Diese Arbeit wurde vom Ministerium für Wissenschaft und Technologie der Provinz Sichuan unterstützt (2021YJ0175).

Das Versuchsprotokoll und die Verfahren wurden vom Verwaltungs- und Tierforschungsausschuss der Chengdu University of Traditional Chinese Medicine genehmigt (Datensatznummer: 2022DL-010). Acht Wochen alte männliche Sprague Dawley (SD)-Ratten mit einem Gewicht von 180-200 g wurden kommerziell gewonnen (siehe Materialtabelle) und unter einem natürlichen Hell-Dunkel-Zyklus mit kontrollierter Temperatur (23 ± 2 °C) und relativer Luftfeuchtigkeit (55 % ± 10 %) gehalten. Zwölf Ratten wurden nach dem Zufallsprinzip in zwei Gruppen eingeteilt: die Kontrollgruppe und die AR-Gruppe. Alle Ratten wurden an diese Bedingungen gewöhnt und erhielten vor dem Versuch eine Woche lang freien Zugang zu Futter und Wasser.
1. Etablierung eines Rattenmodells der AR
<ol><li>Herstellung der sensibilisierenden Lösung: 30 mg Ovalbumin (OVA) und 3 g Al(OH)3 in 100 ml Kochsalzlösung suspendieren (siehe Materialtabelle)14,15.</li>
	<li>Grundlegende Sensibilisierung: Fassen und halten Sie die voll wache Ratte mit dem Bauch nach oben. Desinfizieren Sie den Bauch mit 75% alkoholgetränkten Wattebäuschen. Verwenden Sie eine 1,5-ml-Spritze, um 1 ml der in Schritt 1.1 hergestellten sensibilisierenden Lösung in die linke Bauchhöhle der Ratten in der AR-Gruppe zu injizieren. Wiederholen Sie diese Injektion 14 Tage lang einmal alle zwei Tage (Abbildung 1A). HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Kopf der Ratte tiefer als ihr Schwanz positioniert ist, um Schäden am Dick- und Dünndarm beim Einführen der Spritze zu vermeiden. Die Injektionsstelle befindet sich 1,5 cm von der ventralen Mittellinie entfernt. Ratten in der Kontrollgruppe sollten 14 Tage lang alle zwei Tage intraperitoneale Injektionen von 1 ml normaler Kochsalzlösung erhalten.</li>
	<li>Nasale Provokation: Verabreichen Sie 50 μl 5%ige OVA über Nasentropfen mit einer 100-μl-Pipette (Abbildung 1B) am Tag nach der basalen Sensibilisierung und wiederholen Sie diesen Vorgang 7 Tage lang (Abbildung 1C). HINWEIS: Bereiten Sie die 5%ige OVA-Lösung vor, indem Sie 5 g OVA mit 100 ml Kochsalzlösung mischen. Verabreichen Sie der Kontrollgruppe Tropfen des gleichen Volumens Kochsalzlösung.</li>
</ol>2. Verhaltens-Scoring von Ratten
<ol><li>Beobachten und zeichnen Sie die Ratten innerhalb von 30 Minuten nach Abschluss der letzten nasalen Herausforderung mit einer Digitalkamera auf, um Symptome wie Nasenkratzen, Niesen und eine laufende Nase basierend auf den in Tabelle 1 (Abbildung 1D) beschriebenen Bewertungskriterien zu identifizieren. HINWEIS: Die Bestätigung einer erfolgreichen AR-Modellierung basiert auf dem Erreichen einer Gesamtpunktzahl von ≥5 Punkten14.</li>
</ol>3. Entnahme von Nasenschleimhautproben
<ol><li>Ratten opfern: Opfern Sie die Ratten, indem Sie sie einer Überdosis CO2 aussetzen. Desinfizieren Sie die Ratten anschließend mit 75%igem Ethanol (siehe Materialtabelle). Verwenden Sie ein Skalpell, um einen Schnitt entlang der beiden Mundwinkel zu machen, um das Muskelgewebe freizulegen (Abbildung 2A). Als nächstes werden die Gelenke des Jochbeins und des Unterkiefers auf beiden Seiten des Schädels mit einer Gewebeschere durchtrennt (Abbildung 2B) und der Unterkiefer entfernt (Abbildung 2C).</li>
	<li>Freilegung der Nasenhöhle: Trennen Sie die Haut des Oberkiefers mit einem Hämostat (Abbildung 2D) ab, um die Nasenhöhle freizulegen (Abbildung 2E). Durchtrennen Sie die knöcherne Verbindung zwischen Nasenhöhle und Oberkiefer mit einer Gewebeschere (Abbildung 2F). Dann wird die Verbindung zwischen der Nasenhöhle und den Augenhöhlen beidseits am Foramen infraorbitalis durchtrennt (Abbildung 2G) und die Nasenhöhle entfernt (Abbildung 2H).</li>
	<li>Fixierung: Die extrahierte Nasenhöhle wird zur Fixierung in 4% Paraformaldehyd gelegt und 24-72 h bei Raumtemperatur gelagert (siehe Materialtabelle). HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass die Menge des verwendeten Paraformaldehyd-Fixiermittels ausreicht, um die Abschnitte für eine ordnungsgemäße Fixierung vollständig zu bedecken.</li>
</ol>4. Vorverarbeitung von Nasenschleimhautproben
<ol><li>Entkalkung: Beginnen Sie mit der Fixierung des entfernten Gewebes aus Schritt 3.1. Waschen Sie sie dreimal mit PBS für jeweils 20 Minuten. Waschen Sie sie anschließend dreimal mit destilliertem Wasser, jeweils 20 Minuten lang. Anschließend wird das Gewebe in einer Entkalkungslösung mit einem Volumen von 20-30 mal so groß wie das Gewebe bei Raumtemperatur entkalkt.<ol><li>Die Entkalkungslösung (siehe Materialtabelle) sollte einen pH-Wert von 7,2-7,4 aufweisen. Zum Schluss legen Sie das entkalzte Gewebe in eine Dehydrierbox. HINWEIS: Die Entkalkungslösung muss wöchentlich gewechselt werden. Der Entkalkungsprozess kann abgeschlossen werden, wenn das Gewebe weicher wird (ca. 2 Monate).</li>
	</ol></li>
	<li>Dehydrierung und Waxing: Füllen Sie die Dörrbox in einen Dörrautomat (siehe Materialtabelle). Beginnen Sie mit 75 % Alkohol für 4 Stunden, gefolgt von 85 % Alkohol für 2 Stunden, 90 % Alkohol für 2 Stunden und 95 % Alkohol für 1 Stunde.<ol><li>Tauchen Sie anschließend das Gewebe für 30 Minuten in wasserfreies Ethanol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 30 Minuten, verwenden Sie Xylol für 5-10 Minuten, wiederholen Sie diesen Schritt für weitere 5-10 Minuten, tauchen Sie das Gewebe 1 Stunde lang in Wachs, wiederholen Sie diesen Schritt für eine weitere Stunde und tauchen Sie das Gewebe schließlich für weitere 1 Stunde in Wachs.</li>
	</ol></li>
	<li>Einbetten: Legen Sie den geschmolzenen Wachsblock in die Einbettbox (siehe Materialtabelle) und lagern Sie ihn in einem Gefrierschrank bei -20 °C. Sobald sich das Wachs verfestigt hat, entferne es und schneide den Wachsblock ab.</li>
	<li>Schneiden: Den getrimmten Wachsblock in ein Paraffinmikrotom (siehe Materialtabelle) stecken und in 3 μm dicke Scheiben schneiden. Die Scheiben in ein 40 °C warmes Wasserbad auf einen Objektträgerstreuer legen. Das Tuch flach drücken, dann mit einem Objektträger anheben und bei 60 °C backen.<ol><li>Nachdem das Wasser verdunstet ist und das Wachs richtig ausgehärtet ist, entfernen Sie die Objektträger und lagern Sie sie bei einer Temperatur von 25 °C.</li>
	</ol></li>
</ol>5. H&E-Färbung von Nasenschleimhautgewebe
