Um die Bradford-Assay-Daten aus den mit der Smartphone-Kamera aufgenommenen Bildern der Mikroplatte zu extrahieren, laden Sie das Software-Image J und das ReadPlate-Plugin herunter, das als Textdatei verfügbar ist. Nachdem Sie Bild J geöffnet haben, klicken Sie auf Plugins, gefolgt von Installieren, und wählen Sie die heruntergeladene ReadPlate-Plugin-Textdatei aus. Stellen Sie die Messparameter ein, indem Sie auf Analysieren und dann auf Messungen festlegen klicken und die Optionen aktivieren: Fläche, Standardabweichung, Minimaler und maximaler Grauwert, Mittlerer Grauwert, Modaler Grauwert.
Legen Sie am unteren Rand des Fensters Umleiten auf Keine und Dezimalstelle auf Null bis 9 auf 3 fest. Gehen Sie zu Datei. Klicken Sie auf Öffnen und wählen Sie das Bild der Mikroplatte aus, das mit dem Smartphone aufgenommen wurde.
Gehen Sie zu Plugins und dann zu ReadPlate. Lesen Sie die Anweisungen, und klicken Sie dann auf OK. Wählen Sie die Anzahl der Wells als 96 aus. Erstellen Sie mit dem rechteckigen Auswahlwerkzeug, das automatisch vom Plugin geladen wird, ein Rechteck, das in der Mitte des A1-Wells beginnt und in der Mitte des H12-Wells endet, und klicken Sie dann auf OK. Wählen Sie den blauen Kanal aus und klicken Sie auf OK. Bestätigen Sie anschließend die Standardparameter mit einem Klick auf OK. Überprüfen Sie, ob die Software einen Bereich in jeder Vertiefung abgegrenzt hat und ob die ausgewählten Bereiche keine Bereiche mit abnormalen Schatten oder Reflexionen abdecken.
Sobald diese Option aktiviert ist, klicken Sie auf OK. Speichern Sie die Ergebnisse, bevor Sie sie für den grünen Kanal wiederholen. Berechnen Sie das Blau-Grün-Verhältnis mit dem Modus für jede Farbe. Die RGB-Farbdaten, die automatisch aus dem Bild einer Mikroplatte gewonnen wurden, zeigten den typischen Anstieg der Blauwerte und einen Rückgang der Rot- und Grünwerte für den BSA-Standard.
Darüber hinaus spiegelten die aus dem Bild extrahierten Farbdaten genau die Absorptionswerte wider, die bei 450 und 590 Nanometern aufgezeichnet wurden. Die Standardkurve, die mit den extrahierten Farbdaten erhalten wurde, die das Signal in Abhängigkeit von der BSA-Konzentration darstellen, erwies sich als erwartungsgemäß linear. Eine lineare Beziehung zwischen der Probenverdünnung und dem Signal wurde sowohl für die Absorptionswerte als auch für die extrahierten Farbdaten in zwei verschiedenen Proteinproben erhalten.
Bei beiden Proteinproben lagen einige der Verdünnungen nicht im linearen Bereich der Standardkurve. Nach Außerachtlassung dieser Punkte stimmten die Proteinwerte, die mit RGB-Daten für beide Proben berechnet wurden, mit denen überein, die mit den Absorptionswerten berechnet wurden.
