Beginnen Sie das Protokoll mit der Vorbereitung des viskosen Fließmediums für den Schertest. Dazu werden die Basisnährmedien mit einem Magnetrührer oder einer Heizplatte etwa 10 bis 20 Minuten lang auf 60 bis 70 Grad Celsius vorgeheizt. Fügen Sie unter ständigem Rühren des Mediums vorsichtig Methylcellulose hinzu, damit sich die Methylcellulosepartikel schnell verteilen können, ohne zu koagulieren.
Lassen Sie diesen Prozess etwa 15 bis 24 Stunden einwirken, um eine klare, homogene Mischung aus Medien und Zellulose zu gewährleisten. Um den Scherapparat einzurichten, wird eine Gummidichtung am Strömungsweg angebracht, um die Verbindung zwischen der Strömungskammer und der Petrischale zu befestigen und einen kontrollierten, gleichmäßigen Fluss der einzelnen Zellen zu gewährleisten. Die Gummidichtung gibt es in verschiedenen Größen, je nach gewünschtem Strömungsprofil und Beobachtungsbereich.
Richten Sie als Nächstes das Scherprobensystem ein, das aus 60- oder 100-Milliliter-Doppelspritzen besteht, die an eine programmierbare Spritzenpumpe für die Infusion und Entnahme der viskosen Nährmedien angeschlossen sind. Füllen Sie eine Spritze mit den vorbereiteten viskosen Fließmedien und befestigen Sie die befüllte Spritze an der entsprechenden Stelle an der Spritzenpumpe. Befestigen Sie dann eine leere Spritze an der anderen Spritzenposition an der Spritzenpumpe.
Verbinden Sie beide Spritzen mit 1/16-Zoll-Schläuchen und Schlauchverbindern mit der Durchflusskammer. Programmieren Sie die Pumpe so, dass sie ein bestimmtes Flüssigkeitsvolumen mit einer bestimmten Geschwindigkeit ein- und ausführt, und wählen Sie die entsprechenden Spritzen aus. Auf dem Bildschirm wird ein Beispielprogramm angezeigt.
Aspirieren Sie die Zellkulturmedien aus der Petrischale, um sie für die Scherung vorzubereiten. Setzen Sie anschließend die Durchflusskammer mit der Gummidichtung ein und befestigen Sie sie auf der Petrischale, in der sich die angebrachten Zellen befinden. Setzen Sie die eingebaute mikrofluidische Durchflusskammer mit den Zellen in der Schale auf ein inverses Mikroskop, das an einen Monitor angeschlossen ist.
Der Aufbau ist nun bereit, eine einzelne Zelle durch Flüssigkeitsscherspannung zu belasten und die daraus resultierende zelluläre Verformung optisch zu überwachen.