<ol><li>Entwachsung und Hydratation: Legen Sie die Scheiben für 20 Minuten in Xylol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 20 Minuten, absolutes Ethanol für 5 Minuten, wiederholen Sie diesen Schritt für weitere 5 Minuten, 75% Alkohol für 5 Minuten und waschen Sie schließlich 5 Minuten lang.</li>
	<li>Hämatoxylin-Färbung: 100 μl Hämatoxylin-Färbelösung (siehe Materialtabelle) für 3-5 Minuten mit einer 100-μl-Pipette abgeben, 5-10 s lang spülen, 100 μl 0,5%iges Salzsäure-Ethanol für 10-30 s hinzufügen, 5-10 s spülen, 100 μl 0,2%iges Ammoniakwasser für 10-30 s hinzufügen und 30 s lang spülen. HINWEIS: Nach der Hämatoxylin-Färbung ist eine Differenzierung mit 0,5% Salzsäure-Ethanol erforderlich, um überschüssigen Hämatoxylin-Farbstoff zu entfernen, der an den Zellkern gebunden und vom Zytoplasma absorbiert wird. Wenn eine Eosin-Färbung durchgeführt wird, werden die Zellkerne und das Zytoplasma deutlich gefärbt. Die Scheiben erscheinen nach der Differenzierung mit 0,5%igem Salzsäure-Ethanol rot oder rosa, also spülen Sie sofort nach der Differenzierung ab, um die Säure aus den Gewebeschnitten zu entfernen und die Differenzierung zu stoppen. Verwenden Sie dann 0,2 % Ammoniakwasser, um die Kernfärbung zu verbessern.</li>
	<li>Eosin-Färbung: Verwenden Sie eine 100-μl-Pipette, um 100 μl Eosin-Färbelösung (siehe Materialtabelle) für 5 Minuten zu dosieren und 30 s lang zu spülen.</li>
	<li>Dehydrierung und Versiegelung: Tauchen Sie die Scheiben 5 Minuten lang in absolutes Ethanol, wiederholen Sie den Vorgang für weitere 5 Minuten, wiederholen Sie den Vorgang noch einmal für 5 Minuten, Dimethyl für 5 Minuten und Xylol für 5 Minuten. Zum Schluss mit Neutralharz abdichten (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Platzieren des gefärbten Schnitts auf dem Mikroskop: Positionieren Sie den gefärbten Bereich auf dem Mikroskop, stellen Sie den Fokus des Mikroskops ein, bis das Bild deutlich sichtbar ist, stellen Sie die Vergrößerung auf 40x ein und nehmen Sie das Bild auf.</li>
</ol>6. Mehrfarbige Immunfärbung von Nasenschleimhautgewebe
<ol><li>Entwachsung und Hydratation: Befolgen Sie die Anweisungen in Schritt 5.1.</li>
	<li>Citrat-Phosphat-Puffer-Behandlung: Citrat-Phosphat-Puffer (pH 6,0) (siehe Materialtabelle) in einen mikrowellengeeigneten Behälter geben. Erhitzen Sie es, bis es kocht, nehmen Sie es heraus und geben Sie dann die Objektträger in den Behälter. 8 Minuten lang bei mittlerer Hitze in der Mikrowelle erhitzen, bis sie kochen, den Herd für 8 Minuten ausschalten und dann für 7 Minuten auf mittlere bis niedrige Hitze umschalten.<ol><li>Nach dem natürlichen Abkühlen die Scheiben in PBS (pH 7,4) geben, schütteln und dreimal mit einem Entfärbungsshaker waschen, jeweils 5 Minuten lang. HINWEIS: Stellen Sie sicher, dass der Puffer während dieses Vorgangs nicht verdunstet, und verhindern Sie, dass die Scheiben austrocknen.</li>
	</ol></li>
	<li>Blockieren der endogenen Peroxidase: Trocknen Sie die Scheiben, ziehen Sie mit einem immunhistochemischen Stift einen Kreis um das Gewebe (um zu verhindern, dass der Antikörper wegfließt) und tragen Sie 3%ige Wasserstoffperoxidlösung auf (Wasserstoffperoxid: reines Wasser = 1:9).<ol><li>Bei Raumtemperatur im Dunkeln 15 min inkubieren. Nach dem natürlichen Abkühlen legen Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten.</li>
	</ol></li>
	<li>Blockierung: 5% Ziegenserum innerhalb des Kreises auftragen und 30 Minuten inkubieren.</li>
	<li>Zugabe von Primärantikörpern: Entfernen Sie vorsichtig die blockierende Lösung, geben Sie FOXP3 (Verdünnung: 1:200, siehe Materialtabelle) in die Scheibe und legen Sie sie in eine feuchte Kammer. Über Nacht bei 4 °C inkubieren. HINWEIS: Geben Sie eine kleine Menge Wasser in die feuchte Kammer, um die Verdunstung der Antikörper zu verhindern.</li>
	<li>Zugabe von sekundären Antikörpern: Geben Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten. Trocknen Sie die Scheiben vorsichtig ab und tragen Sie den Sekundärantikörper (Goat Anti-Rabbit IgG H&L, siehe Materialtabelle) innerhalb des Kreises auf. Bei Raumtemperatur 50 Minuten im Dunkeln inkubieren.</li>
	<li>Herstellung der Tyramid-Verdünnungslösung: 100 μl 3 %H2O2mit 100 ml 1x TBST vermischen (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Zugabe von TSA-Arbeitslösung: Mischen Sie 1 ml Tyramid-Verdünnungsmittel mit 2 μl CY3-Tyramid, um die TSA-Arbeitslösung herzustellen. 100 μl TSA-Arbeitslösung auf jede Scheibe geben und bei Raumtemperatur im Dunkeln 10 Minuten lang inkubieren. Waschen Sie die Scheiben dann dreimal mit PBS, jeweils 5 Minuten. HINWEIS: Bereiten Sie die TSA-Arbeitslösung sofort vor, verwenden Sie sie und lagern Sie sie bei 4 °C im Dunkeln. Sie ist bis zu 24 h gültig.</li>
	<li>Wiederholen Sie die Schritte 6.2-6.8: Wechseln Sie zu einer 1:200-Verdünnung von RORγt (FITC-Fluoreszenzfarbstoff) und dann zu einer 1:200-Verdünnung von TICAM1 (TYP620-Farbstoff) (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>DAPI-gegengefärbte Kerne: Schütteln Sie die Scheiben vorsichtig, um sie zu trocknen, tragen Sie DAPI-Färbelösung auf und inkubieren Sie sie 10 Minuten lang bei Raumtemperatur im Dunkeln.</li>
	<li>Autofluoreszenz löschen: Die Scheiben in PBS (pH 7,4) legen und drei Zyklen à 5 Minuten lang auf einem Entfärbungsschüttler schütteln. Den Autofluoreszenzlöscher (siehe Materialtabelle) auf die Scheiben auftragen, 5 Minuten warten und dann 10 Minuten waschen.</li>
	<li>Blockierung: Legen Sie die Scheiben in PBS (pH 7,4) und schütteln Sie sie auf einem Entfärbungsschüttler für drei Zyklen von jeweils 5 Minuten. Schütteln Sie die Scheiben vorsichtig, um sie zu trocknen, und versiegeln Sie sie mit dem Anti-Fluoreszenz-Quencher (siehe Materialtabelle).</li>
	<li>Mikroskopie: Legen Sie den gefärbten Bereich auf das Mikroskop, stellen Sie den Fokus des Mikroskops für eine klare Sicht ein, stellen Sie die Vergrößerung auf 20x und 40x ein und nehmen Sie das Bild auf. HINWEIS: DAPI hat eine UV-Anregungswellenlänge von 330-380 nm und eine Emissionswellenlänge von 420 nm (blaues Licht). FITC hat eine Anregungswellenlänge von 465-495 nm und eine Emissionswellenlänge von 515-555 nm (grünes Licht). CY3 hat eine Anregungswellenlänge von 510-560 nm und eine Emissionswellenlänge von 590 nm (rotes Licht). TYP-690 hat eine Anregungswellenlänge von 630 nm und eine Emissionswellenlänge von 690 nm (rosa Licht).</li>
</ol>

