Automatisierter Vibratomschnitt von Agarose-eingebettetem Lungengewebe für die Multiplex-Fluoreszenzbildgebung

Dieses Protokoll ist besonders nützlich bei großen Tiermodellen für Lungentransplantation und -regeneration, wie z. B. Schweinen, bei denen wir im Laufe der Zeit kleine Stücke beproben können. Diese Technik kann uns helfen, die räumliche Biologie, die in diesen Modellen eine Rolle spielt, besser zu verstehen. Diese Technik erzeugt minimal bearbeitete Lungenschnitte, die für die Immunfluoreszenzbildgebung geeignet sind, ohne dass eine Antigengewinnung erforderlich ist, und hat sich bei allen bisher getesteten Antikörpern als wirksam erwiesen.

Dieses Verfahren kann angepasst werden, um etwas dickere Abschnitte, z. B. etwa einen Millimeter, zu schneiden, die dann in der Lichtblattfluoreszenzmikroskopie verwendet werden können, um die räumliche Proteinexpression in einem dreidimensionaleren Volumen zu untersuchen. Unsere Forschung untersucht Faktoren, die die Abstoßung von Lungentransplantaten beeinflussen, und entwickelt Therapien, um die Abstoßung mit unserem Schweinemodell zu reduzieren. Diese Technik hilft, räumliche Proteinveränderungen zu verstehen, die sich auf die Transplantationsergebnisse nach der Operation auswirken.

Wir verwenden diese Technik derzeit, um die räumliche Proteinexpressionslandschaft in unserem Schweinelungentransplantationsmodell zu untersuchen. Wir hoffen, dass es uns helfen wird, die Mechanismen hinter unseren experimentellen Therapien besser zu verstehen. Der Schlüssel zum Erfolg liegt hier in Vibratomsichtungen, hohe Blattamplituden und niedrigere Kraftgeschwindigkeiten sind wichtige Dinge, auf die man achten sollte, wenn die Sektion schlecht läuft.