Um die Bio-Tintenlösung herzustellen, mischen Sie eine geeignete Menge C3A-Zellsuspension mit der sterilisierten gelMA-Lösung. Die C3A-Zellsphäroide 20 Minuten lang bei 37 Grad mit zwei mikromolaren Zell-Tracker-Lösungen vorfärben. Um die Zellen zu waschen, entfernen Sie zunächst das Supernatin durch Zentrifugieren und fügen Sie dann frisches Zellkulturmedium hinzu.
Geben Sie mindestens zwei Milliliter Biotinte in die sterilisierte Kammer des akustischen Geräts. Schalten Sie den Funktionsgenerator und den Leistungsverstärker ein, um die Betätigung jedes PZT-Wandlers zu initiieren und ein 3D-Array von Zellaggregaten zu erzeugen. Vernetzen Sie die Biotinte 30 Sekunden lang mit blauem Licht, um 3D-Hydrogel-Gerüste zu erstellen, die die zusammengesetzten Zellaggregate akustisch einkapseln.
Als nächstes überführen Sie das 3D-Hydrogel-Gerüst vorsichtig aus der Kammer in eine Petrischale. Schneiden Sie es mit einem sauberen Rasiermesser in kleine Stücke und geben Sie dann Zellkulturmedium in die Petrischale. Inkubieren Sie die C3A-Zellsphäroide zu verschiedenen Kulturzeitpunkten in einem Milliliter PBS mit einem Mikroliter Calcium am und zwei Mikrolitern Propidiumiodid für 15 Minuten bei 37 Grad Celsius.
Spülen Sie die in Hydrogel-Gerüste eingebettete Probe zweimal mit PBS. Bei gewonnenen Sphäroiden fünf Minuten lang bei 200 g zentrifugieren und zweimal mit PBS waschen. Beobachten Sie mit einem Fluoreszenzmikroskop die Sphäroide und nehmen Sie die Bilder auf.
Die Zellaggregate wurden im regulären 3D-Punkt-Array-Muster mit einem grün fluoreszierenden Signal angeordnet. Die zusammengesetzten C3A-gelMA-Aggregate integrierten sich allmählich und bildeten bis zum dritten Tag dichte Sphäroide, begleitet von einer Zunahme des Sphäroiddurchmessers. Die Lebensfähigkeit der Zellsphäroide blieb vor dem dritten Tag gut, nahm aber nach einer Woche Kultur leicht ab.
Die freigesetzten Sphäroide behielten eine gute sphärische Morphologie mit einer engen Größenverteilung sowie einer wünschenswerten Lebensfähigkeit und Expression von Albumin bei.