Mehrfarbige Immunfluoreszenz des Nasengewebes in einem allergischen Rhinitis Rattenmodell

<ol>
	<li>Bro&#380;ek, J. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+rhinitis+and+its+impact+on+asthma+(ARIA)+Guidelines-2016+revision.">Allergic rhinitis and its impact on asthma (ARIA) Guidelines-2016 revision.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 140 (4), 950-958 (2017).</li><li>Maurer, M., Zuberbier, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Undertreatment+of+rhinitis+symptoms+in+Europe:+findings+from+a+cross-sectional+questionnaire+survey.">Undertreatment of rhinitis symptoms in Europe: findings from a cross-sectional questionnaire survey.</a> Allergy. 62 (9), 1057-1063 (2007).</li><li>Ding, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Alpha-linolenic+acid+improves+nasal+mucosa+epithelial+barrier+function+in+allergic+rhinitis+by+arresting+CD4++T+cell+differentiation+via+IL-4R&#945;-JAK2-STAT3+pathway.">Alpha-linolenic acid improves nasal mucosa epithelial barrier function in allergic rhinitis by arresting CD4+ T cell differentiation via IL-4R&#945;-JAK2-STAT3 pathway.</a> Phytomedicine: International Journal of Phytotherapy and Phytopharmacology. 116, 154825 (2023).</li><li>Zhou, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Activation+of+NLRP3+inflammasome+contributes+to+the+inflammatory+response+to+allergic+rhinitis+via+macrophage+pyroptosis.">Activation of NLRP3 inflammasome contributes to the inflammatory response to allergic rhinitis via macrophage pyroptosis.</a> International Immunopharmacology. 110, 109012 (2022).</li><li>Watts, A. M., Cripps, A. W., West, N. P., Cox, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Modulation+of+allergic+inflammation+in+the+nasal+mucosa+of+allergic+rhinitis+sufferers+with+topical+pharmaceutical+agents.">Modulation of allergic inflammation in the nasal mucosa of allergic rhinitis sufferers with topical pharmaceutical agents.</a> Frontiers in pharmacology. 10, 294 (2019).</li><li>Patel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Fungal+extracts+stimulate+solitary+chemosensory+cell+expansion+in+noninvasive+fungal+rhinosinusitis.">Fungal extracts stimulate solitary chemosensory cell expansion in noninvasive fungal rhinosinusitis.</a> International Forum of Allergy &amp; Rhinology. 9 (7), 730-737 (2019).</li><li>Granier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tim-3+expression+on+tumor-infiltrating+PD-1(+)CD8(+)+T+cells+correlates+with+poor+clinical+outcome+in+renal+cell+carcinoma.">Tim-3 expression on tumor-infiltrating PD-1(+)CD8(+) T cells correlates with poor clinical outcome in renal cell carcinoma.</a> Cancer Research. 77 (5), 1075-1082 (2017).</li><li>Badoua, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1-ex+pressing+tumor-infiltrating+T+cells+are+a+favorable+prognostic+biomarker+in+HPV-associated+head+and+neck+cancer.">PD-1-ex pressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in HPV-associated head and neck cancer.</a> Cancer Research. 73 (1), 128-138 (2013).</li><li>Fedchenko, N., Reifenrath, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Different+approaches+for+interpretation+and+reporting+of+immunohistochemistry+analysis+results+in+the+bone+tissue+-+a+review.">Different approaches for interpretation and reporting of immunohistochemistry analysis results in the bone tissue - a review.</a> Diagnostic Pathology. 9, 221 (2014).</li><li>Faget, L., Hnasko, T. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tyramide+signal+amplification+for+immunofluorescent+enhancement.">Tyramide signal amplification for immunofluorescent enhancement.</a> Methods in Molecular Biology. 1318, 161-172 (2015).</li><li>Parra, E. R., Villalobos, P., Rodriguez-Canales, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+multiple+faces+of+programmed+cell+death+ligand+1+expression+in+malignant+and+nonmalignant+cells.">The multiple faces of programmed cell death ligand 1 expression in malignant and nonmalignant cells.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology.: AIMM. 27 (4), 287-294 (2019).</li><li>Welsh, A. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Standardization+of+estrogen+receptor+measurement+in+breast+cancer+suggests+false-negative+results+are+a+function+of+threshold+intensity+rather+than+percentage+of+positive+cells.">Standardization of estrogen receptor measurement in breast cancer suggests false-negative results are a function of threshold intensity rather than percentage of positive cells.</a> Journal of Clinical Oncology: Official Journal of the American Society of Clinical Oncology. 29 (22), 2978-2984 (2011).</li><li>Parra, E. R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Validation+of+multiplex+immunofluorescence+panels+using+multispectral+microscopy+for+immune-profiling+of+formalin-fixed+and+paraffin-embedded+human+tumor+tissues.">Validation of multiplex immunofluorescence panels using multispectral microscopy for immune-profiling of formalin-fixed and paraffin-embedded human tumor tissues.</a> Scientific Reports. 7 (1), 13380 (2017).</li><li>Miao, M., Xiang, L., Miao, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Specification+for+preparation+of+allergic+rhinitis+animal+model+(draft).">Specification for preparation of allergic rhinitis animal model (draft).</a> Chinese Traditional and Herbal Drugs. 49 (1), 50-57 (2018).</li><li>Xu, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Astragalus+polysaccharides+attenuate+ovalbumin-induced+allergic+rhinitis+in+rats+by+inhibiting+nlrp3+inflammasome+activation+and+nod2-mediated+nf-+&#954;+b+activation.">Astragalus polysaccharides attenuate ovalbumin-induced allergic rhinitis in rats by inhibiting nlrp3 inflammasome activation and nod2-mediated nf- &#954; b activation.