Generierung von hypoparathormonellen Ratten mittels Kohlenstoff-Nanopartikel-assistierter Parathyreoidektomie

Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, ein Rattenmodell für erworbenen Hypoparathyreoidismus zu erstellen, das leicht zu etablieren, charakterstabil und für die Schilddrüse harmlos ist. Der Hauptvorteil dieses Modells ist die präzise Entfernung von Nebenschilddrüsen mit Hilfe von Kohlenstoff-Nanopartikeln. Wir hoffen, dass das Modell dazu beitragen kann, einige Fragen im Bereich des Hypoparathyreoidismus zu lösen.

Zum Beispiel die präoperative Einnahme von Kalzium und Vitamin D, um das Risiko einer Hypokalzämie nach Thyreoidektomie zu verringern. Diese Methode kann Aufschluss darüber geben, wie der Knochenumsatz durch PTH-Analoga beeinflusst wird und wie sich PTH-Analoga bei langfristiger Anwendung auf den Körper auswirken. Diejenigen, die diese Technik zum ersten Mal anwenden, können Schwierigkeiten haben, sie unter dem Stereomikroskop zu manipulieren.

Etwas Übung unter dem Stereomikroskop kann hilfreich sein. Legen Sie die betäubte Ratte zunächst in Rückenlage und rasieren Sie das Fell der ventralen Halsregion. Nachdem Sie einen Schnitt gemacht haben, wie im Manuskript beschrieben, lokalisieren Sie die Schilddrüsenlappen.

Injizieren Sie mit einer 10-Mikroliter-Spritze, die mit einer 30-Gauge-Fasennadel ausgestattet ist, einen Mikroliter der Kohlenstoff-Nanopartikel-Suspension in den mesialen Teil der Schilddrüsenmembran. Spülen Sie die Region nach fünf Minuten mit Kochsalzlösung, um überschüssige Suspensionen zu entfernen. Stellen Sie sicher, dass sich die Schilddrüsen schwarz verfärbt haben, und beobachten Sie die unverfärbte Nebenschilddrüse.

Schneiden Sie die unverfärbten Nebenschilddrüsen mit einer mikrochirurgischen Pinzette und Schere ab und verschließen Sie dann den Schnitt mit einer unterbrochenen horizontalen Matratzennaht. Legen Sie die Ratten nach der Operation auf eine thermostatische Heizdecke bei 37 Grad Celsius, um ihre Körpertemperatur aufrechtzuerhalten. Nach sieben Tagen werden 10 Mikroliter Blut über die Schwanzvene entnommen.

Messen Sie das Serumkalzium, den anorganischen Phosphor im Serum und das Parathormon im Serum mit handelsüblichen Kits. Die Ratten mit Parathyreoidektomie zeigten über den Beobachtungszeitraum von vier Wochen eine stabile Hypokalzämie und Hyperphosphatämie. Das Serum-Parathormon war bei den Ratten mit Parathyreoidektomie sieben Tage nach der Operation nicht nachgewiesen.

Der Serumharnstoff und das Kreatinin waren sieben Tage nach der Operation zwischen der Schein- und der Parathyreoidektomiegruppe vergleichbar. Zwei Wochen nach der Operation wurden reduzierte Kalziumionen und anorganische Phosphatwerte im Urin beobachtet. Es wurden keine signifikanten Unterschiede im Körpergewicht zwischen der Parathyreoidektomie und der Scheingruppe über 28 Tage beobachtet.

Das Serum-C-Telopeptid nahm bei Ratten mit Parathyreoidektomie signifikant ab. Es zeigten sich keine signifikanten Unterschiede in den Serum-Osteocalcin-Spiegeln. Die Injektion von Nanopartikel-Suspensionen ist jedoch das Wichtigste, und eine erfolgreiche Injektion ist entscheidend für die Identifizierung und vorhandene Entfernung der Nebenschilddrüsen.

Weitere Methoden sind die fluoreszenzgesteuerte Chirurgie, die Diphterientoxin-Injektion von PTHcre-iDTR-transgenen Mäusen und die sterile Parathyreoidektomie, die zur Beantwortung von Fragen im Bereich der Hyperthyreose beitragen könnte.