durchmesser). Ein Seil wird in der Regel pro 12-15 Schweine benötigt.
   HINWEIS: In dieser Studie wurden kommerzielle, gebrauchsfertige Kits für die Entnahme von Speichelproben verwendet.
3. Binden Sie das Seil in der Nähe der Mitte des Stiftes, weit weg von der Stiftwand. Stellen Sie sicher, dass die Schnur, die zum Aufhängen (zwischen Baumwollseil und Stange) verwendet wird, nicht zum Kauen durch die Schweine erreichbar ist und dass die freien Enden der Baumwollseile den Boden aus Hygienischen Gründen nicht berühren(Abbildung 3A).
4. Entwirren Sie das freie Ende des Seils, um die verfügbare Kaufläche zu erhöhen (Abbildung 3B).
5. Lassen Sie das Seil für 15-30 min hängen. Typischerweise interessieren sich Schweine für neu bereitgestellte Seile und würden es während dieser Zeit kauen. Typischerweise nähert sich die überwiegende Mehrheit der Schweine dem Seil.
6. Um den Speichel aus dem Seil zu extrahieren, legen Sie den freien Teil des Seils in eine sterile Plastiktüte (wie in Abbildung 3Ddargestellt) und drücken Sie das Seil, indem Sie Druck von der Außenseite des Beutels, von oben nach unten, bis genügend Flüssigkeit (vorgeschlagen bei mindestens 2 ml) akkumuliert sich an der Unterseite des Beutels (Abbildung 3E), und entfernt dann das Seil aus dem Beutel.
   HINWEIS: In dieser Studie wurde eine 30 cm x 40 cm Tasche im Kit enthalten. Wenn möglich, sollte dieser Schritt im Stift durchgeführt werden, ohne die hängende Schnur zu schneiden. Auf diese Weise ist die Speichelextraktion in der Regel einfacher, und die Seile können als Bereicherung im Stift gelassen werden. Wenn nicht genügend Speichel vorhanden ist, kann ein Ringer verwendet werden (war in dieser Studie nicht erforderlich).
7. Um den Speichel aus dem Beutel in ein steriles Rohr zu geben, ziehen Sie das Seil heraus und schneiden Sie vorsichtig die untere Ecke des Beutels über einem 50 ml sterilen Kunststoffrohr (obwohl in der Regel nur 400 l für jede Analyse in Duplikaten benötigt werden, werden mindestens 2 ml für collectio empfohlen. n; Abbildung 3F). Versiegeln Sie das Rohr und markieren Sie es mit einem permanenten Marker oder einem vorgefertigten Aufkleber (Tiere/Stift, Datum, Uhrzeit, Bauernhof usw.).
8. Speichern Sie Speichelproben in einem isolierten Behälter mit Eispackungen, bis sie ins Labor geliefert werden.
9. Im Labor zentrifugieren Speichelproben, bis Schmutz abgetrennt werden kann (für 8 min bei 3000 x g). Der saubere Speichel sollte mit einer sauberen Einweg-Pasteur-Pipette in vormarkierte sterile Rohre mit kleinerem Volumen (z.B. 2 ml Schraubverschluss-Gefrierrohre) übertragen werden. Proben können sofort analysiert oder bis zur Analyse bei einer Temperatur von -20 °C oder darunter eingefroren gehalten werden.
10. Vor der Cortisolkonzentrationsanalyse sollte die Identität der relevanten Proben bestätigt und Proben bei Raumtemperatur aufgetaut werden, wenn sie eingefroren sind. Mischen Sie jede Probe vorsichtig, und zentrieren Sie sie dann vor der Analyse erneut, um mögliche übrig gebliebene Schmutzzufuhr zu entfernen, die den Test stören kann (8 min bei 3000 x g).
11. Führen Sie Cortisolkonzentrationsanalysen mit einem validierten Test gemäß dem spezifischen Kit-Protokoll durch.
    HINWEIS: In dieser Studie wurden Speichelcortisolproben in Duplikaten durch enzymgebundenen Immunsorbent-Assay gemäß den Herstellerrichtlinien gemessen. Für Schweine, die zuvor mit Seilen als Anreicherung versorgt wurden, wäre das Sammeln von Speichel sehr einfach, da Schweine großes Interesse an den Seilen zeigen. Für Schweine, die mit den Seilen nicht vertraut sind, kann es jedoch einige Zeit dauern, bis sie trainiert werden können; Daher ist das Sammeln von adäquaten Speichel möglicherweise nicht vom ersten Mal an möglich. Bei Bedarf können Seile zum Training in Apfelsaft eingeweicht werden (in diesem Fall kann speichelnatürlich nicht für die Analyse verwendet werden). Wenn Speichelproben von einzeln untergebrachten Schweinen benötigt werden, kann die Sammlung schwieriger sein als aus einer Gruppe, und Trainingseinheiten mit Apfelsaft-getränkten Seilen sind in der Regel erforderlich. Das Kauen von Sammelseilen kann auch durch stichprobenartig nebeneinander anbetwerdende Personen durch Nachahmung gefördert werden.

Ergebnisse

In der aktuellen Studie wurden 16 Würfe (170 Ferkel) nach dem Zufallsprinzip in zwei Behandlungsgruppen eingeteilt; in einer Gruppe wurde die Umweltanreicherung acht Würfen ("Enriched Group", wie in protokollierten Abschnitten 1-3 beschrieben), während sie den anderen acht Würfen nicht zur Verfügung gestellt wurde ("Nicht angereicherte Gruppe"). Nach der Entwöhnung wurden jeweils zwei Würfe in eine Gruppe von etwa 20 Schweinen gruppiert. Speichelproben wurden alle zwei Wochen in je...

Diskussion

Hierin beschreiben wir Protokolle, in denen detailliert beschrieben wird, wie Schweine, die in verschiedenen Lebensphasen auf Lattenrost untergebracht sind, einfach und praktisch anreichern können und wie Speichelproben für die Messung von Cortisol nicht-invasiv gesammelt werden können. Konzentrationen als Biomarker für akuten Stress. Stroh als Bettzeug gilt als eine der am besten geeigneten Umweltanreicherung für Schweine, kann aber auf Lattenrostböden unpraktisch sein. Relativ preiswerte Alternativen wie Jute, Ba...

Materialien

Name	Company	Catalog Number	Comments
Bite-Rite	Ikadan System USA Inc.		Consider ordering additional replaceable silicone sticks
ELISA; Saliva Cortisol Kit	DRG International Inc. NJ, USA	Slv2930
HALM 60/80 CM	W. Domino A/S, DK	49084/ 85
TEGO Swine Oral Fluids Kit	ITL BioMedical, USA	A100930	Including everything needed for the saliva sampling protcol