</a> Journal of Medicinal Food. 24 (1), 1-9 (2021).</li><li>Bousquet, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Allergic+rhinitis.">Allergic rhinitis.</a> Nature reviews. 6 (1), 95 (2020).</li><li>Huang, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Expression+of+activated+signal+transducer+and+activator+of+transcription-3+as+a+predictive+and+prognostic+marker+in+advanced+esophageal+squamous+cell+carcinoma.">Expression of activated signal transducer and activator of transcription-3 as a predictive and prognostic marker in advanced esophageal squamous cell carcinoma.</a> World Journal of Surgical Oncology. 13, 314 (2015).</li><li>Leynaert, B., Bousquet, J., Neukirch, C., Liard, R., Neukirch, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Perennial+rhinitis:+An+independent+risk+factor+for+asthma+in+nonatopic+subjects:+results+from+the+European+Community+Respiratory+Health+Survey.">Perennial rhinitis: An independent risk factor for asthma in nonatopic subjects: results from the European Community Respiratory Health Survey.</a> The Journal of Allergy and Clinical Immunology. 104 (2), 301-304 (1999).</li><li>Guerra, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Rhinitis+is+an+independent+risk+factor+for+developing+cough+apart+from+colds+among+adults.">Rhinitis is an independent risk factor for developing cough apart from colds among adults.</a> Allergy. 60 (3), 343-349 (2005).</li><li>Greisner, W. 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I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=The+orphan+nuclear+receptor+ror&#947;t+directs+the+differentiation+program+of+proinflammatory+IL-17++T+helper+cells.">The orphan nuclear receptor ror&#947;t directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+ T helper cells.</a> Cell. 126 (6), 1121-1133 (2006).</li><li>Fontenot, J. D., Gavin, M. A., Rudensky, A. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3+programs+the+development+and+function+of+CD4+CD25++regulatory+T+cells.">Foxp3 programs the development and function of CD4+CD25+ regulatory T cells.</a> Nature Immunology. 4 (4), 330-336 (2003).</li><li>Zhou, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Instability+of+the+transcription+factor+Foxp3+leads+to+the+generation+of+pathogenic+memory+T+cells+in+Vivo.">Instability of the transcription factor Foxp3 leads to the generation of pathogenic memory T cells in Vivo.</a> Nature Immunology. 10 (9), 1000-1007 (2009).</li><li>Ziegler, S. F., Buckner, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Foxp3+and+the+regulation+of+Treg/Th17+differentiation.">Foxp3 and the regulation of Treg/Th17 differentiation.</a> Microbes and Infection. 11 (5), 594-598 (2009).</li><li>Yaling, Y., Gui, Y., Shuqi, Q. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Recent+research+advances+of+toll-like+receptors+and+allergic+rhinitis.">Recent research advances of toll-like receptors and allergic rhinitis.</a> Medical Recapitulate. 23 (7), 1273-1276 (2017).</li><li>Shan, H., Jie, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Correlation+between+TLR4+gene+polymorphisms+and+allergic+rhinitis.">Correlation between TLR4 gene polymorphisms and allergic rhinitis.</a> Journal of Clinical Otorhinolaryngology, Head, and Neck Surgery. 31 (13), 991-994 (2017).</li><li>Xu, O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Immunoregulatory+mechanism+of+Treg+cells+and+TICAM-1+patients+with+severe+allergic+rhinitis.">Immunoregulatory mechanism of Treg cells and TICAM-1 patients with severe allergic rhinitis.</a> Chinese Journal of Coal Industry Medicine. 23 (3), 303-306 (2020).</li><li>Granier, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Tim-3+expression+on+tumor-infiltrating+PD-1+CD8++T+cells+correlates+with+poor+clinical+outcome+in+renal+cell+carcinoma.">Tim-3 expression on tumor-infiltrating PD-1+CD8+ T cells correlates with poor clinical outcome in renal cell carcinoma.</a> Cancer Research. 77 (5), 1075-1082 (2017).</li><li>Badoual, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=PD-1+expressing+tumor-infiltrating+T+cells+are+a+favorable+prognostic+biomarker+in+hpv-associated+head+and+neck+cancer.">PD-1 expressing tumor-infiltrating T cells are a favorable prognostic biomarker in hpv-associated head and neck cancer.</a> Cancer Research. 73 (1), 128-138 (2013).</li><li>Gustavson, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Development+of+an+unsupervised+pixel-based+clustering+algorithm+for+compartmentalization+of+immunohistochemical+expression+using+automated+quantitative+analysis.">Development of an unsupervised pixel-based clustering algorithm for compartmentalization of immunohistochemical expression using automated quantitative analysis.</a> Applied Immunohistochemistry &amp; Molecular Morphology. 17 (4), 329-337 (2009).</li><li>Lu, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Comparison+of+biomarker+modalities+for+predicting+response+to+PD-1/PD-L1+checkpoint+blockade:+a+systematic+review+and+meta-analysis.">Comparison of biomarker modalities for predicting response to PD-1/PD-L1 checkpoint blockade: a systematic review and meta-analysis.</a> JAMA Oncology. 5 (8), 1195-1204 (2019).</li><li>Hernandez, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=PubMed&cmd=Search&doptcmdl=Citation&defaultField=Title+Word&term=Multiplex+immunofluorescence+tyramide+signal+amplification+for+immune+cell+profiling+of+paraffin-embedded+tumor+tissues.">Multiplex immunofluorescence tyramide signal amplification for immune cell profiling of paraffin-embedded tumor tissues.</a> Frontiers in Molecular Biosciences. 8, 667067 (2021).</li></ol>

