Beginnen Sie mit der Injektion von C6-Gliomzellen in die oberflächlichen Gehirnbereiche von Mäusen, um ein Mausmodell des Glioblastoms zu erstellen. Befestigen Sie dann eine Kopfstange im Schädelfenster und lassen Sie die Mäuse sich erholen. Injizieren Sie anschließend fluoreszenzmarkierte Nanopartikel intravenös in die Maus, um eine Zwei-Photonen-Bildgebung im Gehirn durchzuführen.
Schalten Sie sofort den Ti:Saphir-Laser und den Hauptsystemschalter ein. Starten Sie dann die Prairie View-Software. Jetzt die Maus unter dem Zwei-Photonen-Mikroskop auf einem benutzerdefinierten Tisch ruhigstellen.
Legen Sie das Tier in Bauchlage auf ein Heizkissen und sichern Sie es mit dem Klebeband, ohne den Brustkorb einzuengen. Geben Sie einen Tropfen Wasser in das Schädelfenster und stellen Sie den Fokus ein. Um die Herzfrequenz und die Sauerstoffversorgung des Blutes zu überwachen, positionieren Sie den Sensor an der Hinterpfote.
Passen Sie die Kopfposition an. Suchen Sie mit dem RFP-Filter das gewünschte Imaging-Feld. Sobald die Probenausrichtung und das zu sehende Sichtfeld bestimmt sind, schalten Sie das Mikroskop vom Weitfeldmodus in den Lichtscanning-Mikroskopiemodus um.
Stellen Sie sicher, dass der Ti:Saphir-Laser bei 920 Nanometern im Modus gesperrt ist, und öffnen Sie alle Verschlüsse. Stellen Sie die PMT-Spannungen auf 500 bis 600 Volt ein. Drücken Sie in der Software auf Live-Bild, um die Bildgebung zu starten.
Nachdem Sie ein klares Bild erzielt haben, verwenden Sie die Software und den motorisierten Tisch, um den oberen und unteren Rand eines Bildstapels in der Software festzulegen. Erhöhen Sie langsam die Pockels oder die PMT-Verstärkung, um die Dunkelheit in zunehmender Tiefe auszugleichen. Legen Sie einen Speicherpfad fest und starten Sie die Z-Serie.
Sobald der Stapel fertig ist, verwenden Sie die Wiedergabe, um den Stapel auf Qualität zu überprüfen. Sobald die Bildgebung abgeschlossen ist, bringen Sie das Tier in einen Auffangkäfig. Beenden Sie die Prairie-Ansicht, stellen Sie sicher, dass alle Daten gespeichert und übertragen wurden, und fahren Sie dann den Computer und die gesamte Hardware herunter.
Eine begrenzte Anzahl von Partikeln wurde extravasiert und ist 10 Minuten nach der Verabreichung der Nanopartikel in der Nähe der Tumorzellen sichtbar. 24 Stunden nach der Verabreichung von Nanopartikeln ist jedoch eine Fülle von Partikeln im Glioblastom sichtbar, was auf eine Extravasation hindeutet.