Die Autoren haben nichts zu verraten.

Die allergische Rhinitis (AR) ist eine nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die durch eine Kombination von Umwelt- und genetischen Faktoren entsteht. Es ist zu einem globalen Gesundheitsproblem geworden, das sich auf die Arbeitseffizienz auswirkt, die Lebensqualität verringert, den Schlaf und die kognitiven Funktionen beeinträchtigt und Reizbarkeit und Müdigkeit verursacht. AR betrifft 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung¹ und verursacht erhebliche wirtschaftliche Kosten, die in den EU-Länd...

Die allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE)1,2 vermittelt wird. Sie ist gekennzeichnet durch Symptome wie Niesen, laufende Nase, verstopfte Nase und Juckreiz in der Nase. Mit der Industrialisierung und Urbanisierung nimmt die Verbreitung von AR allmählich zu und betrifft etwa 10 % bis 20 % der Weltbevölkerung1. Die Immunfluoreszenztechnik (IF) ist eine Fluoreszenzfärbemethode, bei der eine Antikörper-Antigen-Bindungsreaktion verwendet wird. Es kann eingesetzt werden, um die Verteilung und Expression bestimmter Proteine in biologischen Geweben oder Zellen zu erkennen und zu quantifizieren. In der AR-Forschung kann IF mehrere Ziele gleichzeitig erkennen, darunter AR-bezogene Zytokine, Entzündungszellen, Rezeptoren und mehr, was die Erforschung der AR-Pathogenese und der Wirkung von Medikamenten erleichtert 3,4,5,6.
Das mehrfarbige Immunfluoreszenz-Färbeverfahren (mIF) ähnelt stark dem traditionellen IF-Färbeverfahren, wobei bei jeder Färberunde ein Antikörper-Elutionsschritt hinzugefügt wird. Diese Modifikation ermöglicht den gleichzeitigen Nachweis mehrerer Biomarker auf demselben Gewebeschnitt durch sequentielle Einzelmarkierung und mehrere Runden der Re-Färbung. mIF basiert auf der Tyramid-Signalverstärkung (TSA), die wiederholte Zyklen der TSA-Fluoreszenzfärbung und die Verwendung von Mikrowellenheizung zur Entfernung von Antikörpern unter Beibehaltung der Fluoreszenzsignale ermöglicht 7,8. Im Vergleich zu herkömmlichen IF bietet mIF mehrere Vorteile: (1) Es kann schwach exprimierte Antigene nachweisen, die mit konventionellem IF 9,10 nur schwer zu identifizieren sind; (2) Es bietet eine qualitativ hochwertige Färbung mit einem verbesserten Signal-Rausch-Verhältnis; (3) Es ermöglicht die Quantifizierung gewebespezifischer Strukturen und Regionen von Interesse11; (4) Multiplexing mehrerer Signalwege nutzt Gewebe effizient aus und schont begrenzte pathologische Ressourcen12; (5) Die Multiparameter-Analyse mittels mIF bietet tiefere Einblicke in Gewebe und deckt verborgene biologische Informationen auf13.
Insgesamt ermöglicht mIF die Beobachtung verschiedener Antigenexpressionen und -verteilungen innerhalb derselben Probe, was die Untersuchung von Zielproteinen erleichtert. In Zukunft werden Forscher, die die Expression und Verteilung mehrerer Zielproteine verstehen wollen, diese Technik als wertvolle Wahl empfinden. Diese Studie demonstriert die Anwendung von mIF zur Färbung von Nasenschleimhautproben von Ratten mit AR und evaluiert die Etablierung eines Rattenmodells für AR.

<table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always">
	<tbody>
		<tr>
			<td>Al(OH)3</td>
			<td>Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>A7130</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>75% ethanol</td>
			<td>Anhui Yiren An Co., Ltd</td>
			<td>20210107</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ammonia</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2021070101</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anhydrous ethanol</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2022070501</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Anti-fluorescence quenching sealer</td>
			<td>SouthernBiotech</td>
			<td>0100-01</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Automatic dyeing machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>Varistain Gemini ES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Carrier slides</td>
			<td>Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co., Ltd</td>
			<td>220518001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citrate-phosphate buffer&#160;</td>
			<td>Servicebio biotechnology co., Ltd</td>
			<td>G1201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Citric acid antigen repair solution (PH 6.0)</td>
			<td>Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1201</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Nantong Mei Wei De Experimental Equipment Co.</td>
			<td>220518001</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Coverslip</td>
			<td>Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd</td>
			<td>CS01-2450</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>CY3-Tyramide</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1223-50UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>DAPI</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1012</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Decoloring shaker</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>S1010E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>EDTA decalcification solution</td>
			<td>Wuhan Xavier Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>CR2203047</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Electric heating blast dryer&#160;</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td>
			<td>DHG-9240A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding box marking machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>&#160;PrintMate AS</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Embedding machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-P5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fast tissue dewatering machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>STP420 ES</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Film sealer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>Autostainer 360</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>FITC-Tyramide</td>
			<td>Sawell Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>G1222-50UL</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Fluorescence microscope</td>
			<td>Sunny Optical Technology Co.Ltd</td>
			<td>CX40</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Foxp3</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>bs-10211R</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Freezing table</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JB-L5</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat Anti-Rabbit IgG H&#38;L (HRP)</td>
			<td>Liankebio Co., Ltd</td>
			<td>GAR0072</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Goat serum</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BL210A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>H&#38;E staining kit</td>
			<td>Leagene</td>
			<td>DH0020</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hemostatic forceps</td>
			<td>Shanghai Medical Devices Co., Ltd</td>
			<td>J31010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Hydrochloric acid</td>
			<td>Sichuan Xilong Science Co., Ltd</td>
			<td>210608</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Immunohistochemical pen</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>BC004</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Microwave oven</td>
			<td>Midea</td>
			<td>M1-L213B</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Neutral gum</td>
			<td>Sinopharm Group Chemical Reagent Co., Ltd</td>
			<td>10004160</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ovalbumin&#160;</td>
			<td>Sollerbauer Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>A804010</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Oven</td>
			<td>Shanghai Yiheng Scientific Instruments Co., Ltd</td>
			<td>DHG-9240A</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Palm centrifuge</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>D1008E</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Paraformaldehyde</td>
			<td>Beyotime Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>P0099-100ml</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pathology section scanner</td>
			<td>3DHISTECH Kft</td>
			<td>Pannoramic SCAN&#160;</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>PBS buffer</td>
			<td>Biosharp</td>
			<td>G4202</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Pipette&#160;</td>
			<td>Dragon</td>
			<td>KE0003087/KA0056573</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Ror&#947;t</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>DF3196</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Scalpel</td>
			<td>Quanzhou Excellence Medical Co., Ltd</td>
			<td>20170022</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Self-fluorescent quenching agent Sudan Black B</td>
			<td>Bioengineering Co., Ltd</td>
			<td>A602008-0025</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicer</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>HM325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slicing machine</td>
			<td>Thermo scientific</td>
			<td>HM325</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Slide</td>
			<td>Nantong Mewtech Life Science Co., Ltd</td>
			<td>PC2-301</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Sprague Dawley rats</td>
			<td>Sichuan Academy of Traditional Chinese Medicine</td>
			<td>SYX <img alt="Equation 1" src="/files/ftp_upload/65937/65937eq01.jpg" style="margin: auto;" /> 2023-0100</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TICAM-1</td>
			<td>Affinity Biosciences Co., Ltd</td>
			<td>DF6289</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue scissors</td>
			<td>Shanghai Medical Devices Co., Ltd</td>
			<td>J22120</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Tissue spreading baking sheet machine</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JK-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>TYR-690 fluorescent dyes</td>
			<td>Shanghai Rutron Biotechnology Co., Ltd</td>
			<td>RC0086-34RM</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Vortex mixer</td>
			<td>SCILOGEX</td>
			<td>SLK-O3000-S</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Water bath-slide drier</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JK-6</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Wax trimmer</td>
			<td>Wuhan Junjie Electronics Co., Ltd</td>
			<td>JXL-818</td>
			<td></td>
		</tr>
		<tr>
			<td>Xylene</td>
			<td>Chengdu Kolon Chemical Co., Ltd</td>
			<td>2022051901</td>
			<td></td>
		</tr>
	</tbody>
</table>

immunofluorescent labeling in nasal mucosa tissue sections of allergic rhinitis rats via multicolor immunoassay

Allergische Rhinitis (AR) ist eine chronische, nicht-infektiöse entzündliche Erkrankung der Nasenschleimhaut, die hauptsächlich durch spezifisches Immunglobulin E (IgE) vermittelt wird und etwa 10%-20% der Weltbevölkerung betrifft. Während die Immunfluoreszenzfärbung (IF) seit langem eine Standardtechnik zum Nachweis der krankheitsspezifischen Proteinexpression ist, sind herkömmliche IF-Techniken nur begrenzt in der Lage, die Expressionsniveaus von drei oder mehr Proteinen in derselben Probe nachzuweisen. Folglich wurden in den letzten Jahren mehrfarbige IF-Techniken entwickelt, die die gleichzeitige Markierung mehrerer Ziele in Zellen oder Geweben ermöglichen.
Dieses Protokoll bietet einen umfassenden Überblick über den Prozess zur Etablierung eines Rattenmodells der AR, zur Gewinnung von Nasenschleimhautproben und zu den technischen Verfahren für die mehrfarbige Immunfluoreszenz. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase, wobei die Verhaltensbeobachtungen ≥5 Punkte erreichten. Die Hämatoxylin- und Eosinfärbung (H&E) zeigte eine erhöhte Anzahl von Entzündungszellen und eine gestörte Integrität der Nasenschleimhaut in der AR-Gruppe. Die mehrfarbige Immunfluoreszenz (mIF) zeigte eine erhöhte Expression von RORγt und TICAM-1, während die Foxp3-Expression im Nasenschleimhautgewebe von AR-Ratten abnahm.

Sechs SD-Ratten wurden erfolgreich durch intraperitoneale OVA-Injektion und nasale Provokation in das AR-Modell induziert. AR wurde bei allen Ratten in der AR-Gruppe induziert, was 100% der Gruppe ausmachte. Alle Ratten in der AR-Gruppe zeigten typische Symptome wie Niesen, eine laufende Nase und eine juckende Nase. Alle Verhaltensbeobachtungen wurden mit ≥5 Punkten bewertet (Tabelle 2).
Die Ergebnisse der H&E-Färbung am 21. Tag der Modellierung zeigten, dass bei...

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Autor im Rampenlicht: Förderung der Forschung zu allergischer Rhinitis mit mehrfarbiger Immunfluoreszenz

Dieses Protokoll beschreibt eine mehrfarbige Immunfluoreszenztechnik zur Evaluierung des Rattenmodells der allergischen Rhinitis.

Immunfluoreszenz-Markierung in Nasenschleimhaut-Gewebeschnitten von Ratten mit allergischer Rhinitis mittels Multicolor-Immunoassay

Allergic rhinitis (AR) is a chronic, non-infectious inflammatory disease of the nasal mucosa, primarily mediated by specific immunoglobulin E (IgE), ...

Unsere Hauptforschung basiert auf einer Studie über allergische Rhinitis. Unsere Forschung zielt darauf ab, zu analysieren, welche Proteine mit allergischer Rhinitis in Verbindung gebracht werden. Die mehrfarbige Immunfluoreszenz wird derzeit eingesetzt, um die Forschung auf unserem Gebiet voranzutreiben.In zukünftigen Studien werden wir uns auf die möglichen Mechanismen der TCM bei der Behandlung der allergischen Rhinitis konzentrieren.

immunofluorescent-labeling-nasal-mucosa-tissue-sections-allergic

Research

JoVE Journal

Medicine

Immunofluorescent Labeling in Nasal Mucosa Tissue Sections of Allergic Rhinitis Rats via Multicolor Immunoassay

1.5K Aufrufe.  Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine. Unsere Hauptforschung basiert auf einer Studie über allergische Rhinitis. Unsere Forschung zielt darauf ab, zu analysieren, welche Proteine mit allergischer Rhinitis in Verbindung gebracht werden. Die mehrfarbige Immunfluoreszenz wird derzeit eingesetzt, um die Forschung auf unserem Gebiet voranzutreiben.In zukünftigen Studien werden wir uns auf die möglichen Mechanismen der TCM bei der Behandlung der allergischen Rhinitis konzentrieren.

Serie: Autor im Rampenlicht: Förderung der Forschung zu allergischer Rhinitis mit mehrfarbiger Immunfluoreszenz

A Component-resolved Diagnostic Approach for a Study on Grass Pollen Allergens in Chinese Southerners with Allergic Rhinitis and/or Asthma

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen allergens, data on this topic are limited in southern China. Any available data were obtained by self-report questionnaires, skin prick tests, and total or specific IgE tests using crude extracts. For many reasons, these methods are unreliable. Serum sIgE reactivity to Bermuda grass, Timothy grass, and Humulus scandens allergens in a cohort of patients from Greater Guangzhou (southern China&#39;s largest city and its outskirts) with allergic rhinitis and/or asthma were examined using a fully-automated immunoassay analyzer as a component-resolved diagnostics (CRD) tool.
For the first time, a considerably high prevalence of Bermuda grass sIgE positivity was demonstrated in Chinese southerners with allergic rhinitis and/or asthma. In these patients, a subtle prevalence of sensitization to Timothy grass and Humulus scandens was also noted, which may arise from cross-reactivity, as the latter two are not common in the region. This was also supported by the detection of allergen components.
Fully-automated immunoassay analyzers may offer satisfactory consistency between regions, laboratories, and institutions and over time. The automaticity of the instrument may enable a standardized detection that would not have been readily revealed before the advent of CRD.
This is a study that uses a CRD approach to investigate sensitization to grass pollen allergens in southern China. It adds to current evidence in the literature. Future studies are needed to validate these findings. However, although CRD is a useful tool, the findings made with the fully-automated immunoassay analyzer should not substitute for other laboratory investigations, clinical evaluations, and physician expertise.

This work describes a protocol that uses a component-resolved approach to study sensitization to grass pollen allergens in a cohort of patients from southern China with allergic rhinitis and/or asthma.

Ein komponenten-aufgelöster diagnostischer Ansatz für eine Studie auf Gras-Pollen-Allergenen in chinesischen Südländer mit allergischer Rhinitis und / oder Asthma

Sensitization to grass pollen imposes a global risk for allergic airway diseases. Although prevention relies on local investigation of the pollen ...

Forschung

Medizin

Absorption of Nasal and Bronchial Fluids: Precision Sampling of the Human Respiratory Mucosa and Laboratory Processing of Samples

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the human respiratory tract. NA is a non-invasive technique which absorbs fluid from the inferior turbinate, and causes minimal discomfort. NA has yielded reproducible results with the ability to frequently repeat sampling of the upper airway. 
By comparison, alternative methods of sampling the respiratory mucosa, such as nasopharyngeal aspiration (NPA) and conventional swabbing, are more invasive and may result in greater data variability. Other methods have limitations, for instance, biopsies and bronchial procedures are invasive, sputum contains many dead and dying cells and requires liquefaction, exhaled breath condensate (EBC) contains water and saliva, and lavage samples are dilute and variable.
BA can be performed through the working channel of a bronchoscope in clinic. Sampling is well tolerated and can be conducted at multiple sites in the airway. BA results in MLF samples being less dilute than bronchoalveolar lavage (BAL) samples.
This article demonstrates the techniques of NA and BA, as well as the laboratory processing of the resulting samples, which can be tailored to the desired downstream biomarker being measured. These absorption techniques are useful alternatives to the conventional sampling techniques used in clinical respiratory research.

This manuscript describes the use of nasal and bronchial absorption techniques, specifically using synthetic absorptive matrices (SAM) to sample the mucosal lining fluid (MLF) of the upper and lower airway. These methods provide better standardization and tolerability than existing respiratory sampling techniques.

Aufnahme von nasalen und bronchialen Flüssigkeiten: Precision Sampling der menschlichen Atemwege Schleimhaut und Labor Verarbeitung von Proben

The methods of nasal absorption (NA) and bronchial absorption (BA) use synthetic absorptive matrices (SAM) to absorb the mucosal lining fluid (MLF) of the ...

Nanoscopic Imaging of Human Tissue Sections via Physical and Isotropic Expansion

In modern pathology, optical microscopy plays an important role in disease diagnosis by revealing microscopic structures of clinical specimens. However, the fundamental physical diffraction limit prevents interrogation of nanoscale anatomy and subtle pathological changes when using conventional optical imaging approaches. Here, we describe a simple and inexpensive protocol, called expansion pathology (ExPath), for nanoscale optical imaging of common types of clinical primary tissue specimens, including both fixed-frozen or formalin-fixed paraffin embedded (FFPE) tissue sections. This method circumvents the optical diffraction limit by chemically transforming the tissue samples into tissue-hydrogel hybrid and physically expanding them isotropically across multiple scales in pure water. Due to expansion, previously unresolvable molecules are separated and thus can be observed using a conventional optical microscope.

Nanoscale imaging of clinical tissue samples can improve understanding of disease pathogenesis. Expansion pathology (ExPath) is a version of expansion microscopy (ExM), modified for compatibility with standard clinical tissue samples, to explore the nanoscale configuration of biomolecules using conventional diffraction limited microscopes.

Nanoskopische Bildgebung menschlicher Gewebeabschnitte über physikalische und isotrope Expansion

In modern pathology, optical microscopy plays an important role in disease diagnosis by revealing microscopic structures of clinical specimens. However, ...

Multicolor 3D Printing of Complex Intracranial Tumors in Neurosurgery

Three-dimensional (3D) printing technologies offer the possibility of visualizing patient-specific pathologies in a physical model of correct dimensions. The model can be used for planning and simulating critical steps of a surgical approach. Therefore, it is important that anatomical structures such as blood vessels inside a tumor can be printed to be colored not only on their surface, but throughout their whole volume. During simulation this allows for the removal of certain parts (e.g., with a high-speed drill) and revealing internally located structures of a different color. Thus, diagnostic information from various imaging modalities (e.g., CT, MRI) can be combined in a single compact and tangible object.
However, preparation and printing of such a fully colored anatomical model remains a difficult task. Therefore, a step-by-step guide is provided, demonstrating the fusion of different cross-sectional imaging data sets, segmentation of anatomical structures, and creation of a virtual model. In a second step the virtual model is printed with volumetrically colored anatomical structures using a plaster-based color 3D binder jetting technique. This method allows highly accurate reproduction of patient-specific anatomy as shown in a series of 3D-printed petrous apex chondrosarcomas. Furthermore, the models created can be cut and drilled, revealing internal structures that allow for simulation of surgical procedures.

The protocol describes the fabrication of fully colored three-dimensional prints of patient-specific, anatomical skull models to be used for surgical simulation. The crucial steps of combining different imaging modalities, image segmentation, three-dimensional model extraction, and production of the prints are explained.

Mehrfarbiger 3D-Druck komplexer intrakranieller Tumoren in der Neurochirurgie

Three-dimensional (3D) printing technologies offer the possibility of visualizing patient-specific pathologies in a physical model of correct dimensions. ...

Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride (CCl4) Exposure Through an Orogastric Tube

Acute liver injury (ALI) plays a crucial role in the development of hepatic failure, which is characterized by severe liver dysfunction including complications such as hepatic encephalopathy and impaired protein synthesis. Appropriate animal models are vital to test the mechanism and pathophysiology of ALI and investigate different hepatoprotective strategies. Due to its ability to perform chemical transformations, carbon tetrachloride (CCl4) is widely used in the liver to induce ALI through the formation of reactive oxygen species. CCl4 exposure can be performed intraperitoneally, by inhalation, or through a nasogastric or orogastric tube. Here, we describe a rodent model, in which ALI is induced by CCl4 exposure through an orogastric tube. This method is inexpensive, easily performed, and has minimal hazard risk. The model is highly reproducible and can be widely used to determine the efficacy of potential hepatoprotective strategies and assess markers of liver injury.

Inducing Acute Liver Injury in Rats via Carbon Tetrachloride CCl4 Exposure Through an Orogastric Tube

This protocol describes a common and feasible method of inducing acute liver injury (ALI) via CCl4 exposure through an orogastric tube. CCl4 exposure induces ALI through the formation of reactive oxygen species during its biotransformation in the liver. This method is used to analyze the pathophysiology of ALI and examine different hepatoprotective strategies.

Induzieren akute Leberverletzung bei Ratten über Kohlenstofftetrachlorid (CCl4) Exposition durch eine orogastrische Röhre

Acute liver injury (ALI) plays a crucial role in the development of hepatic failure, which is characterized by severe liver dysfunction including ...

Generation of Hypoparathyroid Rats via Carbon-Nanoparticle-Assisted Parathyroidectomy

Hypoparathyroidism (HypoPT) is a rare disease involving the parathyroid glands that is characterized by a reduced secretion or potency of the parathyroid hormone (PTH), which leads to high serum phosphorus levels and low serum calcium levels. HypoPT most commonly results from accidental damage to the glands or their removal during thyroid or other anterior neck surgery. Parathyroid/thyroid surgery has become more common in recent years, with a corresponding rise in the occurrence of HypoPT as a postoperative complication. There is a critical need for a HypoPT animal model to better understand the mechanisms underlying the effects of HypoPT on mineral ion homeostasis and to verify the therapeutic effectiveness of novel treatments. Here, a technique is reported to create acquired HypoPT in male rats by performing parathyroidectomy (PTX) using carbon nanoparticles. The rat model shows great promise over the mouse models of hypoparathyroidism.&#160;Importantly, the human PTH receptor binding region has an 84.2% sequence similarity with that of the rat, which is higher than the 73.7% similarity shared with mice. Moreover, the effects of estrogen, which can affect the PTH/PTHrP receptor signaling pathway, have not been fully investigated in male rats. Carbon nanoparticles are lymphatic tracers that stain the thyroid lymph nodes black without affecting their function, but they do not stain the parathyroid glands, which makes them easy to identify and remove. In this study, serum PTH levels were undetectable after PTX, and this resulted in significant hypocalcemia and hyperphosphatemia. Thus, the clinical state of postoperative HypoPT can be remarkably represented in the rat model. Carbon-nanoparticle-assisted PTX can, therefore, serve as an extraordinarily effective and readily implementable model for studying the pathogenesis, treatment, and prognosis of HypoPT.

Generation of Hypoparathyroid Rats via Carbon-Nanoparticle-Assisted Parathyroidectomy

An animal model of acquired hypoparathyroidism (HypoPT) is crucial to understanding how HypoPT affects mineral ion homeostasis and to verify the effectiveness of novel treatments. Here, a technique is presented to generate an acquired hypoparathyroidism (AHypoPT) rat model by parathyroidectomy (PTX) using carbon nanoparticles.

Generierung von hypoparathormonellen Ratten mittels Kohlenstoff-Nanopartikel-assistierter Parathyreoidektomie

Hypoparathyroidism (HypoPT) is a rare disease involving the parathyroid glands that is characterized by a reduced secretion or potency of the parathyroid ...

Innovative Lungenbildgebung mit Agarose-eingebetteten Vibratomschnitten

Automated Vibratome Sectioning of Agarose-Embedded Lung Tissue for Multiplex Fluorescence Imaging

Due to its inherent structural fragility, the lung is regarded as one of the more difficult tissues to process for microscopic readouts. To add structural support for sectioning, pieces of lung tissue are commonly embedded in paraffin or OCT compound and cut with a microtome or cryostat, respectively. A more recent technique, known as precision-cut lung slices, adds structural support to fresh lung tissue through agarose infiltration and provides a platform to maintain primary lung tissue in culture. However, due to epitope masking and tissue distortion, none of these techniques adequately lend themselves to the development of reproducible advanced light imaging readouts that would be compatible across multiple antibodies and species. 
To this end, we have developed a tissue-processing pipeline, which utilizes agarose embedding of fixed lung tissue, coupled to automated vibratome sectioning. This facilitated the generation of lung sections from 200 &#181;m to 70 &#181;m thick, in mouse, pig, and human lungs, which require no antigen retrieval, and represent the least "processed" version of the native isolated tissue. Using these slices, we reveal a multiplex imaging readout capable of generating high-resolution images whose spatial protein expression can be used to quantify and better understand the mechanisms underlying lung injury and regeneration.

Autor im Rampenlicht: Untersuchung der räumlichen Proteinexpression anhand von Agarose-eingebetteten Lungengewebeschnitten 

We have developed a tissue-processing technique utilizing a vibratome and agarose-embedded lung tissue to generate lung sections, thereby permitting the acquisition of high-resolution images of lung architecture. We employed immunofluorescence staining to observe spatial protein expression using specific lung structural markers.

Automatisierter Vibratomschnitt von Agarose-eingebettetem Lungengewebe für die Multiplex-Fluoreszenzbildgebung

Due to its inherent structural fragility, the lung is regarded as one of the more difficult tissues to process for microscopic readouts. To add structural ...